目的:探讨HIF-1α、CYPJ在舌鳞癌细胞(TSCC)中的作用及意义，并进一步研究热疗对HIF-1α、CYPJ的调控作用。方法:收集TSCC患者癌组织及癌旁正常组织标本80例，采用免疫组化、蛋白印迹、荧光定量PCR检测各标本中HIF-1α、CYPJ的表达及其与临床病理特征之间的关系。采用qPCR、蛋白印迹检测Cal-27细胞在常氧及乏氧状态下以及用42℃热疗、化疗及热化疗处理时HIF-1α、CYPJ的表达情况。细胞划痕检测细胞迁移，流式细胞术检测细胞凋亡。结果:HIF-1α、CYPJ蛋白在TSCC患者肿瘤组织中的表达水平高于相应的癌旁组织；且二者表达升高与TSCC患者肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移等相关(均 P<0.05)，与性别、年龄无关(均 P>0.05)。Cal-27细胞中HIF-1α、CYPJ表达水平在乏氧微环境中升高(均 P<0.05)，且单独热疗也促进其表达(均 P<0.05)。相比于单独热疗及化疗，热化疗联合使用在明显抑制二者的表达的同时抑制细胞迁移并促进细胞凋亡(均 P<0.05)。 结论:HIF-1α、CYPJ是TSCC肿瘤发生和预后的一个潜在生物标志物，且热疗后肿瘤复发可能源于热疗触发了HIF-1α表达，其通过激活下游靶基因促使适应热处理的肿瘤细胞生长存活，而热疗联合化疗可能是治疗TSCC一种比较有前景的治疗方案。

本研究旨在观察肝癌大鼠模型经射频消融术后乏氧微环境中缺氧诱导因子(HIF)-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-9、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响，现报道如下。

目的:研究低氧刺激慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）与正常鼻黏膜上皮细胞炎性因子的变化与异同，探讨其在CRSwNP发病机制中的作用。方法:选择2015年6月至2018年1月在吉林大学中日联谊医院就诊的68例CRSwNP患者，其中男性36例，女性32例，年龄（45.2±12.5）岁（ xˉ±s，下同），患者的鼻息肉黏膜纳入慢性鼻窦炎鼻息肉组（CRS-NP组），下鼻甲黏膜纳入慢性鼻窦炎下鼻甲组（CRS-IT组），并根据组织病理学结果进一步分成嗜酸粒细胞浸润及非浸润两种类型，即嗜酸粒细胞浸润性鼻息肉组（Eos-NP组， n=34）、非嗜酸粒细胞浸润性鼻息肉组（Non-Eos-NP组， n=34）、嗜酸粒细胞浸润性鼻息肉患者的下鼻甲组（Eos-IT组， n=20）和非嗜酸粒细胞浸润性鼻息肉患者的下鼻甲组（Non-Eos-IT组， n=20）；同期25例鼻窦囊肿或鼻中隔偏曲患者的下鼻甲黏膜作为对照组（ n=25），其中男性14例，女性11例，年龄（42.8±10.2）岁。免疫组织化学染色分析各组黏膜上皮组织中白细胞介素（IL）17A、干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）与乏氧诱导因子（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）的表达情况。酶联免疫吸附试验检测低氧刺激0、24和48 h后各组原代鼻黏膜上皮细胞分泌IL-17A、IFN-γ和TNF-α的差异；免疫荧光、固态光源高内涵与免疫印记实验检测原代鼻黏膜上皮细胞HIF-1α的表达情况。应用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析，采用双向方差分析作为主要统计学方法。 结果:免疫组织化学染色结果显示，IL-17A和TNF-α在对照组中表达最高（光密度值分别为0.37±0.03、0.53±0.02），IFN-γ和HIF-1α在Eos-IT组中表达最高（光密度值分别为0.47±0.03、0.39±0.02）。未接受低氧刺激时，IL-17A与TNF-α在对照组中水平较低；低氧刺激48 h后，对照组的IL-17A与TNF-α分泌量明显高于其他各组。未接受低氧刺激时，Eos-NP组分泌的IFN-γ明显高于对照组［（13.7±1.3）pg/ml比（11.1±1.6）pg/ml， P<0.05］；低氧刺激48 h后，IFN-γ在对照组和Eos-NP组中的分泌量没有显著区别。对照组与CRS-IT组表达的HIF-1α随低氧时间延长而增加，Eos-NP组与Non-Eos-NP组表达的HIF-1α随低氧时间延长而减少。对照组与CRS-IT组HIF-1α主要表达于鼻黏膜上皮细胞的细胞质内，CRS-NP组HIF-1α主要表达于鼻黏膜上皮细胞的细胞核内。 结论:低氧刺激下，CRSwNP患者的鼻息肉、下鼻甲与正常鼻黏膜上皮细胞中IL-17A、TNF-α、IFN-γ的分泌以及HIF-1α的表达水平存在差异，且呈现不同的亚细胞定位，提示其可能参与了CRSwNP发病相关基因的转录与调控。

目的:探讨神经母细胞瘤(NB)复发过程中长链非编码RNA(lncRNA) LINC01355的表达及作用机制。方法:在TARGET数据库检索NB数据集，进行差异表达分析筛选差异表达的lncRNA并进行生物信息学分析。荧光实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测20例原发NB组织及10例复发NB组织中部分差异分子的表达，对数据库结果进行验证，组间比较采用 t检验。 结果:LINC01355在复发NB组织中表达水平(1.935±1.242)明显低于原发肿瘤组织(6.800±5.107， Z＝3.395， P<0.01)。将患者按LINC01355表达的中位数分为两个亚组，并使用Kaplan-Meier方法估算这两个亚组的总生存时间，结果表明，LINC01355高表达对应患者预后情况较好( χ2＝6.002， P<0.05)。应用Starbase 3.0数据库分析LINC01355的靶基因及功能，GO富集分析结果显示LINC01355调控的靶基因参与了自噬调节、神经元凋亡过程、类固醇生物合成等过程；京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示LINC01355及其靶基因参与了乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路的调控。对LINC01355及其靶基因法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1) mRNA在原发及复发NB组织中表达进行验证，结果发现复发NB组织中LINC01355表达(0.926±0.223)低于原发肿瘤(2.695±1.036， t＝-5.294， P<0.01)；复发NB组织中FDFT1 mRNA表达(3.989±1.996)高于原发肿瘤(1.505±0.680， t＝5.079， P<0.01)；在原发及复发NB组织中LINC01355与FDFT1 mRNA表达呈负相关( rs＝-0.826、-0.900， P<0.01)。 结论:LINC01355可用于预测NB患者的预后，与肿瘤复发有关。LINC01355的表达降低导致FDFT1表达增高可能是NB复发的重要原因。

解偶联蛋白(UCP)属于线粒体内膜上的线粒体载体蛋白家族，主要包括UCP1、UCP2和UCP3等。研究表明，UCP通过脂质褐变过程参与恶性肿瘤的发生发展。肿瘤细胞分泌锌-α2-糖蛋白刺激过氧化物酶体增殖物激活受体，诱导脂质褐变并表达UCP1，促进肿瘤的生长。磷脂酶C样蛋白1可上调UCP1表达，消耗异常脂质，使肿瘤细胞集落形成能力降低，抑制肿瘤的迁移和侵袭。另外，肿瘤抑制因子p53的辅助因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1β能增强p53缺乏的脂肪细胞中UCP1的表达，UCP2的上调有助于肿瘤细胞逃避p53介导的细胞凋亡，激活活性氧系统，增强肿瘤的活力和增殖能力。

目的:探索巨噬细胞在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中的作用、机制和治疗价值。方法:通过给予8周龄雄性Alms突变( foz/ foz)小鼠高脂饮食6、8和10周，给予8周龄雄性C57BL/6小鼠蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食7 d、3周和4周分别构建NASH小鼠模型，对照组小鼠分别给予普通饮食和MCD对照饮食。采用荧光定量聚合酶链反应方法检测NASH模型小鼠和对照组小鼠肝脏的 F4/80 mRNA水平，采用免疫荧光染色观察对照组小鼠和NASH模型小鼠肝脏中的巨噬细胞。lysM-Cre/DTR转基因小鼠予MCD饮食5周后，分为转基因实验组(给予白喉毒素清除巨噬细胞)和转基因对照组(给予磷酸盐缓冲液注射)。检测转基因实验组和转基因对照组小鼠肝脏中的甘油三酯水平和脂质过氧化物水平，并对小鼠的肝脏组织进行炎症评分。通过细胞因子分析实验和蛋白质印迹法分析巨噬细胞调节NASH中炎症的作用机制。通过AML-12肝细胞和RAW264.7巨噬细胞条件培养基与细胞共培养观察肝细胞和巨噬细胞的相互作用。通过氯膦酸脂质体清除野生型和NASH模型小鼠中的巨噬细胞，证实其在NASH预防中的价值。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:NASH模型 foz/ foz小鼠高脂饮食饲养6、8和10周时肝脏中的 F4/80 mRNA水平均高于对照组小鼠(1.49±0.19、1.70±0.15、1.93±0.04比1.05±0.22)，差异均有统计学意义( t＝3.06、4.92、7.92，均 P<0.05)；NASH模型小鼠MCD饮食饲养7 d和3周时肝脏中的 F4/80 mRNA水平均高于对照组小鼠(2.70±0.99和3.08±1.71比1.00±0.83)，差异均有统计学意义( t＝3.43、3.54，均 P<0.01)；免疫荧光染色结果显示，与对照组比较，NASH模型小鼠MCD饲养4周时肝脏中F4/80 +诱导型一氧化氮合酶(iNOS) +的M1型巨噬细胞增多，F4/80 +CD206 +的M2型巨噬细胞明显减少。巨噬细胞清除后转基因实验组小鼠的炎症评分、肝脏甘油三酯和脂质过氧化物水平均低于转基因对照组[(0.69±0.32)分比(1.95±0.74)分、(43.97±13.24) g/mg比(63.09±14.85) g/mg、(24.84±6.21) nmol/mg比(37.91±8.91) nmol/mg]，差异均有统计学意义( t＝3.14、2.72、2.41，均 P<0.05)。细胞因子分析实验结果显示，巨噬细胞清除可显著降低血液中白细胞介素(IL)-12和巨噬细胞炎症蛋白-1α的蛋白质水平(差异倍数分别为-3.98、-2.74，均 P<0.05)。转基因实验组小鼠细胞核中CCAAT/增强子结合蛋白β蛋白质减少。体外研究发现RAW264.7巨噬细胞条件培养基可促进AML-12肝细胞中脂肪聚集；MCD培养基处理的AML-12肝细胞条件培养基可促进RAW264.7巨噬细胞向M1型极化。经氯膦酸脂质体处理后的野生型小鼠肝脏中的甘油三酯和脂质过氧化物的蛋白质表达水平均低于MCD诱导的NASH模型小鼠[(45.33±14.59) g/mg比(63.10±16.02) g/mg、(2.11±0.48) nmol/mg比(2.73±0.17) nmol/mg]，差异均有统计学意义( t＝2.84、2.73，均 P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，经氯膦酸脂质体处理后的NASH模型小鼠肝脏中的磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶、肌醇需求酶-1α、蛋白质二硫键异构酶、葡萄糖调节蛋白78、磷酸化真核起始因子2α的蛋白质相对表达量均低于未经氯膦酸脂质体处理的NASH模型小鼠(1.84±0.36比3.05±0.83、1.50±0.84比6.65±1.47、0.87±0.12比2.28±0.52、1.68±0.43比4.76±1.13、1.42±0.19比2.75±0.79)，差异均有统计学意义( t＝2.32、5.28、4.56、4.41、2.85，均 P<0.05)。 结论:NASH中巨噬细胞发生M1型极化，并与肝细胞相互作用促进炎症因子分泌、脂肪合成因子上调、氧化应激和内质网应激，引起NASH进展。巨噬细胞清除剂氯膦酸脂质体是预防NASH潜在的新途径。

目的:探究改良St. Thomas灌注液预灌注对犬骨骼肌缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用及机制。方法:2021年3月-2021年9月，在解放军东部战区空军医院实验手术室，将16只比格犬通过随机数字表法分为对照组、IRI组、IRI加生理盐水（IRI+NS）组和改良St. Thomas组，每组4只,构建犬骨骼肌IRI模型，通过预灌注改良St. Thomas灌注液[氯化钾（KCl）、硫酸镁（MgSO 4）以及NaHCO 3（pH调整）]，监测犬生命体征，通过苏木素-伊红（HE）染色、电镜检测和组织湿/干重比探究犬骨骼肌病理损伤，通过标记血管和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）检测其血管密度和乏氧表现。构建L6鼠成肌细胞IRI模型，预孵育St. Thomas灌注液各组分，探究对细胞增殖抑制的影响，并通过检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、F2异前列腺素（F2-isoprostane）、白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、髓过氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等探究其保护机制。采用统计软件SPSS 23.0进行统计学处理， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:改良St. Thomas组犬生命体征较稳定，多巴胺维持量少，腓肠肌组织病理结构趋于完整，组织细胞及线粒体肿胀明显缓解，组织湿/干重比小于IRI组（ P=0.046）。预孵育治疗剂量的MgSO 4或NaHCO 3，细胞增殖率大于IRI组（ P<0.01、 P=0.005），NADPH（ P=0.004、 P=0.01）、F2-isoprostane（ P<0.001、 P=0.01）、IL-1β（ P=0.02、 P=0.015）、TNF-α（ P<0.01、 P<0.01）、MPO（ P<0.01、 P<0.01）均较IRI组下降，GSH-Px较IRI组升高（ P<0.01、 P<0.001）。 结论:预灌注改良St. Thomas灌注液，可在短期内使犬生命体征趋于平稳，灌注液可能通过抗炎、抗氧化应激，改善骨骼肌细胞状态，改善组织缺氧，减轻骨骼肌组织细胞损伤。

目的:观察交配型转换/蔗糖不发酵(SWI/SNF)复合体调节亚基Brahma相关基因-1(Brg-1)对结直肠癌血管生成的影响。方法:对结肠癌细胞系LoVo细胞感染sh-Brg-1慢病毒(Lenti-sh-Brg-1组)和对照病毒(Lenti-con组)，通过蛋白质印迹法(Western blot)及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测常氧及乏氧状态下乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的蛋白和mRNA水平的变化，运用体外微管形成实验观察低表达Brg-1对结直肠癌血管形成的影响，组间比较采用 t检验。 结果:Western blot结果证明，与Lenti-con组比较，Lenti-sh-Brg-1组细胞中Brg-1蛋白表达量明显降低。在常氧及乏氧状态下低表达Brg-1可以明显降低HIF-1α及VEGF-A在蛋白表达量。在常氧状态下，Lenti-sh-Brg-1组细胞Brg-1(con 1.00±0比sh-Brg-1 0.53±0.08， t＝5.292， P<0.01)，HIF-1α(con 1.00±0比sh-Brg-1 0.61±0.07， t＝5.380， P<0.01)，VEGF-A mRNA水平低于Lenti-con组(con 1.00±0比sh-Brg-1 0.38±0.10， t＝6.169， P<0.01)；在乏氧状态下，Lenti-sh-Brg-1组细胞Brg-1(con 1.00±0比sh-Brg-1 0.07±0.02， t＝44.680， P<0.01)，HIF-1α(con 1.00±0比sh-Brg-1 0.21±0.05， t＝14.280， P<0.01)，VEGF-A mRNA水平低于Lenti-con组(con 1.00±0比sh-Brg-1 0.15±0.06， t＝13.960， P<0.01)。最后证实在常氧和乏氧条件下，Brg-1低表达细胞条件培养基组的人脐静脉内皮细胞体外成管数目低于对照组(常氧，con 55.67±7.22比sh-Brg-1 22.33±5.36， t＝3.706， P<0.05；乏氧，con 66.33±7.62比sh-Brg-1 35.68±4.91， t＝3.382， P<0.05)。 结论:在LoVo细胞系中低表达Brg-1可以通过下调HIF-1α抑制血管形成。

探究良方温经汤调控卷曲螺旋卷曲螺旋结构域4(CHCHD4)表达干预寒凝血瘀型子宫内膜异位症(EMs)乏氧环境的机制.冰水浴法制备大鼠寒凝血瘀证模型,在此基础上采用自体移植法建立EMs模型,随机分为模型组,良方温经汤低、中、高(4.7、9.4、18.8 g·kg-1)剂量组及少腹逐瘀汤组,另设假手术组,每组10只,灌胃给药4周.造模期间进行大鼠一般情况观察及阴道涂片,并通过激光散斑衬比成像(LSCI)检测耳部及子宫血流,以判断寒凝血瘀证候情况;给药结束后观察大鼠一般情况;卡尺测量异位病灶面积;免疫组织化学法检测CHCHD4、乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的定位与表达;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹检测CHCHD4、HIF-1α mRNA和蛋白的表达.进行EMs患者异位子宫内膜间质细胞(ESCs)原代培养,构建CHCHD4过表达质粒,转染建立CHCHD4过表达ESCs模型.将细胞分为空白对照组、CHCHD4过表达组、CHCHD4过表达+空白血清组、CHCHD4过表达+良方温经汤血清组,蛋白免疫印迹检测CHCHD4、HIF-1α蛋白的表达;并检测葡萄糖消耗量及乳酸水平;MTT法检测细胞增殖情况.结果显示,与正常大鼠相比,造模大鼠出现精神萎靡、饮食饮水减少、动情周期紊乱,耳部及子宫微血管血液循环受阻等寒凝血瘀证候表征.与假手术组相比,模型组大鼠异位病灶隆起,CHCHD4、HIF-1α mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05);与模型组相比,各给药组大鼠寒凝血瘀表征均有改善,异位病灶面积显著缩小(P＜0.05或P＜0.01),CHCHD4、HIF-1α mRNA与蛋白表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01).在细胞模型中,与空白对照组相比,CHCHD4过表达组CHCHD4、HIF-1α蛋白表达、葡萄糖消耗量、乳酸水平、细胞增殖活力均显著升高(P＜0.01);与CHCHD4过表达组相比,空白血清组各指标均无明显变化,良方温经汤血清组CHCHD4、HIF-1α蛋白表达显著下降(P＜0.05或P＜0.01),葡萄糖消耗量、乳酸水平显著降低(P＜0.01),细胞增殖活力显著下降(P＜0.01).由上可知,良方温经汤对寒凝血瘀型EMs的治疗作用与降低CHCHD4表达,进而改善异位病灶及异位ESCs乏氧有关.

从"病-方"互作网络探索尪痹片干预膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)临床优势分期及潜在作用机制.首先,基于临床指南和专家共识并结合中医证候本体及多维定量关联计算平台(SoFDA)分别收集KOA发作期、缓解期和康复期3个临床分期及尪痹片相关症状及基因集,同时基于中医药百科全书数据库(ETCM 2.0)收集尪痹片所含成分候选靶标谱,分别获得疾病靶标分子库和方药候选靶标集.其次,采用Jaccard和余弦相似度分别对"药物治疗与疾病临床症状""药靶与疾病基因""富集通路"间相似度评价,在尪痹片干预KOA"病-方"互作关联网络构建与分析后,提取方药干预不同临床分期网络,挖掘其作用特点.最后,采用脂多糖(LPS)诱导SW1353细胞考察方药作用机制.结果显示,基于SoFDA收集到KOA发作期、缓解期和康复期及尪痹片临床治疗症状及基因92/3 921、138/3 708、139/3 800、196/3 946个,基于ETCM 2.0得到260个尪痹片所含化学成分预测靶标集."疾病分期-药物"对应性评价发现,尪痹片与KOA缓解期在"药物治疗与疾病临床症状""药靶与疾病基因""富集通路"3个层次具有最高相似度,其次为康复期;网络构建分析发现,尪痹片的核心效应靶标共同矫正不同分期机体"免疫-炎症"失衡,并发挥镇痛和骨保护作用,缓解膝关节疼痛、关节肿胀、酸痛、乏力、功能障碍等症状.在KOA发作期和缓解期方药核心效应靶标尤其发挥抗氧化作用,在康复期方药核心效应靶标发挥调节物质与能量代谢紊乱及血管保护作用.基于体外细胞模型发现,尪痹片通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路可抑制白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子释放及Bax/Bcl-2表达.该研究为进一步明确尪痹片临床优势分期与辅助临床精准定位提供了理论依据.