目的:探讨HIF-1α、CYPJ在舌鳞癌细胞(TSCC)中的作用及意义，并进一步研究热疗对HIF-1α、CYPJ的调控作用。方法:收集TSCC患者癌组织及癌旁正常组织标本80例，采用免疫组化、蛋白印迹、荧光定量PCR检测各标本中HIF-1α、CYPJ的表达及其与临床病理特征之间的关系。采用qPCR、蛋白印迹检测Cal-27细胞在常氧及乏氧状态下以及用42℃热疗、化疗及热化疗处理时HIF-1α、CYPJ的表达情况。细胞划痕检测细胞迁移，流式细胞术检测细胞凋亡。结果:HIF-1α、CYPJ蛋白在TSCC患者肿瘤组织中的表达水平高于相应的癌旁组织；且二者表达升高与TSCC患者肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移等相关(均 P<0.05)，与性别、年龄无关(均 P>0.05)。Cal-27细胞中HIF-1α、CYPJ表达水平在乏氧微环境中升高(均 P<0.05)，且单独热疗也促进其表达(均 P<0.05)。相比于单独热疗及化疗，热化疗联合使用在明显抑制二者的表达的同时抑制细胞迁移并促进细胞凋亡(均 P<0.05)。 结论:HIF-1α、CYPJ是TSCC肿瘤发生和预后的一个潜在生物标志物，且热疗后肿瘤复发可能源于热疗触发了HIF-1α表达，其通过激活下游靶基因促使适应热处理的肿瘤细胞生长存活，而热疗联合化疗可能是治疗TSCC一种比较有前景的治疗方案。

目的:观察热疗联合紫杉醇对人舌鳞癌细胞系CAL-27增殖、凋亡和周期的影响并探讨其机制。方法:CCK-8法确定紫杉醇工作浓度，将体外培养CAL-27细胞分为对照组、紫杉醇组、42℃热疗组和联合治疗组。克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡，蛋白印迹法检测AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:紫杉醇组、热疗组及联合治疗组相比对照组均可抑制细胞增殖及促进凋亡( P<0.05)，且联合治疗组优于热疗组、紫杉醇组( P<0.05)。蛋白印迹法实验结果显示联合治疗组上调Bax蛋白表达水平，同时下调P-AKT、Bcl-2表达( P<0.05)。 结论:42℃热疗与紫杉醇联合应用可抑制CAL-27细胞增殖及促进凋亡，其机制可能与抑制AKT活化及激活Bax/Bcl-2凋亡通路有关。

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)在口腔鳞癌组织中的表达及其与肿瘤细胞迁移和侵袭的关系。方法:选取新乡医学院第一附属医院和新乡医学院第三附属医院2015年9月至2018年9月收集的79例口腔鳞癌组织和癌旁组织作为研究标本，采用免疫组织化学分析癌旁组织和口腔鳞癌组织FAK蛋白的表达水平；采用FAK短发卡RNA(shRNA)和对照shRNA慢病毒感染人口腔鳞癌细胞系CAL-27建立FAK敲降细胞系和对照细胞系(FAK KD组和shRNA对照组)，采用噻唑蓝(MTT)分析两组细胞的增殖能力；采用划痕实验和Transwell实验分析两组肿瘤细胞的迁移和侵袭水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞上皮-间充质转化水平。组间数据比较采用t检验。结果:癌旁组织FAK蛋白表达水平(154.23±23.09)明显低于肿瘤组织(351.29±30.18)，差异有统计学意义( t＝4.109， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值(2.11±0.29)明显高于FAK KD组(1.52±0.26)，差异有统计学意义( t＝3.281， P<0.05)。对照组细胞克隆形成数量[(133.48±5.91)个]明显高于FAK KD组[(59.87±5.10)个]，差异有统计学意义( t＝4.289， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(85.62±6.08)%]明显高于FAK KD组[(53.18±4.87)%]，差异有统计学意义( t＝3.948， P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(149.71±18.32)个]明显高于FAK KD组[(81.58±8.32)个]，差异有统计学意义( t＝4.770， P<0.05)。对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平(1.28±0.25)明显高于FAK KD组(0.63±0.19)，差异有统计学意义( t＝3.995， P<0.05)。对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平(0.84±0.18、0.96±0.20)明显低于FAK KD组(1.79±0.23、2.39±0.20)，差异有统计学意义( t＝3.027、4.318， P<0.05)。 结论:FAK蛋白在口腔鳞癌组织中呈高表达，参与口腔鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化过程。

目的:探讨热疗（HT）对舌鳞癌细胞系CAL-27铁死亡的调控作用和可能机制。方法:采用CCK-8法检测铁死亡抑制剂Fer-1的半抑制浓度（IC 50）并用于后续实验。CAL-27细胞系按实验设计分为HT组、对照组、Fer-1组以及HT+Fer-1组。采用各自检测试剂盒检测活性氧水平、铁离子浓度，采用实时反转录PCR检测p53、转铁蛋白受体1（TfR1）的mRNA水平，细胞划痕法检测细胞迁移，流式细胞术检测细胞凋亡。 结果:热疗组CAL-27细胞系活性氧水平（ P<0.01）和铁离子浓度（ P<0.001）显著上调，p53及TfR1的mRNA表达量也明显增加（ P值均<0.01），细胞迁移能力下降（ P<0.001），凋亡率升高（ P<0.01）。HT+Fer-1组与HT组相比活性氧水平（ P<0.001）、铁离子浓度（ P<0.001）、p53及TfR1的mRNA表达量均降低（ P值均<0.01），细胞迁移能力恢复（ P<0.01），凋亡率也降低（ P<0.01）。 结论:热疗可能通过激活p53/TfR1通路诱导舌鳞癌细胞系CAL-27铁死亡，抑制其迁移能力并促进其凋亡。

目的:探讨核不均一核糖核蛋白L(hnRNPL)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用蛋白质免疫印迹(Western blot)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常口腔上皮细胞(HOK)和口腔鳞状细胞癌细胞系(HSC3、CAL27、SCC15、HN13)中hnRNPL蛋白和信使RNA(mRNA)表达水平；以CAL27细胞作为研究对象，采用对照短发卡RNA(shRNA)和hnRNPL shRNA慢病毒感染CAL27细胞，建立对照组和hnRNPL KD组细胞，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色法检测两组细胞的增殖能力；采用流式细胞术分析两组细胞的凋亡水平；采用划痕实验和Transwell分析两组细胞的迁移和侵袭能力；采用Western blot和荧光定量PCR分析两组细胞p53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和黏着斑激酶(FAK)蛋白和mRNA表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:口腔鳞状细胞癌细胞系(HSC3、CAL27、SCC15、HN13) hnRNPL蛋白表达水平(1.40±0.12、1.81±0.16、1.38±0.09、1.39±0.10)明显高于正常口腔上皮细胞(HOK，0.97±0.12)，差异有统计学意义( t＝6.451、10.230、6.729、6.707， P<0.05)。口腔鳞状细胞癌细胞系(HSC3、CAL27、SCC15、HN13) hnRNPL mRNA表达水平(1.47±0.13、2.04±0.22、1.59±0.10、1.42±0.08)明显高于正常口腔上皮细胞(HOK，0.99±0.05)，差异有统计学意义( t＝8.307、11.260、13.820、11.560， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值(2.04±0.13)明显高于hnRNPL KD组细胞(1.61±0.11)，差异有统计学意义( t＝6.322， P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(70.47±10.42)%]明显高于hnRNPL KD组[(43.71±4.54)%]，差异有统计学意义( t＝5.765， P<0.05)。对照组细胞凋亡率[(3.72±1.10)%]明显低于hnRNPL KD组[(11.81±2.43)%]，差异有统计学意义( t＝7.427， P<0.05)。对照组细胞愈合率[(86.55±4.66)%]明显高于hnRNPL KD组[(57.34±6.20)%]，差异有统计学意义( t＝9.224， P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(106.50±7.66)个]明显高于hnRNPL KD组[(77.83±6.18)个]，差异有统计学意义( t＝7.135， P<0.05)。对照组细胞p53和bcl-2蛋白表达水平(0.69±0.08、0.80±0.08)明显低于hnRNPL KD组(1.07±0.14、1.30±0.12)，差异有统计学意义( t＝7.135、7.135， P<0.05)。对照组细胞FAK蛋白表达水平(1.16±0.14)明显高于hnRNPL KD组(0.66±0.07)，差异有统计学意义( t＝7.943， P<0.05)。 结论:hnRNPL在口腔鳞状细胞癌中呈高表达，促进口腔鳞状细胞癌的增殖、迁移和侵袭等过程。

目的:探讨hsa_circ_0000231在舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma，TSCC）发生、发展中的作用机制。方法:收集2014年12月至2017年12月在南通大学附属医院和南通大学附属肿瘤医院收治并进行手术的舌癌患者60例（男32例，女28例，年龄36~84岁），唾液标本来自同时期的10例舌癌患者，以及10名健康志愿者（男5名，女5名，年龄40~75岁），3株舌癌细胞为TSCC常用工具细胞（CAL-27、Tca-8113、HN-4）。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测60对新鲜配对TSCC组织、10对唾液标本及3株TSCC细胞系中的hsa_circ_0000231的表达；结合随访资料，分析hsa_circ_0000231相对表达量与患者临床病理特征及预后的关系。选择敲低效率最高的细胞行蛋白免疫印迹法（WB）、细胞计数试验（cell counting kit-8，CCK-8）、克隆形成、Transwell侵袭和划痕试验，研究TSCC细胞的增殖、侵袭、转移及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的能力；使用Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl与TSCC细胞共培养，WB检测并研究Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达变化。裸鼠成瘤实验比较皮下移植瘤的生长。使用SPSS 25.0统计分析软件行数据分析，组间比较采用 t检验和 χ 2检验。 结果:hsa_circ_0000231在TSCC患者组织、唾液标本及细胞系CAL-27、Tca-8113和HN-4中高表达，配对癌旁组织、健康人唾液标本及正常人类口腔黏膜细胞（human oral keratinocytes，HOK）中低表达（ P值均<0.05）。单因素分析显示hsa_circ_0000231表达水平、肿瘤分化程度和T分级与TSCC患者的生存预后相关（ P值均<0.05）。多因素Cox风险回归模型分析显示hsa_circ_0000231表达水平（χ 2=5.77， P=0.016）和T分级（χ 2=5.27， P=0.029）是TSCC患者预后不良的独立影响因子。WB显示，敲低hsa_circ_0000231表达可以显著提高CAL-27和Tca-8113细胞中EMT相关蛋白即E-钙黏蛋白的表达，并降低Snail、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。与阴性对照组相比，干扰组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、C-myc、Bcl-2、MMP-9和CyclinD1的表达被抑制，使用Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl与干扰组TSCC细胞共培养后，干扰组细胞中上述蛋白的表达趋势被逆转；细胞功能学证实敲低hsa_circ_0000231表达可以显著抑制CAL-27和Tca-8113细胞增殖、侵袭和转移能力；使用LiCl逆转了hsa_circ_0000231促进CAL-27和Tca-8113细胞迁移和侵袭的能力。裸鼠成瘤实验显示使用LiCl处理过的皮下移植瘤的质量和体积明显大于hsa_circ_0000231敲低组。 结论:hsa_circ_0000231是TSCC的独立预后因子，hsa_circ_0000231可以通过激活Wnt/β-catenin通路促进舌癌细胞的增殖、侵袭和转移。

目的:分析miR-650是否靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)促进口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和糖酵解.方法:生物信息学筛选出差异表达且与细胞增殖、糖酵解有关的基因.构建稳定过表达PCK1的CAL-27和Tca8113细胞系,分成Vector组和PCK1组.构建稳定过表达miR-650的OSCC细胞,分成miR-NC组、miR-650组和miR-650+PCK1组.CCK-8和克隆形成检测各组细胞增殖能力.裸鼠成瘤实验检测瘤体质量、体积.免疫组织化学检测肿瘤组织中PCK1表达水平.免疫印迹测定各组细胞PCK1蛋白表达水平.葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞内葡萄糖和乳酸变化.数据库预测PCK1靶标,双荧光酶素报告实验进行验证.RT-qPCR测定转染后OSCC细胞中miR-650的表达.结果:PCK1在OSCC中表达下调,且与细胞增殖和糖酵解相关.与Vector组相比,PCK1组中PCK1蛋白水平升高;过表达PCK1抑制细胞增殖;过表达PCK1抑制裸鼠移植瘤体积和质量增长;过表达PCK1促进细胞葡萄糖产生和抑制其消耗,同时抑制乳酸产生.与癌旁组织相比,miR-650在OSCC中表达上调.数据库预测及双荧光酶素报告实验证实miR-650与PCK1的靶向关系.与miR-NC组相比,miR-650组中PCK1 mRNA和蛋白表达水平明显降低.miR-650通过调节PCK1表达,促进OSCC细胞增殖,调控细胞糖酵解.结论:miR-650可以通过靶向结合PCK1促进OSCC细胞增殖和糖酵解.

目的 观察微小RNA(miR)-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的调控作用,并基于甲基转移酶SETDB1基因调控探讨相关机制.方法 采用RT-PCR法检测口腔癌细胞系CAL-27和正常口腔黏膜上皮细胞系ATCC中的miR-381-3p.培养CAL-27细胞,分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组和阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和miR-381-3p阴性对照,未转染组不进行转染;采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力.采用TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_80/)预测miR-381-3p与SETDB1结合位点,应用双荧光素酶报告基因分析进行验证;采用RT-PCR法检测CAL-27细胞和ATCC细胞中的SETDB1 mRNA,Western blotting法检测SETDB1蛋白;将CAL-27细胞分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组、阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和阴性对照,未转染组不进行转染,采用RT-PCR法检测SETDB1 mRNA.结果 CAL-27细胞中miR-381-3p表达低于ATCC细胞(P<0.05).模拟物组在培养12、24、36、48 h时细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).模拟物组细胞迁移距离、穿膜细胞数均低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).SETDB1存在连续的、可以与miR-381-3p互补的核苷酸序列;共转染SETDB1-WT和miR-381-3p质粒的CAL-27细胞相对荧光素酶活性低于其他组细胞(P均<0.05);CAL-27细胞中SETDB1 mRNA和蛋白表达高于ATCC细胞(P均<0.05);模拟物组SETDB1 mRNA表达低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).结论 miR-381-3p能够抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节SETDB1表达有关.

目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响.方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织与癌旁组织中差异表达的mRNA.West-ern blot检测RAPTOR在人口腔上皮细胞HOEC和OSCC细胞系中的表达.利用伤口愈合实验、Transwell实验、EdU实验检测各组细胞迁移、侵袭及增殖能力.生物信息学网站预测与RAPTOR靶向结合的微小RNA(mi-croRNA,miR).功能学实验验证miR-485-5p是否可以靶向RAPTOR影响OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖.结果:RAPTOR在HNSCC组织中较癌旁组织表达增高.伤口愈合、Transwell和EdU实验结果示,RAPTOR有促进OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力.miR-485-5p能与RAPTOR靶向结合,且miR-485-5p上调能逆转RAPTOR促进CAL27细胞迁移、侵袭和增殖能力.结论:miR-485-5p通过靶向RAPTOR抑制OSCC细胞迁移、侵袭和增殖能力.

目的 探讨PTK7 在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达水平、潜在的生物学功能及其临床意义.方法 采用实时荧光PCR(quantitive real-time polymerase chain reaction,qPCR)和Western blot检测PTK7 在OSCC细胞系和口腔鳞癌组织标本中的表达情况,利用siRNA干扰技术下调PTK7 在HN6 和Cal27 细胞系中的表达,通过CCK-8实验、平板克隆实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测PTK7 下调后其对OSCC细胞系增殖、迁移、侵袭的影响;同时采用免疫组织化学染色法检测 75 例口腔鳞癌组织中PTK7 蛋白的表达水平,分析其相关的临床意义.结果 qPCR及Western blot结果显示PTK7 基因及其编码蛋白在口腔鳞癌细胞系HN6 和Cal27 中高表达,并在 6 例新鲜口腔鳞癌标本中的表达高于其配对的癌旁正常组织;下调PTK7 的表达可抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭功能;在 75 例口腔鳞癌组织中,PTK7 的表达水平与OSCC患者的发病年龄、吸烟情况、病理分化程度等相关,其差异有统计学意义(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析发现,高表达PTK7的OSCC患者的预后较差.结论 PTK7 是口腔鳞癌发生发展过程的潜在癌基因,其表达水平影响OSCC细胞的生物学功能,临床上可根据PTK7 表达水平了解口腔鳞癌的特性,PTK7 可作为口腔鳞癌预后判定的独立指标.