目的 研究枳术颗粒对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠的药效及作用机制.方法 复合因素造模法诱导大鼠FD模型,造模成功后给予枳术颗粒治疗2周,观察枳术颗粒对FD大鼠胃残留率、小肠推进率、血清中胃泌素(gastrin,GAS)、胃饥饿素(growth hormone releasing peptide,Ghrelin)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)及生长抑素(somatostatin,SS)含量的影响;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察胃窦组织、十二指肠组织病理变化;利用qRT-PCR检测下丘脑及胃组织中GAS、Ghrelin、CGRP、SSmRNA表达和胃及十二指肠组织中肾上腺素能受体 β1(β1-adrenergic receptor,ADRB1)、生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)、胃饥饿素-O-乙酰转移酶(ghrelin-O-acyltransferase,GOAT)、胃饥饿素受体(growth hormone secreting hormone receptor,GHSR)、酪氨酸激酶受体(c-kit protooncogene protein,C-kit)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、钙激活氯离子通道蛋白 Anoctamin-1(ANO1)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)mRNA表达;利用Western blotting检测胃及十二指肠组织中C-kit、SCF蛋白表达.结果 枳术颗粒可以显著降低FD大鼠胃残留率(P＜0.05),提高小肠推进率(P＜0.01);升高血清中Ghrelin、GAS含量(P＜0.01),降低CGRP、SS含量(P＜0.05、0.01);升高下丘脑及胃窦组织中Ghrelin、GAS mRNA表达水平(P＜0.05、0.01),降低下丘脑及胃窦组织中CGRP、SSmRNA表达水平(P＜0.01);显著升高胃及十二指肠组织SCF、C-kit蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),升高胃及十二指肠组织 ADRB1、GOAT、GHSR、SCF、C-kit、ANO1、MLCK mRNA 表达水平(P＜0.05、0.01),降低SSTR mRNA表达水平(P＜0.05、0.01).结论 枳术颗粒可以改善FD大鼠的胃动力异常,其作用机制可能与调节脑肠肽水平、激活SCF/C-kit通路有关.

基于现代分析技术和功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠模型系统评价鸡内金不同入药形式化学成分和药效的差异性,为鸡内金消食功效物质基础提供依据.分别测定鸡内金散剂和汤剂蛋白质、酶、多糖、氨基酸及黄酮类成分,散剂和汤剂总蛋白分别为0.06%、0.65%;散剂胃蛋白酶和淀粉酶活力效价分别为27.03、44.05 U·mg-1;汤剂多糖为0.03%,散剂中未检出多糖;散剂和汤剂中L型氨基酸总量分别为279.81、8.27 mg·g-1;总黄酮质量分数为 59.51 μg·g-1,汤剂未能检测出酶和黄酮类成分.散剂可明显降低体外营养糊黏度,而汤剂与空白组对营养糊黏度降低无明显作用.采用碘乙酰胺灌胃结合不规则饮食法制备FD大鼠模型,结果显示,散剂和汤剂均可显著提高大鼠胃排空作用、小肠推进率、消化酶活力、血清胃泌素(gastrin,GAS)、胃动素(motilin,MTL)、饥饿素(ghrelin,GHRL)水平,显著降低血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide、VIP)、5-羟色胺[3-(2-ammonioethyl)-5-hydroxy-1H-indolium maleate,5-HT]、生长激素抑制素(somatostatin,SST)水平(P<0.05,P<0.01).散剂和汤剂给药在同等剂量级别组之间比较,散剂组大鼠胃肠推进作用、血清GAS、GHRL、VIP和SST水平明显优于汤剂组,散剂组在胃肠推进作用、血清MTL、GAS、GHRL水平稍高于其2倍生药量的汤剂组,散剂组血清SST、5-HT、VIP水平稍低于其 2 倍生药量的汤剂组.综上,鸡内金汤剂与散剂对功能性消化不良均有治疗作用,但两者作用有较明显差异;同等剂量下,散剂消食药效明显优于汤剂,汤剂需增加剂量以补偿药效.推测鸡内金消食药效具有二元性,散剂的消食活性成分可能包括酶和L型氨基酸,汤剂主要依靠L型氨基酸发挥药效,该研究为探究鸡内金消食活性物质、提高临床用药效果提供了新证据.

目的 探讨香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良(FD)模型大鼠胃排空的影响及可能作用机制.方法 60只SD大鼠的乳鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤低、中、高剂量组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠采用碘乙酰胺联合蔗糖溶液灌胃+隔日给食+游泳力竭复制脾胃虚弱型FD大鼠模型.造模成功后香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予香砂六君子汤12、6、3g/(kg·d)灌胃;莫沙必利组给予枸橼酸莫沙必利片1.35 mg/(kg-d)灌胃;空白组和模型组大鼠给予生理盐水10ml/(kg-d)灌胃.连续干预2周后,测定各组大鼠体质量、胃排空率和肠推进率,HE染色观察各组大鼠胃组织病理学改变,检测大鼠胃窦组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胃生长激素释放激素(ghrelin)、生长激素促分泌素受体1a(GHSR-1a)、c-kit蛋白表达和血浆酰基化胃生长激素释放激素(Acly-ghrelin)水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率降低,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达和血浆Acly-ghrelin水平均降低,mTOR蛋白表达升高(P＜0.05).与模型组比较,香砂六君子汤中、高剂量组和莫沙必利组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率升高,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达及血浆Acly-ghrelin水平均升高,mTOR蛋白表达降低(P＜0.05).与莫沙必利组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃窦组织中ghrelin蛋白表达升高,mTOR蛋白表达降低(P＜0.05).HE染色结果显示,各组大鼠胃组织病理形态学正常,腺体无萎缩,无炎性细胞浸润.结论 香砂六君子汤中、高剂量能够显著促进脾胃虚弱型FD大鼠胃排空,其作用机制可能与香砂六君子汤可正向调控mTOR/ghrelin/GHSR-1a信号通路相关.

胰岛素抵抗(又称胰岛素敏感性受损,IR)发生在众多疾病中,如肥胖症,非胰岛素依赖型糖尿病,多囊卵巢综合征(P COS)和代谢综合征(MS)等,IR也是缺血性心脏病和心肌梗死的危险因素[1].Ghrelin是28氨基酸多肽,是从胃组织中分离出的一种生长素释放肽[2],在十二指肠、空肠、直肠和结肠中也有发现.胃是胃饥饿素生成的主要器官,其每克组织合成激素的水平是第二大胃饥饿素来源,是十二指肠的10倍多[3].

目的 探讨siRNA抑制饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)对肝脂肪变性影响及作用机制.方法 游离脂肪酸(FFA)作用于人肝细胞系LO2细胞以诱导肝细胞脂肪变性.FFA与siRNA-GOAT单独或联合处理LO2细胞,分为4组,即空白对照(NC)组:仅用PBS处理;siRNA-GOAT组:仅以终浓度为10 nmol/L的siRNA-GOAT处理;FFA组:仅以终浓度为1 mmol/L的FFA处理;FFA+ siRNA-GOAT组:采用上述浓度FFA和siRNA-GOAT混合处理.肝细胞油红O染色检测脂肪滴形成情况;TG检测试剂盒检测LO2细胞脂质水平;免疫印迹法(Western Blot)、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光染色、电子显微镜检测自噬活性;酶联免疫吸附测定法、RT-PCR检测TNFα、IL-6水平.Western Blot检测雷帕霉素(mTOR)、磷酸化mTOR(pmTOR)、AMP-活化蛋白激酶(AMPK)以及磷酸化AMPK(p-AMPK)的蛋白水平变化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 FFA+ siRNA-GOAT组脂肪滴形成较FFA组明显减轻,TG水平明显低于FFA组,差异有统计学意义(P ＜0.001).FFA+ siRNA-GOAT组TNFα和IL-6蛋白、mRNA表达水平较FFA组均明显下降,差异均有统计学意义(P值均＜0.005).siRNA-GOTA组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).FFA+siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).FFA+ siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).免疫荧光染色示FFA+ siRNA-GOAT组LO2细胞中内源性LC3-Ⅱ表达水平较FFA组、siRNA-GOAT组升高.电子显微镜观察结果示FFA+ siRNA-GOAT组自噬体表达较FFA组增加.自噬抑制剂siRNA-ATG5、3-MA或刺激剂雷帕霉素处理LO2细胞后,FFA+ siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组TG水平分别与FFA+ siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).FFA+ siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组LC3-Ⅰ/Ⅱ水平明显高于FFA+ siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).FFA+ siRNA-GOAT组p-AMPK蛋白表达水平明显高于于FFA组、p-mTOR蛋白表达水平明显低于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 siRNA抑制GOAT可通过调节AMPK/mTOR通路,上调自噬活性,进而减轻肝细胞内脂肪变性.

目的 观察糖尿病及非糖尿病肾病血液透析患者餐后胃促生长素(ghrelin)水平,评价其变化与胃轻瘫的关系.方法 检测16例正常对照、16例非糖尿病肾病血液透析及16例糖尿病肾病血液透析患者空腹及餐后30、60、120 min血浆ghrelin水平.通过检测餐后血清对乙酰氨基酚(扑热息痛)浓度评估胃排空.结果 与正常对照组比较,血液透析患者空腹血浆ghrelin水平显著升高(P<0.01);餐后60 min血浆ghrelin明显下降(P<0.05);血液透析患者餐后ghrelin水平下降持续至120 min(P<0.05);正常对照组餐后60 min血浆ghrelin水平下降与血清扑热息痛浓度呈明显负相关(r=-0.677,P=0.001).结论 血液透析患者血浆ghrelin水平明显升高,餐后ghrelin分泌抑制延长可能是血液透析患者,特别是糖尿病肾病血液透析患者胃轻瘫的原因.

目的 建立衣霉素诱导成骨细胞内质网应激的模型,探讨胃饥饿素( ghrelin)对衣霉素诱导成骨细胞内质网应激的影响.方法 选取小鼠成骨细胞MC3T3-E1 为研究对象,①分别将不同浓度的衣霉素(0、0. 5、1、1. 5 μg/mL)加入成骨细胞培养基中,分别孵育24 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯探针( DCFH-DA)检测胞内活性氧( ROS)的含量;real-time quantitative PCR(qRT-PCR)检测各组细胞内内质网应激相关标志性基因BIP、CHOP、caspase-12 mRNA的表达.最后选择衣霉素作用最敏感浓度1. 5μg/mL,建立成骨细胞内质网应激的模型.②观察ghrelin对成骨细胞内质网应激的影响.分别用不同浓度的ghrelin(0、10-11、10-9、10-7 mmol/L)预处理成骨细胞4 h后,加入1. 5μg/mL的衣霉素诱导成骨细胞内质网应激.培养结束后,利用上述方法检测细胞增殖活性、胞内ROS的含量、内质网应激相关标志性基因的表达.结果 与对照组相比,不同浓度的衣霉素干预成骨细胞24 h 后,细胞增殖和存活率呈浓度依赖性明显降低. 1. 0μg/mL 和1. 5μg/mL的衣霉素干预细胞24 h后细胞增殖和存活率的降低有统计学意义(P＜0. 05),而0. 5μg/mL的衣霉素干预后无统计学意义(P＞0. 05);与对照组相比,胞内ROS的含量随浓度的增加逐渐增加( P＜0. 05);qRT-PCR结果显示,与对照组相比,不同浓度衣霉素干预细胞后CHOP mRNA的表达均有明显的提高且均有统计学意义( P＜0. 05),而BIP、caspase-12 mRNA的表达只在1. 0μg/mL和1. 5μg/mL衣霉素干预后有统计学意义(P＜0. 05),0. 5μg/mL衣霉素干预后无统计学意义( P＞0. 05);②与单纯1. 5μg/mL衣霉素相比,用不同浓度的ghrelin预处理成骨细胞4 h后再加1. 5μg/mL衣霉素,发现细胞增殖和存活率随ghrelin浓度增高而增加,10-9、10-7mmol/L ghrelin预处理后有统计学意义(P＜0. 05),而10-11mmol/L ghrelin预处理后无统计学意义(P＞0. 05);与单纯1. 5μg/mL衣霉素相比,不同浓度的ghrelin预处理后胞内ROS的含量减少,且均有统计学意义( P＜0. 05);qRT-PCR结果显示,在10-9和10-7mmol/L ghrelin预处理后,CHOP mRNA表达降低有统计学意义(P＜0. 05),而10-11 mmol/L的ghrelin预处理后无统计学意义(P＞0. 05).对于BIP和caspase-12 mRNA的表达,不同浓度的ghrelin预处理后均有统计学意义(P＜0. 05).结论 衣霉素可以诱导成骨细胞内质网应激的发生,ghrelin在一定程度上可以抑制成骨细胞内质网应激.

目的 通过对心脾两虚型失眠患者下丘脑进行磁共振质子波谱(MRS)检测及血清脑肠肽进行酶联免疫(ELISA)检测,探索腹部推拿治疗失眠脑肠互动效应的物质基础.方法 严格遵循临床试验原则,将符合诊纳排标准的失眠患者20例作为研究对象,同时招收健康志愿者20例作为基线比较.以匹兹堡睡眠指数(PSQI)、阿森斯(AIS)量表作为疗效评定标准.患者组在治疗前后分别进行下丘脑MRS检测和血清P物质(SP)、脑啡肽(ENK)、食欲刺激素(Ghrelin)、神经太Y(NPY)检测.健康组按照试验流程进行1次MRS检测和血清ELISA检测.结果 患者组治疗前与健康组比较N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱复合物(Cho)的肌酸(Cr)比值降低,血清中SP、ENK、Ghrelin含量增高、NPY含量降低低;患者组治疗前后比较NAA/Cr比值明显升高,血清中SP、ENK、Ghrelin含量降低、NPY含量增高.NAA/Cr与PSQI指数呈线性负相关,ENK、SP与PSQI指数呈线性正相关.结论 证实腹部推拿治疗心脾两虚型失眠与其改善下丘脑神经元活性和调节人体血清脑肠肽相关.