目的:分析发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome，SFTS)重症监护室(ICU)组和非ICU组患者临床和实验室指标差异，筛选出具有较高价值的预测指标。方法:回顾性收集2019年6月到12月在济南市某医院经实验室确诊的69例SFTS患者的临床和实验室指标资料，根据患者临床转归分为ICU和非ICU组，分析两组患者临床表现、实验室指标差异，通过受试者工作特征(ROC)曲线筛选价值较大的预测指标。结果:与非ICU组相比，ICU组SFTS患者的降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)，谷氨酰转肽酶(GGT)、亮氨酸氨基肽酶(LAP)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、腺苷脱氨酶(ADA)、胱抑素C(Cys C)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平显著更高( W＝530.0， P＝0.003； W＝496.5， P＝0.015； W＝496.0， P＝0.015； W＝535.5， P＝0.002； W＝545.5， P＝0.001； W＝498.5， P＝0.013； W＝537.0， P＝0.002； W＝523.0， P＝0.004； W＝512.0， P＝0.007； W＝502.0， P＝0.012； W＝486.0， P＝0.023； W＝509.0， P＝0.008； W＝541.0， P＝0.002)，而血小板计数(PLT)、间接胆红素(IBIL)、白球比(A/G)、前白蛋白(PALB)和超氧化物歧化酶(SOD)水平更低( W＝199.0， P＝0.024； W＝175.5.5， P＝0.009； t＝－2.9， P＝0.004； W＝209.5， P＝0.036； t＝－3.0， P＝0.004)。ROC结果显示，ALP[曲线下面积(area under the curve, AUC)＝0.804，95%置信区间(confidence interval, CI)(0.679~0.929)]和LDH[AUC＝0.805，95% CI(0.680~0.930)]预测重症风险价值较高。 结论:SFTS患者肝功能、心功能和肾功能指标异常提示患者有病情加重风险，其中ALP和LDH水平预测重症风险价值较高，提示在临床护理过程中，应加强对具有上述症状患者的监测。

目的:探讨3例 HSD17B10和 ACAT1基因变异所致异亮氨酸代谢障碍性疾病患儿的临床、生化及基因特点。 方法:选取2014年至2021年于上海市儿童医院就诊的2例17β羟基类固醇脱氢酶10(HSD17B10)缺乏症和1例β酮硫解酶缺乏症(BKD)患儿为研究对象。收集患儿的临床资料，对其进行血酰基肉碱、尿有机酸及基因检测，对候选变异进行生物信息学分析。结果:3例患儿的主要临床症状包括癫痫、发育落后、肌张力减退和酸中毒等。血酰基肉碱谱中甲基巴豆酰基肉碱(C5：1)、3-羟基异戊酰基肉碱(C5-OH)、3-羟基丁酰肉碱(C4OH)均有不同程度的升高，尿有机酸检测甲基巴豆酰甘氨酸和2-甲基-3-羟基丁酸均显著增高。患儿1检出 HSD17B10基因c.347G>A(p.R116Q)杂合变异，患儿2检出 HSD17B10基因c.274G>A(p.A92T)杂合变异，患儿3检出 ACAT1基因c.547G>A(p.G183R)和c.331G>C(p.A111P)复合杂合变异，其中c.274G>A(p.A92T)与c.331G>C(p.A111P)既往均未见报道。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南，二者被分别判定为临床意义未明(PP3_Strong＋PM2_supporting)和疑似致病性变异(PM3＋PM2_Supporting＋PP3_Moderate＋PP4)。 结论:HSD17B10缺乏症与BKD均可能导致异亮氨酸代谢障碍，临床难以鉴别，而基因检测可明确诊断。上述发现的 HSD17B10基因c.274G>A(p.A92T)与 ACAT1基因c.331G>C(p.A111P)变异丰富了该2种疾病的变异谱。

目的 探究2型糖尿病(T2DM)合并慢性牙周炎(CP)患者血清富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)、乳酸脱氢酶(LDH)与牙周指标和牙周病变程度的关系.方法 选取2022年7月至2023年7月宁夏医科大学总医院口腔医院收治的112例T2DM合并CP患者(T2DM合并CP组),根据牙周病变程度将其分为轻度、中度和重度组;选取同期本院112例单纯CP患者(CP组),再选取112例单纯T2DM患者(T2DM组);检测LRG1、LDH和牙周指标;Pearson法分析血清LRG1、LDH及二者与牙周指标的相关性;重度T2DM合并CP的影响因素采用多因素logistic回归分析;绘制ROC曲线分析血清LRG1、LDH对重度T2DM合并CP的诊断价值.结果 CP组、T2DM组以及T2DM合并CP组LRG1、LDH水平依次升高(P＜0.05).轻度、中度和重度组血清LRG1、LDH、附着丧失(AL)、牙周探诊深度(PD)、牙龈出血指标(BI)水平依次升高(P＜0.05).根据Pearson相关性分析得知,血清LRG1与LDH呈正相关(P＜0.05),二者均与AL、PD、BI呈正相关(P＜0.05).根据logistic回归分析得知LRG1、LDH、AL、PD、BI均为影响重度T2DM合并CP的因素(P＜0.05).根据ROC曲线得知血清LRG1和LDH二者联合诊断重度T2DM合并CP的AUC为0.910,两者联合优于各自单独诊断(Z 联合vs LRG1=2.659、Z 联合vs LDH=2.627,P＜0.05).结论 LRG1、LDH在T2DM合并CP患者血清中显著升高,两者与牙周指标和牙周病变程度有关.

目的:从采自云南省丽江郊野的土壤中筛选出具有抑菌活性的菌株,分离其活性成分进行抗菌作用机制初步研究以寻找抗菌活性物质.方法:使用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等6种细菌以及白色念珠菌等11种真菌作为指示菌,采用管碟法和菌丝生长速率法对拮抗菌进行筛选,通过生理生化测试和16S rDNA序列分析鉴定菌种;对发酵液中分离出的活性化合物使用液相色谱-质谱/质谱技术进行结构分析;采用氯化三苯四氮唑法检测RN8菌株发酵液不同稀释倍数处理大肠杆菌和白色念珠菌后的细胞脱氢酶活力,利用分光光度法测定蛋白质、DNA和钾离子泄漏率;将环四肽RN作用于白色念珠菌进行代谢组研究.结果:RN8菌株发酵液对17种测试指示菌具有拮抗效果,鉴定为枯草芽孢杆菌;RN鉴定为环肽类化合物,当其质量浓度为12.5 μg/mL时,抑制率达73.41％,EC50为4.69 μg/mL;KEGG数据库和路径拓扑分析显示,五个主要代谢途径有显著影响,包括嘧啶代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,烟酸和烟酰胺代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成,这些过程涉及2'-脱氧胞苷等37种代谢物.结论:枯草芽孢杆菌RN8是广谱拮抗性菌株,其抑菌活性成分造成白色念珠菌细胞外膜的损伤,破坏细胞膜整体结构,导致细胞内物质泄漏,显著影响主要代谢途径,从而起到抗菌作用.

[目的]筛选玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)转录因子的互作蛋白,解析黑色素调控转录因子StMR1 调控玉米大斑病菌致病性的分子机制.为解析玉米大斑病菌侵染过程中转录因子的调控网络,阐明病菌的致病机理提供参考.[方法]收集玉米大斑病菌菌丝和孢子不同萌发阶段作为试验材料,采用Gateway方法构建玉米大斑病菌cDNA文库,使用同源重组的方法构建转录因子StMR1 的诱饵载体,采用酵母双杂交技术筛选其互作蛋白并进行一对一验证.[结果]构建的玉米大斑病菌文库插入的平均片段长度大于 1 000 bp,初级文库及次级文库的库容量为 1.2×107 和 1.04×107 CFU,重组率为 100%,可以用于酵母双杂交筛选.成功构建可以用于筛库的诱饵载体pGBKT7-StMR1,经初筛与复筛得到 3 个互作蛋白,一对一验证短链脱氢酶、糖基转移酶、富含亮氨酸重复序列蛋白均与转录因子StMR1 存在互作.[结论]成功构建了丰富度高且质量好的玉米大斑病菌cDNA文库并筛选到了与转录因子StMR1 互作的蛋白.

目的 研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 ①将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100～800 μmol·L-1孵育24h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100 μmol·L-1孵育24h)组,MTT法检测细胞存活率.②将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24h),模型组(CORT 400 μmol·L-1 孵育24h)和模型+SSb2组(SSb2 1.5625,3.125,6.25,12.5和25 μmol·L-1预处理3h,去上清,然后加入CORT 400 μmol·L-1及对应浓度SSb2共孵育24 h).MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率.③将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb2 12.5 μmol·L-1组,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的代谢组学技术检测PC12细胞代谢轮廓变化;比色法检测谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性.结果 ①与细胞对照组相比,当CORT浓度为400 μmol·L-1时,细胞存活率降低至(55±6)%(P<0.01);SSb2浓度>50 μmol·L-1时,对PC12细胞有显著的细胞毒性(P<0.01).②与细胞对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),LDH释放率显著降低(P<0.01).③与细胞对照组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞凋亡率显著降低(P<0.05).代谢组学结果表明,SSb2能显著回调谷氨酸、肌酸、N-乙酰天冬氨酸、L-酪氨酸、柠檬酸、L-异亮氨酸、乳酸、谷氨酰胺和胆碱9个差异代谢物.对SSb2调控的关键代谢物进一步富集分析表明,SSb2主要影响5条代谢通路,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,酪氨酸代谢和精氨酸生物合成.与细胞对照组相比,模型组谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞谷氨酸含量(P<0.01)和谷氨酰胺酶活性显著升高(P<0.05).结论 SSb2对CORT诱导的PC12细胞损伤具有神经保护作用,其机制与抑制细胞凋亡和调节代谢紊乱有关.

L-正缬氨酸是合成抗高血压药物培垛普利的重要中间体,其合成主要通过化学方法,具有产品纯度低、环境污染等缺点.提出一种基于多酶介导拆分DL-正缬氨酸结合不对称还原生产高纯度L-正缬氨酸的方法.首先,将混合型DL-正缬氨酸中的D型经过D-氨基酸氧化酶氧化成相应酮酸,然后利用亮氨酸脱氢酶将酮酸不对称还原生成L-正缬氨酸,同时NADH被氧化成NAD+,最后利用甲酸脱氢酶构建NADH循环再生系统.D-正缬氨酸被氧化过程中会产生副产物过氧化氢(H2O2),通过外源添加过氧化氢酶消除该副产物.基于前期最适转化温度、最适转化pH优化基础上,对过氧化氢酶添加量和单次底物添加量进行优化,利用分批补料策略提高L-正缬氨酸产量.结果显示,在最适条件下,L-正缬氨酸产量达到61.09 g/L对映体过量值(e.e.)和转化率分别为99％和96.1％.本研究合成L-正缬氨酸较之化学方法,具有环境污染少、产品纯度高等特点,为制药行业中光学纯L-正缬氨酸的生产提供了一种有效的方法.

目的 探讨富含亮氨酸的G蛋白偶联受体5(LGR5)和乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)的表达在非小细胞肺癌(NSCLC)进展和预后中的作用,为NSCLC的诊疗寻找新靶点.方法 选取2009年11月至2012年3月苏州大学附属第一医院NSCLC手术患者新鲜组织标本24例,石蜡标本109例.运用实时荧光定量PCR法检测LGR5和ALDH1A1在NSCLC组织和癌旁正常组织中的表达及相互关系;免疫组织化学染色法检测109例NSCLC组织和50例癌旁正常组织中LGR5和ALDH1A1的表达.应用Mann-Whitneyu检验、x2检验、Pearson相关、Kaplan-Meier法及Cox比例风险回归模型分析数据.结果 LGR5和ALDH1A1 mRNA在NSCLC组织中的表达高于对应癌旁正常组织(u值:150和74,均P＜0.01),且二者表达具有相关性(r=0.416,P＜0.05).免疫组织化学染色结果表明,LGR5和ALDH1A1在NSCLC组织中的阳性率分别为28.44％(31/109)和41.28％(45/109),且在LGR5阳性表达的组织中,有24例(77.42％,24/31) ALDH1A1也阳性表达(r=0.388,P＜0.01).另外,LGR5和ALDH1A1在高TNM分期NSCLC中的表达高于其在低TNM分期NSCLC中的表达(x2值:4.64和5.24,均P＜0.05),二者在有淋巴结浸润NSCLC中的共表达高于其在无淋巴结浸润NSCLC中的共表达(x2 =4.12,P＜0.05).高表达LGR5或ALDH1A1的患者具有较差的预后(x2值:6.24和4.18,均P＜0.05),而共表达LGR5和ALDH1A1的患者预后更不理想(x2=10.63,P＜0.01).LGR5和ALDH1A1均为不良预后的独立危险因素[校正风险比分别为2.361 (95％ CI:1.106 ～ 5.037)和2.306(95％ CI:1.101～4.830),均P＜0.05].结论 LGR5和ALDH1A1的表达与NSCLC的产生、转移和不良预后紧密相关,有望成为NSCLC靶向显像和靶向放射治疗的新靶点.

以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,构建两株分别表达L-苏氨酸脱氨酶(LTD,基因来源大肠杆菌)和共表达亮氨酸脱氢酶(LDH,来源蜡样芽孢杆菌)/葡萄糖脱氢酶(GDH,来源枯草芽孢杆菌)的重组大肠杆菌,在此基础上,构建了一种以L-苏氨酸和D-葡萄糖为底物联产L-2-氨基丁酸(L-ABA)和D-葡萄糖酸的全细胞转化系统.通过转化条件(温度、pH、细胞通透性和菌体量)优化,并采用分批补料策略,164 g/L L-苏氨酸和248 g/L D-葡萄糖最终转化得到141.6 g/L的L-ABA和269.4 g/L的D-葡萄糖酸,时空得率分别达到7.1 g/(L·h)和13.5 g/(L·h),得率超过99％.本研究使用价格低廉的大宗化学品高效率生产出有较高附加值的产物,全细胞转化系统无需额外添加昂贵的辅酶,更适用于工业化生产.

枫糖尿病(maple syrup urine disease,MSUD)是一种常染色体隐性遗传病,因患儿尿中排出大量支链α-酮-β-甲基戊酸具有特殊的枫糖气味而得名.该病是由于支链酮酸脱氢酶复合体(BCKAD)缺陷导致支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)代谢受阻,其相应酮酸衍生物在体内蓄积,造成严重的全身代谢反应异常[1].该病在早产儿及足月儿发病的临床特点不一.本文报道吉林大学白求恩第一医院收治的3例新生儿枫糖尿病患儿资料,其中2例胎龄29周早产儿,1例胎龄38周足月儿,病例收治时间分别为2016-10-14至2016-11-19、2016-04-29至2016-06-16、2016-01-25至2016-02-13.目的在于探讨不同胎龄新生儿枫糖尿病的临床特点及诊治经验,以增强新生儿科医生对该类疾病的认识.