目的:探究仙茅苷对七氟醚麻醉老年大鼠术后认知功能的影响及其抗氧化和抗凋亡作用。方法:30只大鼠按照随机数字表法分为两组（每组15只）：围手术期神经认知障碍（perioperative neurocognitive disorders, PND）组和PND+仙茅苷组。两组大鼠根据参考文献建立PND模型，吸入七氟醚麻醉后进行腹腔探查。PND+仙茅苷组大鼠术后以仙茅苷（50 mg/kg）灌胃，每日1次，连续7 d；PND组大鼠灌胃等量生理盐水。记录大鼠水迷宫实验目标象限停留时间和穿越平台次数，H-E染色检测海马组织损伤情况，ELISA法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平，TUNEL染色检测海马神经元凋亡指数，Western blot法检测蛋白激酶B（protein kinase B, Akt）磷酸化水平。结果:与PND组比较，PND+仙茅苷组大鼠目标象限停留时间、穿越平台次数明显增加（ P<0.05），磷酸化Akt（phosphorylated-Akt, p-Akt）、Akt升高（ P<0.05），SOD水平、Akt磷酸化水平明显升高（ P<0.05），MDA和凋亡指数明显降低（ P<0.05），海马组织损伤减轻。 结论:仙茅苷具有抑制氧化应激和海马神经元凋亡保护作用，改善老年PND大鼠的认知功能。

目的 基于人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因诱导的假定激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶Parkin信号通路探讨仙茅苷(CUR)对脊髓损伤(SCI)大鼠的神经保护作用.方法 以雄性SD大鼠为对象,随机选取15只作为假手术组,其余大鼠以脊髓撞击法建立SCI模型并将造模成功的大鼠分为模型组、CUR低剂量组(36 mg/kg CUR,灌胃)、CUR高剂量组(72 mg/kg CUR,灌胃)、CUR高剂量+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(72 mg/kg CUR,灌胃+20 mg/kg自噬抑制剂3-MA,腹腔注射),每组15只.各组大鼠给予相应药液/生理盐水,每天1次,持续28 d.于给药后第14、28天对各组大鼠进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分和Rivlin斜板实验;观察各组大鼠脊髓组织的病理学变化,检测其脊髓组织的细胞凋亡情况、氧化应激因子[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)]水平以及脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、PINK1、Parkin、p62、微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白的表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠脊髓组织可见明显的水肿和出血,并伴有大量炎症细胞浸润,其BBB评分和斜板角度,SOD和GSH水平,BDNF、PINK1、Parkin蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/Ⅰ比值均显著降低,脊髓组织的细胞凋亡率、MDA水平和GFAP、p62蛋白的表达水平均显著升高(P＜0.05);与模型组比较,各药物组大鼠脊髓组织水肿、出血、炎症细胞浸润均有所减少,上述各定量指标均显著改善(P＜0.05);3-MA可显著逆转CUR对上述指标的改善作用(P＜0.05).结论 CUR能促进SCI大鼠神经功能和运动功能的恢复,改善其脊髓组织病理损伤并抑制细胞凋亡,上述作用可能与CUR可激活PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬有关.

目的:探究仙茅-淫羊藿水提物(EX)中入血成分的抗炎作用.方法:采用AutoDockTools软件将EX中5种入血成分(仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷I、苔黑酚葡萄糖苷和朝藿定A)与靶蛋白髓细胞触发受体2(TREM2)进行分子对接;采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测EX中5种入血成分在不同浓度下对小胶质细胞(BV2)细胞活力的影响;采用LPS刺激BV2或小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)及尼日利亚菌素(nigericin)刺激LPS预处理的BMDMs细胞建立炎症模型,并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测5种入血成分对细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平的影响.结果:EX的入血成分仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ和朝藿定A与TREM2结合十分稳定,苔黑酚葡萄糖苷与TREM2结合较为稳定;仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、朝藿定A和苔黑酚葡萄糖苷均可在一定浓度下减少BMDMs细胞产生的IL-1β水平,而仅高浓度的仙茅苷和淫羊藿苷可减少BMDMs细胞产生的TNF-α水平.结论:EX的5种入血成分均可与TREM2结合,抑制下游NF-κB、NLRP3炎症通路改善炎症,可能是EX调控TREM2改善学习记忆能力和神经炎症的有效物质基础,在EX中起到协同增效的作用.

目的 采用正交试验设计法优选盐蒸仙茅最佳工艺.方法 采用正交试验设计法,以盐水比例、闷润时间、蒸制时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,优化盐蒸仙茅炮制工艺.结果 仙茅盐蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量,置于密闭容器内,加入盐水(盐水比例1∶17.5,每100 kg仙茅饮片用2 kg食盐)拌匀,闷润1 h,置于锅中蒸制1 h,取出放凉,50℃干燥,即得.结论 优化所得盐蒸仙茅炮制工艺稳定可行,且仙茅盐蒸后有效成分的含量高于仙茅生品、传统酒炙品和盐炙品,盐蒸工艺优于盐炙工艺.

目的:优选酒蒸仙茅最佳工艺.方法:采用正交试验设计法,以加酒量、闷润时间、蒸制时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,优化仙茅酒蒸炮制工艺.结果:仙茅酒蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量,置密闭容器内,加入黄酒(每100 kg饮片加入黄酒20 kg)拌匀,闷润1 h,置锅中蒸制1 h,取出放凉,50℃干燥.结论:优化所得酒蒸仙茅炮制工艺稳定可行,仙茅酒蒸后有效成分的含量高于仙茅生品和酒炙品,酒蒸工艺优于传统酒炙工艺.

目的 探讨仙茅苔黑酚龙胆二糖苷(orcinol gentiobioside,OGB)对氧化应激诱导的破骨细胞(osteoclasts,OCs)的作用及机制.方法 可溶性核因子-κB受体活化因子配体(soluble receptor activator of nuclear factor-KB ligand,sRANKL)联合H2O2诱导RAW264.7细胞,建立氧化应激诱导的OCs模型;CCK-8法检测OCs活力;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色测定OCs的数目;磷酸苯二钠法测定OCs的TRAP活性;免疫荧光法观察OCs的F-actin环结构和形态,以及p65和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的核转位;ELISA法测定OCs相关的生化指标;Western blotting检测骨吸收关键蛋白及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和Nrf2通路相关蛋白的表达.结果 OGB显著抑制氧化应激诱导的OCs的形成和分化(P＜0.01),并抑制TRAP活性、F-actin环的形成及其骨吸收作用(P＜0.05、0.01),下调骨吸收关键蛋白c-Fos、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)的表达(P＜0.05、0.01),降低活性氧(reactiveoxygen species,ROS)和还原型辅酶 Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶 4(NADPH oxidase 4,NOX4)的活性(P＜0.05、0.01),增加抗氧化酶血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS)的活性(P＜0.05、0.01),增强 OCs 中 Nrf2 的表达和核转位,抑制肿瘤坏死因子受体相关蛋白 6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)的募集、核因子-κB 抑制因子 α(inhibitor of NF-κB-α,IκBα)的降解,并阻止p65的磷酸化和核转位(P＜0.05).结论 OGB能够通过调控NF-κB和Nrf2通路,抑制氧化应激诱导的OCs形成分化和骨吸收作用.

目的:研究负载仙茅苷的三维复合支架的理化特性,并评估其对人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endo-thelial cell,HUVEC)和小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)促进血管化和骨诱导方面的潜在作用.方法:采用乳液/溶剂蒸发技术制备负载仙茅苷(curculigoside,CUR)的聚己内酯微球(CUR-PM),借助3D生物打印技术成功构建了由羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)、明胶(gelatin,GEL)和海藻酸钠(sodium alginate,SA)组成的三维复合(hydroxyapa-tite gelatin sodium alginate,HGS)支架的基础上,制备了负载仙茅苷的聚己内酯微球(hydroxyapatite gelatin sodium alginate curcu-ligoside,HGSC)支架.通过扫描电镜、红外光谱、流变学、力学性能、药物释放和降解性等实验对支架进行表征;通过CCK-8、EdU荧光染色实验以验证支架的生物安全性;通过HUVEC细胞管形成实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,评估HGSC用于促进细胞血管化和成骨调控的潜能.结果:HGSC内部具有大小均匀的网格状结构,与HGS相比,具有适当的力学性能和降解性.CCK-8和EdU荧光染色结果显示,HGSC支架具有良好的生物相容性.HUVEC细胞管形成实验和BMSC的ALP染色结果表明,HGSC支架表现出促进血管化和骨形成的潜能.结论:HGSC支架具备良好的生物相容性,并且对BMSC的骨诱导潜能和HUVEC的血管化具有明显的促进作用,为骨缺损修复提供了具有前景的治疗策略.

目的 探讨仙茅苷(Curculigoside,CUR)对骨质疏松症(osteoporosis,OP)大鼠成骨细胞自噬的影响以及对 lncRNA MEG3/miR-181a-5p信号轴的调节作用.方法 体外培养骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)诱导成骨细胞分化,CCK-8 法筛选CUR浓度;数据库预测lncRNA MEG3 与miR-181a-5p结合位点;利用转染技术将BM-MSCs细胞分为NC组、CUR组、CUR+3-MA组、CUR+pc-NC 组和 CUR+pc-LncRNA MEG3 组,qRT-PCR 检测 lncRNA MEG3、miR-181a-5p 的表达水平,碱性磷酸酶(ALP)染色法检测细胞ALP活性,MDC法检测细胞自噬体数量,免疫荧光检测细胞微管相关蛋白 1-轻链 3(LC3)、自噬效应蛋白(Beclin1)的表达.肌肉注射地塞米松磷酸钠建立OP大鼠,大鼠分为对照组(CT组)、模型组(OP组)、OP+CUR组(灌胃15 mg/kg CUR),CT检测大鼠胫骨骨形态学,Western blot和qRT-PCR分别检测LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1 与lncRNA MEG3、miR-181a-5的表达.结果 25 μg/mL以上浓度的CUR显著提高BM-MSCs细胞增殖活力(P＜0.05);lncRNA MEG3 与miR-181a-5p具有靶向结合位点;与NC组相比,CUR组细胞ALP 活性、自噬体数量以及LC3、Beclin1 表达增加(P＜0.05);与CUR组相比,CUR+3-MA组细胞ALP 活性、自噬体数量以及LC3、Beclin1 表达减少(P＜0.05);与CUR+pc-NC组相比,CUR+pc-LncRNA MEG3 组细胞ALP活性、自噬体数量以及LC3、Beclin1 表达减少(P＜0.05).OP组大鼠骨形态学评价以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、miR-181a-5p表达较CT组下降,lncRNA MEG3 表达增加(P＜0.05);OP+ CUR组大鼠骨形态学评价以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、miR-181a-5p表达较OP组增加,lncRNA MEG3 表达降低(P＜0.05).结论 CUR可能通过调节LncRNA MEG3/miR-181a-5p信号轴促进OP大鼠成骨细胞自噬活性.

仙茅为石蒜科植物仙茅的干燥根茎,主要含有酚类与酚苷类、皂苷元与皂苷类、黄酮类、木脂素类、生物碱等成分[1] . 淫羊藿性热味辛,归肝、肾、脾经,具有补肾阳、强筋骨、祛寒湿等功效. 在精准辨证论治的前提下,中药剂量是疗效的根本保障.

目的:研究仙茅苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生的作用并探讨其机制.方法:健康成年雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、仙茅苷给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO),大鼠神经功能损伤采用Zea-Longa标准评价,Western Blot法检测大鼠缺血侧脑组织p-Akt、Akt、p-GSK-3β、GSK-3β、p-CRMP-2、CRMP-2蛋白的表达,免疫荧光染色法检测大鼠缺血侧脑组织NF200蛋白的表达.结果:与MCAO组比较,仙茅苷能明显改善大鼠的神经功能损伤,促进NF200、p-Akt、p-GSK-3β蛋白的表达,抑制p-CRMP-2蛋白表达.结论:仙茅苷能改善局灶性脑缺血/再灌注大鼠的神经功能缺损,可能通过促进Akt、GSK-3β的磷酸化,抑制CRMP-2的磷酸化,进一步促进轴突再生.