目的:探讨血红素加氧酶-1（HO-1）对巨噬细胞炎症反应的抑制作用及其机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7，取对数生长期细胞用于实验。将RAW264.7细胞分为4组。空白对照组细胞于37 ℃下95%空气、5% CO 2常规培养，不给予任何处理；脂多糖（LPS）模型组在培养基中加入1 mg/L的LPS制备LPS攻击模型；HO-1诱导组在培养基中加入30 μmol/L的HO-1诱导剂血红素孵育1 h后，再加入1 mg/L的LPS孵育；HO-1抑制组在培养基中加入5 μmol/L的HO-1特异性拮抗剂锌原卟啉Ⅸ（ZnPPⅨ）孵育0.5 h后，再加入1 mg/L的LPS孵育。各组加入LPS孵育48 h后取细胞上清液，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测HO-1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）及线粒体自噬标志物微管相关蛋白1轻链3B（LC-3B）的蛋白表达；采用免疫荧光染色法检测活性氧（ROS）的表达。 结果:与空白对照组比较，LPS模型组细胞发生了一定的应激反应，出现线粒体自噬，但部分炎症因子表达受限，与细胞功能受损有关，表现为HO-1、IL-1β、LC-3B、ROS的蛋白表达均明显升高，而TNF-α、TXNIP、NLRP3的蛋白表达均明显降低，说明LPS攻击后细胞受损严重，模型制备成功。与LPS模型组比较，HO-1诱导组HO-1蛋白表达明显增加（HO-1/GAPDH：0.31±0.03比0.22±0.03， P<0.05），TNF-α、IL-1β、TXNIP、NLRP3、LC-3B、ROS蛋白表达均被明显抑制〔TNF-α蛋白（TNF-α/GAPDH）：0.08±0.01比0.45±0.05，IL-1β蛋白（IL-1β/GAPDH）：0.50±0.01比0.82±0.03，TXNIP蛋白（TXNIP/GAPDH）：0.21±0.02比0.28±0.02，NLRP3蛋白（NLRP3/GAPDH）：0.11±0.01比0.17±0.02，LC-3B蛋白（LC-3B/GAPDH）：0.67±0.04比0.92±0.12，ROS（荧光强度）：80.9±12.5比94.1±19.5，均 P<0.05〕，说明诱导HO-1表达可抑制炎症反应和氧化应激，减少线粒体自噬；而拮抗HO-1可促进炎症反应、氧化应激及线粒体自噬，表现为TNF-α、IL-1β蛋白表达被抑制程度较HO-1诱导组明显减轻〔TNF-α蛋白（TNF-α/GAPDH）：0.26±0.02比0.08±0.01，IL-1β蛋白（IL-1β/GAPDH）：0.76±0.01比0.50±0.01，均 P<0.05〕，且TXNIP、NLRP3、LC-3B、ROS蛋白表达均较LPS模型组明显增加〔TXNIP蛋白（TXNIP/GAPDH）：0.43±0.02比0.28±0.02，NLRP3蛋白（NLRP3/GAPDH）：0.24±0.02比0.17±0.02，LC-3B蛋白（LC-3B/GAPDH）：1.12±0.07比0.92±0.12，ROS（荧光强度）：112.0±17.0比94.1±19.5，均 P<0.05〕。 结论:HO-1可通过抑制TXNIP/NLRP3炎症小体活化减少炎症介质释放，从而降低炎症反应。

目的:优选二黄止痛凝胶剂的基质处方。方法:以凝胶剂中卡波姆940、三乙醇胺及甘油量为考察因素，以制剂的外观性状、稳定性、黏度和盐酸小檗碱体外累计释放量为综合评价指标，利用星点设计-效应面法优选最佳处方工艺。结果:拟合回归方程为 Y＝82.25+ 4.95 A+5.19 B+1.41 C+1.51 AB+0.904 0 AC-0.531 9 BC-2.92 A2-1.80 B2-0.182 1 C2， P<0.000 1， r值为0.977，方程回归拟合度较高最佳工艺处方：卡波姆940量为1.84%，三乙醇胺量为卡波姆940的1.30倍，甘油量为13.99 g，3批验证试验的平均综合评分为88.56分，与预测值的偏差分别为2.93%、2.85%、1.55%。 结论:星点设计-效应面法优选的二黄止痛凝胶剂制备工艺稳定，实现了处方优化。

目的:制备1株靶向甲型流感病毒N1亚型神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的功能性抗体FNA1，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，合成FNA1重链以及轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FNA1。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FNA1。ELISA检测FNA1与甲型流感病毒N1亚型NA抗原的结合，流式细胞术分析FNA1与细胞膜表面表达N1亚型NA抗原的结合。通过抗体抑制NA蛋白活性试验检测抗体FNA1的体外功能活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FNA1。FNA1特异性识别结合N1亚型的NA抗原，且呈浓度依赖效应。FNA1能通过结合细胞膜表面表达的N1亚型NA蛋白，有效阻断细胞膜表面的NA活性，从而抑制包装的假病毒从细胞表面释放，继而抑制进一步的靶细胞感染。结论:获得1株具有体外功能活性的靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体FNA1。

目的:观察氧化苦参碱(OM)对过氧化氢(H 2O 2)处理的大鼠胰腺腺泡AR42J细胞株高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达和释放的影响。 方法:应用MTT法检测不同浓度H 2O 2处理对AR42J细胞生存率的影响。将体外培养的AR42J细胞分为对照组、H 2O 2组、H 2O 2＋OM组。H 2O 2组及H 2O 2＋OM组加入等容积的H 2O 2(终浓度0.16 mmol/L)，对照组加入等容积三蒸水，H 2O 2＋OM组在加入H 2O 2前0.5 h加入OM(终浓度0.5 g/L)，培养24 h后收取细胞及细胞上清液。采用蛋白免疫印迹法检测细胞HMGB1蛋白表达，酶联免疫吸附试验检测细胞上清液HMGB1蛋白水平，免疫荧光法检测HMGB1蛋白在细胞内的定位分布。 结果:H 2O 2组细胞HMGB1蛋白表达量、分泌到细胞上清液中HMGB1蛋白量、细胞质HMGB1蛋白占细胞总HMGB1蛋白的比例均显著高于对照组[1.04±0.04比0.69±0.02，(4.84±0.13)μg/L比(2.68±0.07)μg/L，(35.7±2.5)%比(10.7±1.9)%]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；应用OM干预后，细胞HMGB1蛋白表达及分泌量、细胞质中HMGB1蛋白占比分别为0.82±0.02、(3.97±0.10)μg/L、(27.3±1.7)%，均显著低于H 2O 2组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:H 2O 2能够诱导大鼠胰腺腺泡细胞HMGB1的表达和释放，OM干预可减轻H 2O 2致AR42J细胞氧化应激损伤的程度。

目的:通过观察高浓度丁酸钠(sodium butyrate，NaB)(5 mmol/L，8 mmol/L)对单层Caco-2细胞肠屏障模型的作用，及该过程中对NF-κB通路的影响，旨在探讨高浓度NaB破坏单层Caco-2细胞肠屏障模型的可能分子机制。方法:使用不同浓度的NaB及雷公藤甲素(triptolide，TP)(特异性抑制NF-κB)50 nmol/L作用体外培养的Caco-2细胞及单层Caco-2细胞肠屏障模型，按照作用的试剂和浓度分为0 mmol/L NaB(对照组)、50 nmol/L TP组(TP组)、2 mmol/L NaB组(NaB Ⅰ组)、5 mmol/L NaB(NaB Ⅱ组)、8 mmol/L NaB(NaB Ⅲ组)、5 mmol/L NaB＋50 nmol/L TP组(NaB＋TP组)。测定单层Caco-2细胞肠屏障模型的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance，TER)及菊粉-FITC(inulin-FITC)的通透性；用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)及蛋白质印迹法检测各组IL-1β和TNF-α的mRNA及蛋白水平；用核质分离试验检测p65蛋白入核水平的变化。结果:①高浓度NaB(5 mmol/L、8 mmol/L)作用于单层Caco-2细胞肠模型72 h后，与对照组相比，TER显著下降，inulin-FITC通透性显著升高；如5 mmol/L NaB作用于单层Caco-2细胞肠屏障72 h，TER降低至(106.33±4.04)(Ω×cm 2)，inulin-FITC的通透性升高至(12.52±1.82)%，与对照组相比，差异均具有统计学意义( P<0.05)；而使用50 nmol/L TP特异性抑制NF-κB后，其TER升高至(398.33±3.06)(Ω×cm 2)，inulin-FITC的通透性降低至(7.24±0.25)%，差异具有统计学意义( P<0.05)，提示5 mmol/L NaB对肠屏障的破坏作用被显著抑制；②高浓度NaB(5 mmol/L、8 mmol/L)作用Caco-2细胞72 h，IL-1β和TNF-α mRNA及蛋白的表达水平较对照组显著提高，且p65蛋白入核水平也显著提高，差异具有统计学意义( P<0.05)；③在5 mmol/L NaB的基础上，使用TP抑制NF-κB后，可显著抑制高浓度NaB诱导IκB-α的磷酸化及p65蛋白入核，并显著降低IL-1β与TNF-α的表达水平。 结论:高浓度NaB可破坏肠屏障功能，其机制可能与活化NF-κB通路，促进炎症因子释放相关。

目的:探究向日葵花粉微胶囊作为膀胱灌注药物载体的安全性以及有效性。方法:天然向日葵花粉经脱脂、空心化、涂覆海藻酸盐等处理后最终制备出向日葵花粉微胶囊，使用扫描电子显微镜观察花粉的形态特征。体外实验中将小鼠膀胱癌MB49细胞分为花粉共培养组与对照组，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)试验测定细胞活力，并使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞分泌的细胞因子变化。使用异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白(FITC-BSA)作为模拟药物装载进入花粉，测试花粉微胶囊的缓释效果。体内实验选用BALB/c-Nu裸鼠用MB49细胞建立原位膀胱癌模型，用吉西他滨或花粉微胶囊装载吉西他滨进行膀胱灌注化疗，观察治疗效果。两组间差异比较采用单样本 t检验。 结果:CCK-8试验结果表示花粉在不同的浓度与时间上对MB49细胞没有显著细胞毒性( P>0.05)；ELISA实验结果显示花粉微胶囊促进MB49细胞细胞因子[白细胞介素(IL)-2(1.230±0.208) pg/ml比(0.670±0.208) pg/ml( t＝3.297， P<0.05)；IL-6(2 027.00±64.29) pg/ml比(1 550.00±70.00) pg/ml( t＝8.693， P<0.05)；IL-8(26.330±1.528) ng/ml比(22.900±1.054) ng/ml( t＝3.200， P<0.05)；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(99.670±3.512) pg/ml比(75.670±7.024) pg/ml， t＝5.293， P<0.05]分泌，而海藻酸钠涂层减弱这一作用[IL-2(0.830±0.153) pg/ml比(1.230±0.208) pg/ml( t＝3.354， P<0.05)；IL-6(1 770.00±62.45) pg/ml比(2 027.00±64.29) pg/ml( t＝4.966， P<0.05)；IL-8(27.700±1.852) ng/ml比(26.330±1.528) ng/ml( t＝0.990， P>0.05)；TNF-α(88.670±8.505) pg/ml比(99.670±3.512) pg/ml， t＝3.200， P<0.05]。药物释放曲线显示海藻酸盐涂层显著延长向日葵花粉微胶囊的药物释放时间[80%(600 min比5 min)， t＝70.730， P<0.05]。体内实验结果证实，向日葵花粉组小鼠膀胱肿瘤病变数量显著低于直接灌注组(2.20±0.83比5.60±1.14， t＝4.176， P<0.05)。 结论:本研究证明天然向日葵花粉粒在膀胱癌膀胱灌注疗法中作为药物输送载体具有良好的安全性和有效性，是膀胱灌注中一种有希望的新材料。

目的:通过脂多糖（LPS）建立脓毒症相关性脑病（SAE）体外模型，探讨人髓样分化蛋白2（MD2）在LPS导致神经元死亡过程中的作用及内在机制。方法:选择健康C57BL/6J孕鼠，孕期14~18 d，取胎鼠脑皮质组织，用0（空白对照组）、1、5和10 g/L的LPS刺激神经元后24 h，检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量，观察神经元死亡情况，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL-6、IL-1β）水平，以确定建立SAE体外神经炎症模型的最佳LPS剂量。将细胞分为空白对照组和LPS组，用原位末端缺刻标记法（TUNEL）染色检测细胞凋亡情况，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测相关蛋白标志物活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达、坏死性凋亡相关蛋白神经元受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）及磷酸化RIPK3（p-RIPK3）水平，用免疫荧光化学染色检测p-RIPK3和微管相关蛋白2（MAP2）的表达，以评估细胞死亡类型及神经元死亡程度；用Western blotting法检测MD2表达，免疫荧光化学染色观察p-RIPK3及MD2在神经元中的表达和分布，以评估MD2是否参与炎症反应促进神经元死亡。此外，将细胞分为空白对照组、LPS组和MD2干扰肽组（LPS+TC组），检测IL-6、IL-1β、LDH水平，评估干扰MD2能否减轻LPS诱导的神经炎症。结果:10 g/L LPS可诱导明显的神经元死亡，该浓度刺激神经元24 h后LDH释放量较空白对照组明显增加（相对释放量：1.45±0.04比1.00±0.00， P<0.01），神经元发生凋亡及坏死性凋亡，炎症因子IL-6、IL-1β水平显著增加〔IL-6（相对水平）：1.94±0.04比1.00±0.00，IL-1β（相对水平）：1.53±0.09比1.00±0.00，均 P<0.01〕。与空白对照组比较，LPS组TUNEL检测细胞凋亡明显增多，活化caspase-3表达明显增加（活化caspase-3/GAPDH：1.55±0.10比1.00±0.00， P<0.01），p-RIPK3/RIPK3比值明显升高（相对值：1.54±0.06比1.00±0.00， P<0.05），神经元周围p-RIPK3表达显著增多，提示脓毒症环境下神经元发生显著凋亡及坏死性凋亡。同时，与空白对照组比较，LPS组MD2表达量显著增加（MD2/GAPDH：1.91±0.07比1.00±0.00， P<0.01），神经元周围MD2表达显著增多，提示LPS诱导的MD2上调可能在脓毒症神经炎症及诱导神经元死亡中发挥关键作用。此外，与LPS组比较，MD2干扰肽能够降低炎症因子IL-6、IL-1β的表达水平〔IL-6（相对水平）：1.16±0.08比1.94±0.04，IL-1β（相对水平）：1.15±0.05比1.75±0.09，均 P<0.01〕，减少LDH释放（相对释放量：1.09±0.01比1.44±0.04， P<0.05）。 结论:LPS刺激神经元通过MD2诱导神经元炎症反应，最终导致神经元发生凋亡和坏死性凋亡；干扰MD2功能可减轻炎症，抑制神经元死亡。

目的:探讨脓毒症血栓形成的炎症环境中血清来源C5a补体能否激活多型核中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMNs）释放中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs），以及干扰素-λ1/白介素29（interferon-λ1/interleukin 29，IFN-λ1/IL-29）是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法:健康志愿者和脓毒症患者的外周血样分别来自2018—2019年苏州大学附属第二医院门诊和住院部，体外研究脓毒症患者血清C5a刺激的健康志愿者外周血分离的PMNs细胞，IL-29和抗CD88单抗作为NETs释放调节因子，免疫荧光分析（immunofluorescence, IF）PMNs上NETs的释放水平，免疫印迹技术（immuno blot，IB）评估PMNs上组织因子（tissue factor，TF）的表达，荧光光谱法（fluorescence spectroscopy，FS）测定上清液中循环DNA水平，酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定凝血酶-抗凝血酶（thrombin-antithrombin，TAT）复合物水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:以脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs表达水平（20.5±3.7）%为对照组，IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF表达的NETs释放，采用IF技术测定的表达水平分别为（5.0±1.5）%、（7.3±3.1）%，差异均有统计学意义（ q=9.23和8.73，均 P<0.01）。IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF水平，IB测定的TF表达水平分别为（0.52±0.03）%、（0.57±0.02）%，与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs的TF表达水平（0.81±0.03）%进行比较，差异均有统计学意义（ q=3.44和3.21，均 P<0.05）。IL-29和抗CD88单抗降低了NETs相关的TAT复合物的水平，分别为（3.3±0.4）ng/mL、（4.6±0.7）ng/mL，与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs相关的TAT复合物水平（7.8±0.7）ng/mL比较，差异均有统计学意义（ q=6.77和5.27，均 P<0.01）。 结论:脓毒症患者血清来源的C5a诱导健康志愿者PMNs内TF的累积和表达TF的NETs释放，血清C5a促进了NETs依赖性凝血酶的生成。IL-29具有抑制C5a诱导的NETs释放及其相关的凝血酶生成。

目的:了解淡豆豉水煎液体外抗流感病毒作用，为抑制病毒的新型中药开发提供基础。方法:以A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)（以下简称PR8病毒）感染狗肾上皮细胞(MDCK)作为模型，应用噻唑兰(MTT)法评估淡豆豉水煎液的安全性。以血液凝集抑制实验和神经氨酸酶活性抑制实验检测淡豆豉水煎液对流感病毒吸附和释放的影响。设立PR8病毒+淡豆豉水煎液组和PR8病毒组，以实时荧光定量PCR、Western印迹试验、免疫荧光的方法检测淡豆豉水煎液对病毒基因转录水平和蛋白表达水平的影响。结果:6.25 mg/mL的淡豆豉水煎液能够抑制1 HAU流感病毒的吸附。PR8+淡豆豉水煎液组的子代病毒血凝效价为PR8组的1/8。2 000 μg/mL的淡豆豉水煎液能够抑制大于80%的神经氨酸酶活性。在第24小时，PR8+淡豆豉水煎液组的NP和M1基因转录水平分别为3 444.52±378.35和98 737.80±1 643.00；NP、M1a和M2e蛋白表达水平分别为0.39±0.03、0.54±0.01和0.82±0.02，均低于PR8组( t=-16.03、-16.17、-39.26、-272.80和-220.00， P均<0.05)。 结论:淡豆豉水煎液通过影响流感病毒生命周期的吸附、基因转录和翻译、流感子代病毒释放多个阶段，在体外发挥直接抗流感病毒作用。

目的:探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）焦亡的影响。方法:通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数（MOI）= 50，下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡；将BMDM分为对照组、白念珠菌组，分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h，实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18 mRNA表达水平，Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后，酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型（WT）BMDM及GSDMD敲除（KO）BMDM 15 min，采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率；诱导6 h后，采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶（LDH）释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β +白念珠菌组，用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对 t检验、Kruskal-Wallis检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。 结果:白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象，证实焦亡发生；与对照组相比，白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高（ t = 13.02、17.51， P =或<0.001），而IL-18 mRNA表达水平无明显变化（ P = 0.486），且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高（ H = 12.90， P = 0.012），而IL-18的分泌水平无明显变化（ F = 0.48， P = 0.753），且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组（ F = 24.22， P = 0.008）。白念珠菌体外诱导15 min后，GSDMD KO BMDM[（50.3 ± 1.10）%]对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM[（58.53 ± 1.19）%， t = 5.09， P = 0.007]；白念珠菌体外诱导6 h后，流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率（38.40% ± 0.50%）高于WT组BMDM（34.37% ± 0.52%）， t = 4.72， P = 0.009；LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率（22.52% ± 0.18%）高于WT BMDM（12.48% ± 0.15%）， t = 42.36， P<0.001；IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低（均 P<0.001）。 结论:白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡，焦亡的发生可促进IL-1β释放，并通过提高巨噬细胞的免疫活性，降低巨噬细胞死亡率。