目的:探讨RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）中双特异性磷酸酶8（DUSP8）DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）1之间的相互作用，及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法:培养RA-FLS和正常FLS，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术，构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位，免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:DUSP8在RA-FLS mRNA[（2.4±0.6）和（11.2±0.8）， t=21.63， P<0.001]和蛋白表达[（0.24±0.04）和（0.74±0.08）， t=9.45， P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比，在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6），（92.5±1.8），（56.4±4.4）， F=138.60， P<0.001]，增加细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（12.6±1.3）%和（27.5±3.0）%， F=16.98， P<0.001]，上调细胞的DUSP8'[（0.49±0.05），（0.45±0.04）和（0.73±0.07）]、Bax[（0.39±0.06），（0.36±0.05）和（0.89±0.10）]蛋白表达水平，下调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.16）和（0.70±0.08）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.65±0.07）和（0.39±0.03）]蛋白表达水平（均 P<0.001）；与空白对照组和沉默对照组相比，在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6）和（91.1±2.9）和（128.3±4.6）， F=137.50， P<0.001]，降低细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（13.2±1.2）%和（5.4±0.7）%， F=16.98， P<0.001]，下调细胞中的DUSP8[（0.492±0.048）和（0.432±0.051）和（0.102±0.024）]、Bax[（0.391±0.062）和（0.411±0.058）和（0.090±0.011）]蛋白表达水平，上调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.15）和（1.93±0.22）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.68±0.06）和（0.93±0.11）]蛋白表达水平（均 P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。 结论:DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化，抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖，并促进凋亡。

目的:探讨促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌损伤的影响及其机制。方法:将野生型(WT)和MKP1转基因(MKP1)小鼠(购自武汉华联科生物技术有限公司)各自随机分为两组：WT、WT＋TNF-α组和MKP1、MKP1＋TNF-α组。WT＋TNF-α组和MKP1＋TNF-α组的小鼠按6 mg/kg的剂量腹腔注射TNF-α；WT组和MKP1组的小鼠腹腔注射等量的生理盐水。检测各组小鼠心肌MKP1表达、心肌损伤标志物水平、心肌细胞线粒体分裂相关蛋白、抗氧化剂和呼吸复合物表达以及线粒体凋亡情况，采用 t检验分析组间差异。 结果:与WT＋TNF-α组比较，MKP1＋TNF-α组的小鼠心肌线粒体分裂动力蛋白相关蛋白1(Drp1)和线粒体分裂因子(Mff)相对表达下调(Drp1：1.80±0.20比1.00±0.30、 t＝－10.134、 P<0.05；Mff: 2.80±0.20比1.10±0.30、 t＝－8.313、 P<0.05)，差异有统计学意义，还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平升高[GSH：(29±2) nmol/mg比(49±3) nmol/mg、 t＝12.127、 P<0.05；SOD：(2.2±0.1) U/mg比(8.1±0.2) U/mg、 t＝10.301、 P<0.05；GPX：(50±4) U/mg比(172±6) U/mg、 t＝11.136、 P<0.05]，差异有统计学意义，线粒体呼吸复合物(complex)Ⅲ和ⅢⅡ相对表达上调(complex Ⅲ：1.00±0.20比2.20±0.12、 t＝10.715、 P<0.05；complex Ⅱ：1.10±0.09比1.90±0.08、 t＝8.312、 P<0.05)，差异有统计学意义，天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)相对表达下调(Caspase-9: 2.20±0.11比1.15±0.09、 t＝－5.210、 P<0.05；bax：2.30±0.12比1.42±0.09、 t＝－6.006、 P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:TNF-α诱导心肌损伤的机制涉及线粒体的过度分裂、线粒体氧化还原平衡和能量代谢的破坏以及线粒体凋亡。而MKP1过表达可明显抑制这些不良反应的发生发展，保护线粒体功能，抑制心肌损伤。

目的:探讨山楂酸（MA）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的影响。方法:使用ISO诱导成年雄性C57BL/6小鼠心肌纤维化，MA给药2周，检测MA对心功能和纤维化的影响。RT-PCR和免疫印迹检测纤维化标志物和信号通路分子变化。将原代培养的大鼠成纤维细胞中分别加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）、PBS+p38 MAPK抑制剂（SB203580）、PBS+MA、ISO、ISO+SB203580、ISO+MA。48 h后收集细胞进行后续检测。结果:本研究成功制备心肌纤维化小鼠模型，ISO+MA组的左心室短轴缩短率（FS）和左心室内压最大上升速率和最大下降速率（±dp/dt）显著高于ISO组[分别为（35.1±1.8）%比（28.5±2.6）%、（7 256±153）mmHg/s比（6 402±240）mmHg/s、（7 156±163）mmHg/s比（6 319±219）mmHg/s， P<0.05]；ISO+MA组间质和血管周胶原沉积程度高于ISO组（ P<0.05），ISO+MA组的COL-1、COL-3和TGF-β mRNA相对水平显著低于ISO组（1.70±0.24比3.69±0.34、1.72±0.56比4.84±0.82、1.52±0.19比2.64±0.29， P<0.05）；ISO+MA组的p38 MAPK和Smad3的磷酸化水平和TGF-β1蛋白表达水平低于ISO组（1.67±0.35比2.61±0.58、1.68±0.23比2.52±0.19、1.56±0.15比2.48±0.26， P<0.05）；体外细胞实验结果显示，p38 MAPK特异性抑制剂（SB203580）组和MA组的COL-1、COL-3、TGF-β mRNA水平均显著低于ISO组（分别为2.25±0.51，2.16±0.48比5.29±1.21；1.58±0.34，1.69±0.29比4.97±1.32；1.41±0.31，1.55±0.38比3.53±0.56， P<0.05）；SB203580组和MA组的p38 MAPK、Smad3的磷酸化水平均显著低于ISO组，TGF-β1的蛋白表达低于ISO组（分别为1.81±0.18，1.77±0.16比2.56±0.32；1.85±0.21，1.81±0.17比2.48±0.37；1.84±0.24，1.72±0.17比2.52±0.29， P<0.05）。 结论:MA可抑制p38 MAPK的磷酸化，进而抑制经典的TGF-β1/Smads纤维化信号通路来发挥抗纤维化的作用。

目的:通过体外培养神经细胞(SH-SY5Y)观察FK1706对神经细胞再生的作用并探讨其机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞，根据不同处理分别分为FK1706组、神经生长因子组(NGF)、FK1706＋NGF组、FK1706＋NGF＋格尔德霉素(Geldanamycin)组和空白对照组。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同组细胞增殖活性，测量细胞轴突长度。分子生物学检测不同细胞中磷酸化促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(p-Raf)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、p-Raf/Raf及p-ERK/ERK表达水平。通过免疫共沉淀(IP)检测不同细胞中热休克蛋白90(HSP90)与Raf结合的复合体表达水平。使用方差分析比较各组间数据。结果:CCK-8检测显示FK1706＋NGF组细胞增殖活性最强(1.12±0.08)，高于FK1706组和NGF组(0.61±0.07、0.89±0.04)，差异有统计学意义( t＝6.824， P<0.05)，加入格尔德霉素可以抑制其增殖活性(0.31±0.02)；FK1706＋NGF组细胞轴突最长，轴突长度为(277.40±18.64) μm，高于FK1706组和NGF组[(71.24±6.12)、(144.61±11.20) μm]，差异有统计学意义( t＝14.577， P<0.05)，FK1706＋NGF＋格尔德霉素组轴突长度[(97.06±11.29) μm]低于FK1706＋NGF组；NGF组p-Raf、p-ERK表达水平分别为(0.58±0.02)和(1.24±0.03)，高于对照组(0.25±0.03、0.76±0.02)和FK1706组(0.23±0.02、0.78±0.03， t1＝23.335， t2＝9.163， P<0.05)，差异有统计学意义，加入FK1706可以增强NGF组p-Raf和p-ERK的表达水平( t1＝21.213， t2＝2.191， P<0.05)，差异有统计学意义，加入格尔德霉素可以抑制FK1706和NGF的协同作用，与细胞轴突长度和增殖活性检测结果一致。IP检测显示FK1706＋NGF组HSP90/Raf复合体相对表达水平最高(1.56±0.04)，显著高于其他组( t＝16.398， P<0.05)，差异有统计学意义，FK1706＋NGF＋格尔德霉素组HSP90/Raf的表达水平(0.93±0.05)低于FK1706组和FK1706＋NGF组。 结论:FK1706可以促进HSP90和Raf结合，提高大鼠肉瘤/促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶/促分裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(Ras/Raf/MAPK/ERK)信号通路中Raf和ERK磷酸化水平，促进神经细胞增殖和轴突生长。

目的:观察祖师麻干浸膏粉及不同萃取部位的皮肤刺激性,并基于生物信息学预测其刺激性成分及作用机制.方法:将斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分为完整皮肤组和破损皮肤组,观察连续给药7 d和停药后3 d皮肤状况.运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)查询祖师麻刺激性成分和作用靶点.通过GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等数据库收集疾病靶点.运用Metascape平台进行基因本体(GO)富集以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,将核心靶点与祖师麻刺激性成分进行分子对接.结果:祖师麻干浸膏粉低、中剂量组对破损皮肤有轻微红斑、水肿反应;祖师麻干浸膏粉高剂量组、石油醚部位和二氯甲烷部位对完整皮肤和破损皮肤均有轻微红斑、水肿反应;乙酸乙酯部位和水层部位均无红斑、水肿反应.2)从祖师麻活性成分中筛选出7种刺激性成分,通路富集的主要通路为磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、细胞增殖的肉瘤基因(Ras)信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、端粒结合蛋白(Rap1)信号通路和松弛素(Relaxin)信号通路等.分子对接结果中瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚与核心靶点的结合最稳定.结论:祖师麻干浸膏粉高剂量下有轻微皮肤刺激性,可能是存在于石油醚和二氯甲烷部位中的瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚等通过多靶点、多通路的复杂作用促进炎症介质的生成,引起皮肤轻微红斑和水肿.

目的 采用网络药理学和分子对接技术分析大血藤-败酱草抗结直肠癌的分子机制.方法 首先采用公共数据库挖掘大血藤-败酱草的相关活性成分和靶点以及结直肠癌的相关靶点,筛选出结直肠癌治疗的潜在靶点.然后进行中药-成分-靶点网络和蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,采用基因本位(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析治疗结直肠癌涉及的分子功能、细胞成分、生物过程及相关通路,并构建靶点-通路网络,筛选结直肠癌治疗的关键靶点.最后采用分子对接技术评价关键成分与靶点的亲和力.结果 大血藤-败酱草治疗结直肠癌的成分主要是芹菜素、槲皮素、大黄素等,涉及促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)1、MAPK3、蛋白激酶B丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、磷脂酰肌醇-4,5二磷酸3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)等多个靶点.GO分析主要富集于蛋白质磷酸化、蛋白激酶活性、转录调控复合物等方面;KEGG通路富集分析显示,癌症通路、表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药性、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路等均是结直肠癌治疗的重要通路.芹菜素、槲皮素、大黄素与MAPK1、MAPK3和PIK3CA均有强烈亲和力,与AKT1亲和力较好,芹菜素-PIK3CA、槲皮素-MAPK1、大黄素-PIK3CA能够形成相对稳定的复合物.结论 大血藤-败酱草可能通过抑制MAPK1、MAPK3、和PIK3CA靶蛋白的表达,通过调控PI3K/AKT、MAPK信号通路介导的细胞增殖、迁移和凋亡等过程发挥抗结直肠癌作用.

目的 探讨参桃软肝方抗肝癌的作用及机制.方法 四甲基噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2活性及胞内磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/丝裂原活化蛋白激酶(Phosphatidylinositol-3-kinase/Protein Kinase B/mitogen-activated protein kinase,PI3K/Akt/MAPK)抑制剂:LY294002、Atk抑制剂(Akt inhibitor,Akti)、分裂原活化抑制剂(MEK inhibitor,MEKi)、c-Jun氨基末端蛋白激酶抑制剂(c-Jun N-terminal protein kainse inhibitor,JNKi)、凋亡抑制剂(Z-VAD)、自噬抑制剂(Wortmanin)、铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)、细胞坏死抑制剂(Necrostatin-1)对参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2活性的影响;乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2的毒性作用;实时荧光定量(Real-time PCR)检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2焦亡标志物白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2中Akt/ERK信号通路关键蛋白Akt、ERK、P-ERK蛋白表达的影响,凋亡信号通路关键蛋白半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase 3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)、Bcl2-Associated X的蛋白质(Bax),细胞焦亡标志物卵裂半胱天冬酶1(Cleavaged Caspase-1)蛋白表达的影响.结果 参桃软肝方及醇提上清和沉淀都能有效抑制人肝癌细胞HepG2的活性(P<0.05),LY294002、Wortmanin、Akti、MEKi、JNKi、Z-VAD、Ferrostatin-1、Necrostatin-1对参桃软肝方、醇提上清和沉淀抑制人肝癌细胞HepG2活性没有显著的影响;参桃软肝方促进人肝癌细胞HepG2中LDH的释放,引起细胞毒性;参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1的表达;参桃软肝方降低人肝癌细胞HepG2中Akt的蛋白表达,升高Caspase3蛋白表达量.结论 参桃软肝方具有抑制肝癌细胞活性、抗肝癌的作用,其作用机制可能与自噬、坏死性凋亡等程序性死亡方式及PI3K/Akt/MAPK信号传导无关;能抑制Akt的表达和促进Caspase3表达有关.同时,能降低焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1表达,很可能通过阻断细胞焦亡过程起作用.参桃软肝方抗肝癌活性优于总提物醇提上清和沉淀,醇提上清和沉淀很可能存在协同抗肝癌的作用.

目的 研究穗花杉双黄酮(AF)调节Ras/Raf/促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对鼻咽癌(NPC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 将NPC细胞株CNE-1随机分为对照组、低浓度AF组(AF-L组,50 μmol·L-1 AF)、中浓度 AF 组(AF-M 组,75 μmol·L-1 AF)、高浓度AF组(AF-H组,125 μmol·L-1 AF)和高浓度AF+Ras激活剂RASAL1组(AF-H+RASAL1 组,125 μmol·L-1 AF+2 ng·mL-1 RASAL1).以噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖能力;以划痕愈合实验检测细胞迁移能力;以Transwell实验检测细胞侵袭能力;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测细胞中Ras/Raf/MEK/ERK信号通路相关蛋白表达.结果 对照组、AF-M组、AF-H 组 CNE-1 细胞 OD490值(48 h)为 0.62±0.06、0.45±0.05、0.29±0.03;细胞划痕愈合率为(38.66±4.07)％、(23.14±2.20)％、(12.47±1.15)％;细胞侵袭数目为(137.59±10.25)、(103.42±8.49)、(76.38±7.96)个;Ras 蛋白表达水平分别为0.84±0.08、0.59±0.06、0.34±0.03;Raf蛋白表达水平分别为0.79±0.08、0.53±0.05、0.24±0.02;MEK 蛋白表达水平分别为 0.87±0.09、0.64±0.06、0.28±0.03;ERK1/2 磷酸化水平分别为 0.75±0.08、0.50±0.05、0.21±0.02;细胞凋亡率分别为(4.25±0.63)％、(18.42±2.10)％、(35.28±2.26)％,以上指标,AF-M组、AF-H组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).RASAL1减弱了 AF对NPC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,抑制了其凋亡.结论 AF可能通过下调Ras/Raf/MEK/ERK信号通路抑制NPC细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡.

目的 探究复方贞术调脂胶囊(FTZ)干预下调控促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(mitogen-activa-ted protein kinase kinase kinase 2, MEKK2)-Wnt偶联拮抗β-catenin泛素化,及对骨量变化、细胞成骨能力的影响.方法 SPF级雄性大鼠随机均分为正常对照组、甲强龙组(模型组)、甲强龙+生理盐水组(空白对照组)和甲强龙+FTZ组(实验组).分别对股骨近端松质骨进行Micro-CT检查、组织病理染色,测定Wnt3a、MEKK2、β-catenin蛋白表达;提取模型BMSCs,经FTZ含药血清干预后,进行碱性磷酸酶和茜素红染色;测定成骨分化相关基因ALP、Runx2、OCN表达;测定MEKK2、β-catenin蛋白表达;以及β-catenin/TCF转录水平.结果 1)在Micro-CT中,实验组与模型组相比,前者BV/TV、Tb.Th、Tb/N等值降低,Tb/sp升高(P<0.05).ROI三维重建可见实验组骨小梁骨质改善,局部性修复;2)经苏木精-伊红染色中,实验组可见骨小梁密度较模型组高、骨小梁形态较好;3)实验组骨组织中Wnt3a、MEKK2、β-catenin表达较模型组增加(P<0.05);4)GIOP大鼠模型提取BMSCs并予BMP2诱导,经FTZ含药血清(实验组)干预后,碱性磷酸酶和茜素红染色结果提示实验组成骨反应增强(P<0.05);5)BMSCs经FTZ含药血清干预,可提高β-catenin/TCF转录活性(P<0.05);促进β-catenin、MEKK2蛋白表达(P<0.05).结论FTZ通过调控MEKK2-Wnt偶联拮抗β-catenin泛素化防治GIOP,从而改善微观骨性结构.

运动训练可对骨骼肌产生深刻影响,长期反复刺激可使骨骼肌发生适应性改变.而骨骼肌线粒体作为骨骼肌的动力来源,为骨骼肌行使正常功能提供保障,其对运动产生的适应性变化表现为:适宜的运动可促进骨骼肌线粒体生物合成,加速受损或老化线粒体的降解,改变线粒体动力学,重构线粒体网络.对骨骼肌线粒体运动适应机制的研究表明,运动可通过调控过氧化物酶体增殖因子激活受体共激活因子-1α(PGC-1α)、有丝分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)等因子及其相关信号通路促进线粒体生物合成;运动还可通过影响线粒体融合蛋白、分裂蛋白及AMPK的表达,促进线粒体自噬,以清除损伤或老化的线粒体.通过线粒体新生与损伤线粒体降解,可使线粒体功能增强,线粒体网络结构重构,从而满足运动需求.