目的:探索miR-18a-5p影响膀胱癌(BC)增殖迁移能力的分子调控机制。方法:选取本院2019年至2021年行全膀胱切除手术的30例膀胱癌患者，收集癌组织和癌旁组织样本。根据转染不同的小分子物质，将T24和EJ细胞分为对照组、miR-18a-5p过表达组、miR-18a-5p干扰组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-18a-5p和PTEN基因的表达。采用Western blot检测PTEN蛋白水平的表达。采用EdU实验检测细胞增殖。采用Transwell实验检测细胞迁移。采用双荧光素酶实验验证miR-18a-5p与PTEN靶向关系。通过裸鼠皮下移植瘤实验验证miR-18a-5p对BC细胞增殖能力的影响。结果:miR-18a-5p在癌组织与T24和EJ细胞中均高表达(均 P<0.05)。在PTEN-WT和miR-18a-5p模拟物共同转染后，双荧光素酶表达明显下降( P<0.05)。miR-18a-5p过表达会导致PTEN表达水平下调( P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示，与对照组比较，miR-18a-5p过表达组的肿瘤体积和重量明显增加(均 P<0.05)。与对照组比较，miR-18a-5p过表达组的PTEN表达下调，而miR-18a-5p表达水平升高(均 P<0.05)。miR-18a-5p过表达增强了T24和EJ细胞的迁移能力和增殖能力(均 P<0.05)。干扰miR-18a-5p表达，抑制了T24和EJ细胞的迁移能力(均 P<0.05)。经EdU实验验证，干扰miR-18a-5p表达，抑制了T24和EJ细胞的增殖能力(均 P<0.05)。干扰miR-18a-5p表达后，T24和EJ细胞系中miR-18a-5p表达水平降低(均 P<0.05)。 结论:miR-18a-5p通过靶向PTEN基因促进T24和EJ细胞增殖和迁移能力；miR-18a-5p作为癌基因，有可能成为BC新的潜在生物标志物和治疗靶点。

目的:筛选睑板腺癌（MGC）差异表达微小RNA（miRNA）并探究微小RNA-3907（miR-3907）对MGC增殖和迁移的影响及作用机制。方法:实验研究。收集2011年7月至2019年1月于天津医科大学眼科医院经组织病理学确诊的MGC患者的癌组织样本及癌旁组织样本。应用miRNA芯片对其中5份MGC与癌旁组织差异表达的miRNA进行筛选。选取MGC中表达显著上调的miR-3907为观察对象，通过生物数据库和双荧光素酶实验预测并鉴定miR-3907靶基因。采用免疫组织化学染色法测定18份MGC组织及6份癌旁组织样本中靶基因的蛋白表达水平。在培养的MGC原代细胞中分别进行miR-3907过表达、miR-3907敲减、靶基因敲减、miR-3907敲减+靶基因敲减转染并分别设组，采用荧光定量PCR和Western印迹法检测转染后各基因mRNA和蛋白的表达水平，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）和划痕实验评估转染后MGC细胞的增殖和迁移能力，并进行比较。统计学方法主要为Fisher确切概率检验、独立样本 t检验、双因素重复测量方差分析。 结果:与癌旁组织样本相比，MGC样本共筛选出表达上调的miRNA 22个，表达下调的miRNA 5个，其中miR-3907表达显著上调。生信数据库与双荧光素酶报告显示血小板凝血蛋白酶1（THBS1）为miR-3907的下游靶基因。癌旁组织中THBS1蛋白阳性表达率（6/6）显著高于MGC组织（5/18），差异有统计学意义（ P=0.003）。与对照组比较，miR-3907过表达组48、72 h细胞增殖能力显著增强（ F=3.70、2.65）；24 h后细胞迁移率显著增高（54.6%±3.4%与34.2%±0.6%比较； t=8.34）；miR-3907敲减组24、48、72 h细胞增殖能力降低（ F=3.10、2.17、3.09）、24 h细胞迁移率显著降低（40.8%±2.8%与69.7%±2.7%比较； t=10.42）；THBS1敲减组24、48和72 h细胞增殖能力增强（ F=3.84、3.79、2.24）、24 h后细胞迁移率显著增加（82.5%±1.9%与37.6%±5.1%比较； t=11.74）；miR-3907敲减+THBS1敲减组24、48 h细胞增殖能力增强（ F=3.97、3.31）、24 h细胞迁移率显著增高（56.9%±2.2%与41.9%±4.3%比较； t=3.53）；差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:MGC与癌旁组织之间存在差异表达miRNA，其可能与MGC发生和发展有关；其中差异显著的miR-3907可以促进MGC增殖和迁移，并主要通过抑制THBS1表达发挥作用。

目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN）对子宫内膜腔上皮细胞极性的调控及对胚胎着床的影响。方法:通过实时荧光定量PCR、Western blotting、细胞免疫荧光实验比较非容受态子宫内膜腔上皮细胞HEC-1A与容受态子宫内膜腔上皮细胞RL95-2之间PTEN的表达及定位差异；PTEN干扰质粒转染HEC-1A细胞，检测紧密连接相关蛋白质表达水平，透射电子显微镜检测紧密连接结构，Transwell实验检测细胞运动能力，与绒毛膜癌细胞JAR共培养检测HEC-1A细胞与JAR细胞之间的黏附水平；向体外培养的HEC-1A细胞分别加入二甲基亚砜、17β-雌二醇、孕酮、17β-雌二醇+孕酮，检测卵巢激素对PTEN表达的影响。结果:相较HEC-1A细胞，RL95-2细胞 PTEN基因及蛋白质表达水平均显著降低（ P均=0.003）；PTEN主要定位于RL95-2细胞核，而在HEC-1A细胞中，PTEN主要定位于细胞质；与质粒载体对照组相比，敲降 PTEN基因后，HEC-1A细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-4表达水平显著降低（ P<0.001， P=0.038， P<0.001），细胞间紧密连接长度降低（ P=0.046），迁移与侵袭能力增强（ P均<0.001），与JAR细胞之间黏附率增强（ P=0.016）；与空白对照组（二甲基亚砜组）相比，17β-雌二醇组、孕酮组及17β-雌二醇+孕酮组的PTEN蛋白表达水平均显著降低（ P均<0.001），17β-雌二醇+孕酮组的PTEN蛋白表达水平显著低于17β-雌二醇组和孕酮组（ P均=0.001），孕酮组与雌二醇组的PTEN蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:不同容受状态的子宫内膜细胞PTEN表达存在差异，雌二醇和孕酮可能通过抑制PTEN在子宫内膜的表达，进一步调控子宫内膜上皮细胞间紧密连接结构及细胞极性，从而增强子宫内膜容受性。

目的:探讨miR-138-5p靶向HIF-1α对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法:将GRC-1细胞分为四组，分别为GRC-1组、miR-138 mimic组、pc-HIF-1α组及共转染组(mimic+pc-HIF-1α组)，并将mimic-scramble组设置为miR-138 mimic转染的阴性对照组。采用荧光素酶报告实验验证miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系，采用qRT-PCR检测miR-138 mimic对GRC-1细胞HIF-1α mRNA水平的影响，采用Western blot检测miR-138对GRC-1细胞HIF-1α蛋白水平的影响。分别采用CCK-8、流式细胞术和划痕实验检测miR-138-5p靶向HIF-1α对GRC-1细胞的增殖、凋亡和迁移的影响。结果:荧光素酶报告实验结果显示miR-138-5p可靶向HIF-1α。与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的miR-138-5p mRNA表达水平较高，HIF-1α mRNA表达水平较低(均 P<0.01);与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的HIF-1α蛋白表达水平较低，而pc-HIF-1α组的HIF-1α蛋白表达水平较高(均 P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的HIF-1α蛋白表达水平低于pc-HIF-1α组( P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞增殖倍数较低，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞增殖倍数较高(均 P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞增殖倍数低于pc-HIF-1α组，差异有统计学意义( P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞凋亡率较高，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞凋亡率较低(均 P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞凋亡率高于pc-HIF-1α组( P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞划痕愈合率较低，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞划痕愈合率较高(均 P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞划痕愈合率低于pc-HIF-1α组( P<0.01)。 结论:miR-138-5p可通过靶向HIF-1α，负向调控HIF-1α mRNA和蛋白的表达，进而减弱人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移，促进其凋亡。

目的:探讨高级别卵巢浆液性癌（HGSOC）组织中内皮素A受体（ETAR）表达的临床意义；设计ETAR羧基末端（ETAR-C）氨基酸序列来源的ETAR-C融合多肽，研究其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的体外抑癌作用。方法:（1）选择2007年1月1日至2017年12月31日在徐州市中心医院接受手术治疗、术后病理检查确诊为HGSOC且有完整临床病理资料及随访资料的患者共126例，收集其癌组织标本，采用逆转录-PCR技术检测HGSOC组织中ETAR mRNA的表达，并分析其临床意义。（2）以ETAR-C氨基酸序列为基础设计ETAR-C融合多肽，通过体外表达、纯化ETAR-C融合多肽，采用划痕实验、侵袭实验分别检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞的迁移、侵袭能力，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测ETAR-C融合多肽处理后顺铂耐药卵巢癌SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的化疗敏感性，蛋白印迹（western blot）法检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞中β抑制蛋白1（β-arrestin-1）的表达。结果:（1）HGSOC组织中ETAR mRNA的相对表达水平为18.6±5.1，X-Tile软件分析显示最佳截断值为61.7%，据此将HGSOC患者分为ETAR mRNA高表达（76例）和低表达（50例）。ETAR mRNA高表达与HGSOC患者的腹水量、铂类药物耐药和血清癌抗原125（CA 125）水平均显著有关（ P均<0.05），而与HGSOC患者的年龄、术后残留灶大小无关（ P均>0.05）；ETAR mRNA高表达和低表达患者的5年无进展生存率分别为18.4%、28.0%，5年总生存率分别为38.2%、52.0%，两者分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.046， P=0.034）。（2）划痕实验和侵袭实验结果均显示，内皮素1（ET-1）、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3和CAOV3细胞的划痕愈合率和细胞侵袭率分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。MTT比色法检测显示，加入不同浓度（4、6、8、10、12、24 μg/ml）顺铂后，ETAR-C融合多肽处理后的SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的抑制率均显著高于对照细胞（ P均<0.05）。western blot法检测显示，ET-1、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3细胞（分别为1.85±0.09、1.13±0.09）和CAOV3细胞（2.14±0.15、1.66±0.12）中β-arrestin-1蛋白的表达水平分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:ETAR mRNA高表达HGSOC患者的预后显著差于ETAR mRNA低表达者，ETAR可能成为HGSOC治疗的新靶点。干扰ETAR与β-arrestin-1相互作用的ETAR-C融合多肽具有良好的体外抑制卵巢癌细胞的效果，具有临床应用潜力。

目的:运用基因芯片技术筛查与黑素瘤相关的DNA异常甲基化位点，初步构建黑素瘤特异性甲基化谱。方法:采用Illumina Human Methylation 450K全基因组甲基化芯片对6例黑素瘤组织及其瘤旁组织标本进行全基因组DNA检测，得出差异DNA甲基化位点。采用Gene Ontology（GO）富集分析及KEGG_Pathway分析了解基因功能。结果:基因芯片检测结果显示，黑素瘤组织与瘤旁组织存在差异甲基化位点，共27 779个，其中16 673个为高甲基化位点，11 106个低甲基化位点。提高筛选条件为 P < 0.01、︳Δβ︳> 0.2，过滤掉所有单核苷酸多态性相关探针、位于XY染色体上的探针以及交叉反应的探针，共筛选得到4 883个差异甲基化位点，其中1 459（30%）个位于启动子区（包括TSS1500、TSS200、5′UTR、1st Exon）。GO富集分析显示，差异甲基化基因参与的生物学过程主要包括细胞生长、分化、黏附、运动迁移、信号转导及转录调控等。KEGG_Pathway分析显示，差异甲基化基因主要参与黏着斑、癌症通路、转化生长因子β信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、黑素生成、趋化因子信号通路、黏合连接、钙信号通路、细胞黏附分子、MAPK信号通路、Wnt信号通路、JAK-STAT信号通路。基于"启动子区高甲基化位点对应的前16个基因、出现甲基化频率最高（CpG位点≥ 7）的基因、具有一定的功能或参与某条信号通路"条件，选出8个基因（ KAAG1、 DGKE、 SOCS2、 TFAP2A、 GNMT、 GALNT3、 ANK2、 HOXA9）作为黑素瘤候选生物标志物。 结论:黑素瘤组织存在较多高甲基化基因，8个差异甲基化基因有可能作为黑素瘤的生物标志物。

目的:研究子痫前期（PE）产妇胎盘组织中长链非编码RNA（lncRNA）的差异表达及其中之一MIR210HG对绒毛膜滋养层细胞系HTR8/SVneo细胞生物学特性的影响，并对MIR210HG进行功能分析。方法:选取2018年7月至2019年7月青岛大学附属医院收治的PE产妇39例（PE组）和同期正常妊娠产妇39例（对照组）。（1）采用转录组测序（RNA-seq）技术分析两组产妇胎盘组织中差异表达的lncRNA；实时荧光定量PCR技术方法检测两组产妇胎盘组织中差异表达的lncRNA之一MIR210HG的表达水平，并分析MIR210HG表达水平与收缩压、舒张压和新生儿出生体重的相关性。（2）构建小分子干扰RNA（siRNA），转染HTR8/SVneo细胞以敲低MIR210HG的表达，实验分为两组，即MIR210HG敲低（KD）组（HTR8/SVneo细胞转染siRNA敲低了MIR210HG的表达）和阴性对照（NC）组（HTR8/SVneo细胞转染NC siRNA），采用活细胞计数（CCK-8）法、穿膜小室（transwell小室）体外实验检测两组HTR8/SVneo细胞增殖和迁移能力的变化。（3）采用RNA相互作用百科全书（ENCORI）数据库预测与MIR210HG相互作用的RNA，并采用基因本体（GO）功能注释、京都基因和基因组百科全书（KEGG）和BioCarta通路富集方法对MIR210HG的功能进行分析。结果:（1）RNA-seq技术共检测出显著差异表达的lncRNA 26个，其中表达上调21个、下调5个。MIR210HG在PE组产妇胎盘组织中的表达水平显著高于对照组（分别为9.30 ±1.90、1.10 ±0.20； t=4.425， P<0.01）；MIR210HG的表达水平与收缩压（ r2=0.234， P<0.05）和舒张压（ r2=0.190， P<0.05）均呈线性正相关关系，与新生儿出生体重呈线性负相关关系（ r2=0.157， P<0.05）。（2）与NC组相比，KD组HTR8/SVneo细胞的增殖和迁移能力均显著增强（ P均<0.05）。（3）ENCORI数据库分析共预测出可能与MIR210HG相互作用的RNA 38个。GO功能注释分析显示，MIR210HG可能参与免疫应答分子中介物产生的调控等27条通路的功能；KEGG通路富集显示，MIR210HG可能参与同种异体移植物排斥等8条通路的功能；BioCarta通路富集显示，MIR210HG可能参与翻译起始因子通路等8条通路的功能。 结论:lncRNA MIR210HG在PE产妇的胎盘组织中表达上调，降低MIR210HG的表达水平可促进HTR8/SVneo细胞的增殖和迁移，MIR210HG可能是滋养层细胞生物学行为的调节因子。

目的:探讨巨噬细胞(RAW264.7)与肿瘤细胞(Hepa1-6)融合后的杂交细胞迁徙和侵袭的变化，为抑制巨噬细胞与肿瘤细胞融合的治疗方法提供科学依据。方法:将对数生长期的RAW264.7细胞和不换液、不传代孵育6 d的Hepa1-6细胞分别作为对照组，将两组细胞按1∶3的比例共培养后作为实验组，分别采用显微镜观察、划痕实验、活细胞成像系统及Transwell实验观察巨噬细胞对肿瘤细胞迁徙和侵袭能力的影响。结果:RAW264.7细胞与Hepa1-6细胞共培养24 h后，活细胞成像系统观察到杂交子细胞的运动能力较Hepa1-6细胞明显增强；划痕实验中24 h时共培养组愈合率明显高于Hepa1-6组的愈合率[%：(86.67±3.72)比(41.70±9.37)， t＝7.59， P<0.05]；Transwell迁移实验中Hepa1-6细胞组穿膜细胞数低于共培养组的穿膜细胞数[个：(49±20)比(133±12)， t＝8.25， P<0.05]，而Transwell侵袭实验中Hepa1-6组穿膜细胞数低于共培养组穿膜细胞[个：(44±10)比(173±55)， t＝4.59， P<0.05]。 结论:巨噬细胞与肿瘤细胞融合细胞及杂交子细胞具有更强的迁徙和侵袭能力。

目的:分析抗α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异 唑丙酸受体（AMPAR）抗体脑炎的临床特点。 方法:回顾性总结2020年1月至2021年5月空军军医大学唐都医院诊治的3例抗AMPAR抗体脑炎患者的临床资料，对其临床表现、辅助检查、治疗及预后进行分析。结果:3例抗AMPAR抗体脑炎（年龄12~70岁）均急性起病，首发症状包括认知减退、性格改变及少见的头痛、运动障碍，其中例1肺部占位性病变经病理证实为小细胞肺癌，血清及脑脊液抗AMPAR抗体、抗Y染色体性别决定区相关高迁移率组盒蛋白1抗体阳性，激素联合肿瘤化学治疗后症状仍持续存在，无临床复发；例2责任病灶位于双侧额颞叶、半卵圆中心及侧脑室旁，同时合并低颅压综合征典型影像学特征，血清抗AMPAR抗体阳性，激素治疗后症状部分改善；例3颅内病灶位于脑桥及右侧小脑中脚，伴显著小脑萎缩，脊髓磁共振成像提示颈 2~胸 10水平脊髓病变，血清及脑脊液抗AMPAR抗体阳性，激素联合静脉滴注人免疫球蛋白治疗后症状显著改善。 结论:抗AMPAR抗体脑炎临床表现异质性高，除边缘系统外，尚可波及脑干、脊髓，出现脑萎缩；存在多重抗神经元抗体尤其是抗神经元细胞内抗原抗体时需密切监测肿瘤；免疫治疗有效，肿瘤叠加多重抗体时预后差。

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) FBXL19-AS1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，明确lncRNA FBXL19-AS1与微小RNA-339-3p(miR-339-3p)的靶向关系。方法:收集2017年1月至2019至8月间烟台市烟台山医院73例行手术切除且经病理确诊的胰腺癌患者的癌组织及匹配的癌旁正常胰腺组织，体外培养正常胰腺上皮细胞(hTERT-HPNE)和3株胰腺癌细胞(Capan-1、SW1990、PaTu8988)，采用实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各株细胞lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p表达。将胰腺癌Capan-1细胞分为NC组(正常对照组)、si-NC组(转染无意义阴性序列)、si-FBXL19-AS1组(转染FBXL19-AS1小干扰RNA)，miR-NC组(转染空质粒对照)、miR-339-3p组(转染miR-339-3p过表达慢病毒载体)，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p NC组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂阴性对照序列)、si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，采用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，采用蛋白质免疫印迹法检测细胞cyclinD1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p的靶向关系。结果:胰腺癌组织lncRNA FBXL19-AS1表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(2.96±0.21比1.00±0.13， P<0.05)，miR-339-3p表达量显著低于癌旁正常胰腺组织(0.37±0.05比1.00±0.11， P<0.05)。Capan-1、SW1990及PaTu8988细胞lncRNA FBXL19-AS1表达量分别为2.43±0.18、1.97±0.13和1.73±0.14，均显著高于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.07，miR-339-3p表达量分别为0.42±0.03、0.54±0.03和0.57±0.04，均显著低于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.05。其中以Capan-1细胞的lncRNA FBXL 19-AS1表达量最高，miR-339-3p表达量最低。与si-NC组比较，si-FBXL19-AS1组Capan-1细胞450nm处吸光度值( A450值)、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.47±0.03比0.94±0.06、(81.00±7.41)个比(187.00±16.13)个、(67.00±5.41)个比(141.00±9.24)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著降低(0.44±0.03比0.83±0.05、0.48±0.03比0.92±0.07、0.38±0.02比0.73±0.05)。与miR-NC组比较，miR-339-3p组Capan-1细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.54±0.04比0.94±0.05、(98.00±6.53)个比(193.00±10.02)个、(83.00±6.58)个比(146.00±7.11)个]，cyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量显著降低(0.47±0.03比0.81±0.07、0.43±0.03比0.94±0.06、0.32±0.02比0.71±0.06)。与si-FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著上升[0.96±0.07比0.48±0.03、(204.00±11.25)个比(83.00±5.11)个、(157.00±8.76)个比(64.00±4.12)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著升高(0.84±0.06比0.42±0.03、0.96±0.08比0.47±0.08、0.74±0.06比0.37±0.02)。上述差异均有统计学意义( P值均<0.05)。共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组Capan-1细胞的荧光素酶活性显著低于共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组(0.47±0.04比1.00±0.10)，差异有统计学意义( P<0.05)，而共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组与共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组Capan-1细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义。 结论:LncRNA FBXL19-AS1在胰腺癌组织及胰腺癌Capan-1细胞株中呈高表达，敲减lncRNA FBXL19-AS1可靶向结合miR-339-3p调节胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，促进胰腺癌的发生和发展。