目的:探讨大电导钙激活钾离子通道［large conductance calcium-activated potassium channel，BK（Ca）］是否参与衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞（pericytes，PC）的迁移。方法:将C57BL/6J小鼠分为3月龄（ n=10）组和12月龄组（ n=10），听性脑干反应（ABR）检测各组听力阈值；免疫荧光检测各组耳蜗血管纹毛细血管PC上β-BK（Ca）通道和骨桥蛋白（osteopontin，OPN）表达变化；透射电镜（transmission electron microscope，TEM）观察各组耳蜗血管纹PC的形态改变。细胞实验：原代培养耳蜗血管纹PC并鉴定；D-半乳糖（D-gal）制备细胞衰老模型，CCK8确定D-gal干预浓度；β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色评估细胞衰老水平；全细胞膜片钳技术记录PC上BK（Ca）通道激活电流变化；免疫荧光技术检测PC上β-BK（Ca）通道蛋白表达变化；划痕实验和Transwell实验检测2组细胞迁移侵袭能力；Western blot技术检测β-BK（Ca）通道和OPN蛋白表达水平。采用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。 结果:动物实验：12月龄组小鼠较3月龄组ABR阈值升高（ t=12.66， P<0.01）；12月龄组小鼠耳蜗血管纹PC上β-BK（Ca）通道表达水平较3月龄组降低（ t=14.64， P<0.01），OPN表达升高（ t=20.73， P<0.01）；TEM中3月龄组PC与内皮细胞紧密相连，12月龄组PC与内皮细胞连接疏松或PC胞体从毛细血管壁分离。细胞实验：耳蜗血管纹原代培养的耳蜗血管纹PC阳性率在95%以上，15 mg/ml D-gal干预的PC较对照组的SA-β-gal染色细胞阳性率高，差异有统计学意义（ t=36.90， P<0.01）。与对照组PC相比，D-gal干预组全细胞膜片钳BK（Ca）通道电流减小（ t=12.18， P<0.05），β-BK（Ca）通道蛋白和荧光表达水平降低（ t=11.98， P<0.01； t=15.72， P<0.05），OPN蛋白表达升高（ t=18.53， P<0.01），PC迁移能力增加（ t=7.91， P<0.01； t=7.59， P<0.01）。D-gal干预后给予BK（Ca）通道特异性阻断剂Iberiotoxin（IBTX）可使OPN表达明显升高（ t=4.26， P<0.05），PC迁移能力增加（ t=5.88， P<0.01； t=21.97， P<0.01）。 结论:衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管PC迁移能力增加，β-BK（Ca）通道表达降低，给予BK（Ca）通道特异性阻断剂IBTX可使迁移能力增加，提示BK（Ca）通道可能参与衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管PC的迁移。

目的:探究脓毒症对血脑屏障通透性的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型。根据干预时间随机（随机数字法）分组：假手术组、脓毒症1 d组、脓毒症4 d组、脓毒症7 d组。采用荧光素钠检测血脑屏障的通透性变化；采用Western blot和免疫荧光方法检测脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的表达变化。结果:和假手术组大鼠相比较，脓毒症组的大鼠呼吸急促，精神萎靡、反应迟钝，活动量少、进食饮水少，腹胀明显，排稀便。腹腔解剖可见肠系膜黏连，近端肠管扩张，盲肠结扎部位颜色暗红且表面有脓液渗出，整个腹腔可见血性渗出液。和假手术组大鼠相比较，脓毒症组的大鼠体质量下降，随着脓毒症的病程发展，大鼠体质量持续降低，脓毒症7 d组的大鼠体质量最低，且明显低于脓毒症4 d（ P < 0.05）、脓毒症1 d（ P < 0.05）以及假手术组（ P < 0.05）的大鼠。和假手术组大鼠相比较，盲肠结扎穿孔1 d后大鼠脑组织中的荧光素钠的渗漏显著增加（ P < 0.05）。随着脓毒症的病程发展，荧光素钠渗漏含量持续增加。脓毒症7 d的大鼠脑组织中的荧光素钠含量最高，并且明显高于脓毒症4 d、脓毒症1 d以及假手术组的大鼠（均 P < 0.05）。和假手术组大鼠相比较，盲肠结扎穿孔1 d后大鼠脑组织的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin和ZO-1的蛋白表达量明显降低（均 P < 0.05）。随着脓毒症的病程发展，紧密连接蛋白的表达量持续降低。脓毒症7 d的大鼠脑组织中的紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达量最低，并且明显低于脓毒症4 d、脓毒症1 d以及假手术组的大鼠（均 P < 0.05）。 结论:脓毒症可诱导大鼠的血脑屏障通透性增加，并且脓毒症持续的时间越久，血脑屏障的通透性越高。

目的:评价Ras同源家族成员A(RhoA)在氢减轻脂多糖(LPS)致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤中的作用。方法:小鼠肺微血管内皮细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链双抗的DMEM/F12培养基中，传代至第4～6代的细胞用于实验，采用随机数字表法分为6组( n＝36)：对照组(A组)、富氢液组(B组)、LPS组(C组)、LPS＋富氢液组(D组)、LPS＋RhoA抑制剂C3酶组(E组)和LPS＋富氢液＋RhoA激活剂U-46619组(F组)。A组、C组和E组采用正常培养基培养，B组、D组和F组采用含饱和氢气培养基培养，C组、D组、E组和F组加入LPS，终浓度1 μg/ml；E组于加入LPS前2 h加入C3酶，终浓度3 μg/ml；F组于加入LPS前3 h加入U-46619，终浓度10 mg/ml。分别于LPS孵育后6、12和24 h时采用Western blot法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(occludin)的表达；于LPS孵育后24 h时采用LDH法测定细胞LDH释放率，MTT法测定细胞活力，GST pull-down法测定RhoA活性。 结果:与A组比较，C组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)；与C组比较，D组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与C组比较，E组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与D组比较，F组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)。 结论:RhoA参与了氢减轻LPS致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤的过程。

目的:探讨血必净注射液上调紧密连接蛋白claudin-5表达的信号通路。方法:利用脂多糖（LPS）建立急性呼吸窘迫综合征（ARDS）动物模型和细胞模型。①体内实验：将20只雄性SD大鼠随机分为4组，每组5只。正常对照组大鼠不做任何处理；LPS诱导组腹腔注射10 mg/kg LPS 12 h；血必净对照组腹腔注射1 mg/kg血必净注射液，每日2次，连续3 d；血必净干预组用血必净注射液预处理后腹腔注射10 mg/kg LPS 12 h。取大鼠肺脏，检测肺湿/干质量比值（W/D）和大鼠肺组织形态学改变；免疫组织化学染色（IHC）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测大鼠肺组织claudin-5、磷酸化叉头框蛋白O1（p-FOXO1）、总叉头框蛋白O1（t-FOXO1）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、总Akt（t-Akt）蛋白表达。②体外实验：将人肺微血管内皮细胞（HPMECs）分为6组，每组5孔。正常对照组、血必净对照组（与2 g/L血必净共同孵育24 h）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路抑制剂LY294002对照组（与10 μmol/L LY294002共同孵育1 h）、LPS诱导组（与1 mg/L LPS共同孵育12 h）、血必净干预组（用2 g/L血必净预处理24 h后与1 mg/L LPS共同孵育12 h）、LY294002干预组（与10 μmol/L LY294002共同孵育1 h后加入2 g/L血必净孵育24 h，然后再与1 mg/L LPS共同孵育12 h）。用Western blotting检测每组HPMECs中claudin-5、p-FOXO1、t-FOXO1、p-Akt、t-Akt蛋白的表达。结果:体内实验结果：①肺组织W/D比值：LPS诱导组较正常对照组显著升高（6.79±0.42比4.19±0.13），经血必净干预后较LPS组明显下降（4.92±0.38比6.79±0.42， P<0.01）。②肺组织形态学改变：与正常对照组比较，LPS诱导组损伤严重，经血必净干预后明显改善。③ claudin-5、p-Akt/t-Akt、p-FOXO1/t-FOXO1蛋白表达水平：LPS诱导组各蛋白均较正常对照组明显降低〔claudin-5蛋白（claudin-5/GAPDH）：0.33±0.03比1.03±0.07，p-Akt/t-Akt：0.18±0.02比1.01±0.13，p-FOXO1/t-FOXO1：0.16±0.06比1.00±0.19，均 P<0.01〕；经血必净干预后表达水平较LPS诱导组显著增高〔claudin-5表达（claudin-5/GAPDH）：0.53±0.05比0.33±0.03，p-Akt/t-Akt：0.56±0.12比0.18±0.02，p-FOXO1/t-FOXO1：0.68±0.10比0.16±0.06，均 P<0.01〕。体外实验结果：LPS诱导组及血必净干预组claudin-5蛋白均较正常对照组明显降低（claudin-5/β-actin：0.45±0.03、0.80±0.08比1.01±0.15，均 P<0.01）；LY294002干预后claudin-5表达较血必净干预组明显下降（claudin-5/β-actin：0.41±0.02比0.80±0.08， P<0.01）。 结论:血必净通过PI3K/Akt/FOXO1信号通路上调claudin-5，从而改善ARDS的肺血管屏障功能。

目的:探讨雌激素相关受体α（ERRα）对脂多糖（LPS）诱导的内皮细胞凋亡及连接蛋白降解的影响。方法:体外培养ERRα敲低的稳转细胞株，并通过LPS处理，将细胞分为四组：正常对照组（Ctr组）；shERRα敲低组（shERRα组）；正常细胞+LPS处理组（LPS组）：六孔板中的细胞用无血清的培养基饥饿培养12 h后，用20 μg/mL LPS处理12 h；shERRα+LPS组：ERRα敲低的细胞按LPS组处理。使用ROS荧光试剂盒检测细胞内ROS的水平；利用TUNEL、AnnexinV-FITC和PI双染检测细胞凋亡情况；细胞荧光检测连接蛋白ZO-1在细胞膜表达情况，Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Smac、细胞色素c和连接蛋白ZO-1，Occludin、JAM-A及E-Ca在分子水平的表达情况。结果:与Ctr组及shERRα组相比，LPS组ROS水平增加，细胞凋亡率增加（TUNEL检测为16.44±2.55，流式细胞术检测结果为23.56±2.22），促凋亡蛋白Bax、Smac及细胞色素c表达量增高，而抗凋亡蛋白Bcl-2和紧密连接蛋白表达量降低，细胞荧光结果显示连接蛋白ZO-1在包膜发生降解，网状结构断裂。而与LPS组相比，在shERRα+LPS组中，抑制ERRα的表达加剧上诉细胞损伤。结论:ERRα能够通过负性调节肺微血管内皮细胞内的细胞凋亡，影响肺微血管内皮的功能，从而调控脓毒症诱导的急性肺损伤。

目的:探讨不同浓度丙泊酚对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell, HUVEC）活力、内皮损伤相关蛋白[可溶性血栓调节蛋白（soluble thrombomodulin, sTM）、内皮细胞特异性分子-1（endothelial cell specific molecule-1, ESM-1）、E-选择素（E-selectin, CD62E）]、内皮细胞紧密连接蛋白[咬合蛋白（occludin）、闭锁连接蛋白-1（zonula occludens 1, ZO1）、闭合蛋白（claudin 5）]和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）表达的影响。方法:以体外培养的HUVEC 3~5代作为实验对象。细胞分入：A组，细胞正常培养组；B组，100 μmol/L丙泊酚组；C组，1 000 μmol/L丙泊酚组；D组，和1 000 μmol/L丙泊酚同等剂量的中/长链脂肪乳剂组；各组处理细胞24 h。3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（噻唑蓝）[3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide, MTT]比色法检测细胞活力，Western blot检测sTM、ESM-1、CD62E、occludin、ZO1、claudin 5和VEGF在内皮细胞模型中的表达情况。结果:与A组比较，C组细胞活力明显降低（ P<0.05），B组、D组差异无统计学意义（ P>0.05）。与A组比较，C组sTM的表达明显升高（ P<0.05），B组、D组sTM表达差异无统计学意义（ P>0.05）。与A组比较，B组、C组、D组ESM-1和CD62E表达差异无统计学意义（ P>0.05）。与A组比较，C组occludin的表达明显降低（ P<0.05），B组、D组occludin的表达差异无统计学意义（ P>0.05）。与A组比较，B组、C组、D组claudin-5和ZO1表达差异无统计学意义（ P>0.05）。与A组比较，B组、C组VEGF的表达明显升高（ P<0.05），D组VEGF表达差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:高浓度丙泊酚通过调节sTM和occludin的表达导致血管内皮细胞通透性升高，并且VEGF信号通路参与了药物诱导内皮细胞通透性增高。

目的:运用单细胞转录组测序分析牙周炎小鼠脑膜的生物学改变，探讨牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍的相关性。方法:将30只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为2组（每组15只），在对照组小鼠上颌双颊侧局部涂抹不含牙龈卟啉单胞菌（Pg）的2%羧甲基纤维素（CMC），在实验组小鼠上颌双颊侧局部涂抹Pg W83和2%CMC的混合物，3次/周，持续16周。观察对照组和实验组小鼠上颌牙槽骨吸收情况、自主活动能力与认知功能的变化、大脑皮层中小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况、检测小鼠脑膜和大脑内紧密连接蛋白Occludin mRNA表达情况。然后使用统一流形逼近与投影（UMAP）算法对单细胞转录组各细胞亚群数据进行降维整合处理。对内皮细胞差异基因进行基因本体（GO）和京都基因和基因组数据库（KEGG）富集分析，进一步采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证差异基因转录激活因子3（Atf3）、含载脂蛋白L域1（Apold1）的表达情况。结果:亚甲蓝染色实验显示，实验组小鼠上颌颊、腭侧釉质牙骨质界到牙槽嵴顶的距离［分别为（185.60±17.60）、（206.90±13.37）μm］均显著大于对照组［分别为（135.33±9.57）、（163.05±14.98）μm］（ t=5.02， P=0.002； t=4.37， P=0.005）。旷场实验显示实验组小鼠的总路程和平均速度［（971.88±164.57）cm和（3.25±0.55）cm/s］与对照组［（914.24±278.81）cm和（3.05±0.93）cm/s］相比差异均无统计学意义（ t=0.65， P=0.525； t=0.65， P=0.520）。新物体识别实验中实验组小鼠相对辨别指数［（48.02±16.92）%］显著低于对照组［（66.27±17.90）%］（ t=2.40， P=0.027）。Y迷宫实验显示，实验组小鼠的自发交替率［（50.99±14.17）%］显著低于对照组［（63.56±11.88）%］（ t=2.33， P=0.030）。免疫组化染色结果显示，实验组小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞被激活。RT-qPCR结果显示，实验组小鼠脑膜和大脑中紧密连接蛋白Occludin mRNA的表达（分别为0.61±0.10、0.64±0.20）均显著低于对照组（分别为1.02±0.25、1.04±0.31）（ t=3.47， P=0.010； t=2.66， P=0.024）。单细胞转录组测序显示，脑膜存在11种细胞类型，包括内皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞等，其中内皮细胞占比最大［对照组为26.47%（1 589/6 004），实验组为26.26%（807/3 073）］，是脑膜中最主要的细胞类型；实验组小鼠脑膜组织中粒细胞比例［11.65%（358/3 073）］较对照组［5.56%（334/6 004）］增加。进一步聚类分析内皮细胞，GO富集分析显示差异基因与血管生成、细胞黏附、细胞凋亡等有关；KEGG分析显示差异基因与白细胞介素-17信号通路、松弛素信号通路等相关。RT-qPCR显示，实验组小鼠脑膜组织中Atf3和Apold1 mRNA表达（分别为0.42±0.24、0.54±0.27）均显著低于对照组（分别为1.03±0.26、1.02±0.23）（ t=3.88， P=0.005； t=3.02， P=0.017）。 结论:Pg W83慢性感染的牙周炎小鼠认知能力下降，存在神经炎症，屏障功能改变；单细胞转录组测序发现脑膜组织存在免疫细胞浸润，Atf3和Apold1基因表达下调，提示脑膜免疫和屏障功能的改变在牙周炎导致的认知障碍中发挥作用。

目的:探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particulates，DEP)是否通过氧化损伤和炎症反应导致血脑屏障损伤。方法:用小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3细胞系构建血脑屏障体外模型，按照DEP染毒浓度不同将细胞分为对照组(0 μg/mL)和实验组(DEP浓度为12.5、25、50、100 μg/mL)，染毒48 h后，检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活力，细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测炎性细胞因子白细胞介素(interleukin，IL)-1β，IL-6，肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的分泌水平。Western blot检测紧密连接蛋白claudin-5和ZO-1的表达。结果:bEnd.3细胞经不同浓度DEP染毒48 h后，100 μg/mL浓度组与对照组相比，GSH-Px活力显著下降，差异具有统计学意义[(15.51±2.22)U/mg protein比(23.22±3.27)U/mg protein， q＝4.741， P<0.05]；活性氧含量升高，差异具有统计学意义；[(1.28±0.03)比(1.00±0.00)， q＝12.400， P<0.05]；IL-1β分泌水平显著增加，25，50和100 μg/mL浓度组与对照组相比差异具有统计学意义[(3.74±0.36)ng/L，(3.20±0.37)ng/L，(3.26±0.33)ng/L比(1.76±0.09)ng/L， q值分别为6.708、5.982、6.216， P值均<0.05]；IL-6分泌水平显著增加，100 μg/mL浓度组与对照组相比差异具有统计学意义[(57.79±4.20)ng/L比(20.31±1.12)ng/L， q＝15.000， P<0.05]；TNF-α分泌水平显著增加，50 μg/mL和100 μg/mL浓度组与对照组相比，差异具有统计学意义，[(20.88±4.77)ng/L，(24.41±6.53)ng/L比(7.54±2.81)ng/L， q值分别为4.715、5.962， P<0.05]；claudin-5表达水平显著下降，12.5，25和100 μg/mL浓度组与对照组相比，差异具有统计学意义[(0.87±0.16)、(0.92±0.17)、(0.37±0.12)比(1.24±0.11)， q值分别为5.551、5.152 、11.280， P<0.05]；ZO-1表达水平显著下降，25、50和100 μg/mL浓度组与对照组相比，差异具有统计学意义[(0.46±0.06)、(0.39±0.08)、(0.30±0.05)比(1.06±0.13)， q值分别为6.724、7.572、8.470， P<0.05]。 结论:DEP可能通过氧化损伤和炎症反应，导致紧密连接蛋白表达降低进而造成血脑屏障损伤。

目的:探讨严重脓毒症幼猪生化指标、肺部病理损伤与免疫机制间的相互关系，以及参附注射液的干预作用。方法:将2～3月龄巴拿马香猪按随机数字表法分为假手术组（Sham组；静脉注射生理盐水）、脂多糖（LPS）致严重脓毒症模型组（LPS组；静脉注射LPS 1 mg/kg，0.5 mg·kg -1·h -1维持12 h）、参附注射液干预组（SF组；制模同时静脉注射参附注射液10 mL/kg，每日2次），每组5只。制模后48 h取血检测C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、氧合指数（PaO 2/FiO 2）、剩余碱（BE）、血乳酸（Lac）等生化指标；取外周血行流式细胞检测，分析中性粒细胞数目〔髓过氧化物酶阳性（MPO +）〕及其激活亚群CD11b + CD64 +、M1型巨噬细胞（CD80 + CD64 +）、CD4 +和CD8 + T细胞的变化；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆细胞因子水平；苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理损伤；采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织损伤相关分子及其受体、趋化因子、炎性因子、血管内皮相关分子、紧密连接蛋白的mRNA表达。 结果:与Sham组比较，LPS组CRP、PCT、Lac水平明显升高，PaO 2/FiO 2、BE明显下降；外周血CD80 + CD64 +、CD11b + CD64 +、MPO +、CD4 +和CD8 + T细胞数、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显降低，白细胞介素-10（IL-10）、内皮细胞生长因子（VEGF）水平明显升高；肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、促血管生成素2/1（Ang2/Ang1）的mRNA表达均明显升高，Toll样受体9（TLR9）、趋化因子（CXCL9、CXCL10）、TNF-α、IL-27、内皮细胞TEK酪氨酸激酶2（TIE2）、紧密连接蛋白血管内皮-钙黏蛋白（VE-CAD）和封闭蛋白（Occludin）的mRNA表达均明显下降；HE染色显示，肺泡腔炎性细胞浸润渗出、肺泡实变及肺泡间质层明显增厚、肺气肿。与LPS组比较，SF组Lac明显下降（mmol/L：4.2±1.0比6.3±1.1， P<0.05），BE、PaO 2/FiO 2明显升高〔BE（mmol/L）：-6.4±2.6比-11.6±2.5，PaO 2/FiO 2（mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）：180±36比105±35，均 P<0.05〕，CD80 + CD64 +、CD11b + CD64 +、MPO +细胞比例均明显上升〔CD80 + CD64 +：（7.13±2.01）%比（3.80±0.46）%，CD11b + CD64 +：（8.33±2.55）%比（2.15±0.47）%，MPO +：（21.22±2.33）%比（8.31±0.46）%，均 P<0.05〕；肺组织HMGB1、RAGE的mRNA表达有一定程度下降〔HMGB1 mRNA（2 -ΔΔCT）：1.81±0.45比2.23±0.85，RAGE mRNA（2 -ΔΔCT）：6.69±3.48比11.60±6.91，均 P<0.05〕，CXCL9和TIE2的mRNA表达有一定程度上升〔CXCL9 mRNA（2 -ΔΔCT）：1.06±0.63比0.50±0.12，TIE2 mRNA（2 -ΔΔCT）：1.42±0.68比0.27±0.16，均 P<0.05〕；肺组织病理改变明显减轻。 结论:BE、Lac、PaO 2/FiO 2的加重，免疫耗竭、麻痹和无能，可能是导致严重脓毒症幼猪肺脏致死性损伤的重要因素，该损伤可能与HMGB1及其受体RAGE过度活化，TLR9和相应趋化因子及炎性因子受到抑制，导致血管内皮细胞损伤加重和紧密连接蛋白表达减少的毛细血管渗漏机制相关。参附注射液改善严重肺炎并脓毒症的免疫紊乱可能与上调外周血M1型巨噬细胞和激活中性粒细胞、抑制HMGB1及其受体RAGE表达、上调CXCL9和TIE2表达有关。

目的:从细胞紧密连接蛋白claudin-5的角度探讨血必净注射液改善肺血管屏障功能紊乱的新机制。方法:采用硫化氢（H 2S）暴露导致急性肺损伤（ALI）模型。①体内实验：按随机数字表法将雄性SD大鼠分为对照组、H 2S暴露组（300×10 -6 H 2S持续暴露3 h）、血必净对照组（静脉注射血必净注射液4 mL/kg、每日2次、持续3 d）、血必净干预组（血必净注射液预处理后予以H 2S暴露），每组6只。制模成功后不同时间点（0、6、12、24 h）分别检测大鼠血浆和支气管肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白含量，计算肺通透性指数（PPI；PPI＝BALF中总蛋白含量/血浆中总蛋白含量），测定肺湿/干重比值（W/D），用实时定量聚合酶链反应检测肺组织claudin-5 mRNA表达。②体外实验：将人肺微血管内皮细胞株（HPMECs）分为空白对照组、H 2S供体（NaHS）处理组（与500 μmol/L NaHS共孵育12 h）、血必净对照组（加入2 g/L血必净注射液培养24 h）、血必净干预组（2 g/L血必净注射液预处理24 h后与500 μmol/L NaHS共孵育12 h）。分别于共孵育不同时间点（1、3、6、12和24 h），用蛋白质免疫印迹试验检测HPMECs细胞claudin-5蛋白表达，以荧光素钠评价单层HPMECs的通透性。 结果:①体内实验结果：与对照组相比，大鼠H 2S暴露后6 h肺W/D比值即显著升高，12 h达峰值（4.67±0.11比4.26±0.06， P<0.01）；肺组织claudin-5 mRNA表达显著降低，暴露后6 h时降至对照组的89%（ P<0.01）。暴露后12 h BALF中总蛋白和PPI均显著高于对照组〔总蛋白（mg/L）：262.31±14.24比33.30±3.09，PPI：（11.72±0.57）×10 -3比（1.21±0.08）×10 -3，均 P<0.01〕；而血必净预处理后BALF中总蛋白和PPI均显著下降〔总蛋白（mg/L）：153.25±7.32比262.31±14.24，PPI：（5.79±0.23）×10 -3比（11.72±0.57）×10 -3，均 P<0.01〕。②体外实验结果：与空白对照组相比，HPMECs与NaHS共孵育后单层内皮细胞通透性逐渐增加，12 h达到最高，约为空白对照组的2倍（ P<0.01），而claudin-5蛋白表达则于12 h时降至最低（claudin-5/β- actin：0.42±0.03比1.03±0.05， P<0.01）；经血必净干预后可明显改善内皮细胞通透性（荧光素钠的荧光强度：1.46±0.10比1.89±0.11， P<0.01），减轻claudin-5蛋白的下降程度（claudin-5/β- actin：0.68±0.04比0.38±0.03， P<0.01）。 结论:血必净注射液可能通过上调claudin-5的表达改善ALI时受损的肺血管屏障功能。