目的:探讨趋化素在特发性肺纤维化（IPF）中的表达及其作用。方法:分别使用定量PCR与蛋白质免疫印迹法测定对照与IPF患者肺部组织中趋化素的mRNA及蛋白表达水平，通过酶联免疫吸附实验检测临床血清样本中趋化素的含量。构建肺纤维化体外模型，将分离得到的原代成纤维细胞分成对照组、TGF-β组、TGF-β+趋化素组和趋化素组，使用免疫荧光法检测各组成纤维细胞α-平滑肌蛋白（α-SMA）表达水平。构建肺纤维化体内模型，采用随机分组法将C57BL/6小鼠分成对照组、博来霉素组、博来霉素+趋化素组和趋化素组，通过肺组织病理学染色观察各组小鼠肺纤维化严重程度。通过定量PCR与免疫组化染色法分别检测肺纤维化体外与体内模型中上皮间充质转化（EMT）标记基因的表达情况。结果:与对照组相比，IPF患者肺组织与血清中趋化素表达量均下调。免疫荧光结果显示，TGF-β组α-SMA表达水平较对照组明显增强，TGF-β+趋化素组中α-SMA表达水平则与对照组相仿。病理学染色结果显示，博来霉素组小鼠较对照组肺组织纤维化病变明显，趋化素表达量显著下调；博来霉素+趋化素组小鼠肺组织受损程度则有所缓解。定量PCR与免疫组化结果显示，趋化素在A549细胞与小鼠肺组织中分别减弱了由TGF-β与博来霉素诱导的EMT作用。结论:趋化素在IPF患者中表达降低；趋化素可能通过调控EMT而在肺纤维化的发生中发挥保护作用。

目的:研究胆道闭锁肝纤维化过程中Shh信号通路核转录因子Gli1/Gli2在肝上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)中的调控作用，为阐明胆道闭锁肝纤维化的机制提供依据。方法:选择2018年1月至2018年12月经手术证实为胆道闭锁Ⅲ型患儿的肝活检组织标本10例作为胆道闭锁组，年龄在1~3月龄。以相同年龄段无肝胆系统畸形死亡新生儿尸检肝组织5例作为正常对照组。应用实时荧光定量聚合酶链(RT-qPCR)反应及蛋白质印迹法检测肝组织中Gli1/Gli2、EMT关键调控因子Snail/Slug及EMT特征性细胞因子的表达。另将2周龄BALB/c小鼠处死后分离肝内胆管上皮细胞mIBEC，按处理方式不同分为正常对照组、干扰对照组、过表达对照组、Gli1-shRNA组、Gli1过表达组、Gli2-shRNA组、Gli2过表达组。其中，正常对照组加入等体积培养基，干扰对照组加入空白慢病毒，过表达对照组加入空白腺病毒，Gli1-shRNA组应用Gli1-shRNA沉默Gli1，Gli2-shRNA组应用Gli2-shRNA沉默Gli2，Gli1过表达组应用Gli1腺病毒过表达Gli1，Gli2过表达组应用Gli2腺病毒过表达Gli2。应用RNA干扰技术研究Shh信号通路关键转录因子Gli1/Gli2表达对EMT过程的调控作用。采用单因素方差分析和LSD- t检验对数据进行统计学分析。 结果:RT-qPCR检测结果显示，胆道闭锁组患儿肝组织Gli2、Snail、Vimentin、α-SMA mRNA相对表达量分别为10.96±6.21、7.37±4.09、8.85±2.37和7.35±4.09，较对照组肝组织4.46±1.24、3.34±0.95、4.49±2.07和3.38±0.93均明显升高，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。胆道闭锁组患儿肝组织E-cadherin相对表达量为3.00±1.29，较对照组4.96±1.91明显降低，组间差异亦有统计学意义( P<0.05)。应用RNA干扰技术沉默Gli2基因后，Gli2-shRNA组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中Snail、Vimentin、α-SMA mRNA相对表达量分别为2.23±0.67、3.11±1.07和2.74±0.61，较干扰对照组5.21±0.88、3.67±1.04和3.46±1.24明显降低，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。Gli2-shRNA组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中E-cadherin mRNA相对表达量为9.09±1.29，较干扰对照组4.36±0.85表达明显升高，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。过表达Gli2基因后，Gli2过表达组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中Snail、Vimentin、α-SMA mRNA相对表达量分别为9.89±2.06、14.51±3.63、12.41±3.00，较过表达对照组4.32±0.78、4.58±0.95、4.09±1.03明显升高，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。Gli2过表达组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中E-cadherin mRNA相对表达量为2.30±0.39，较过表达对照组6.09±1.40表达降低，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。沉默及过表达Gli1基因未见明确EMT特征细胞因子表达变化趋势。免疫荧光检测显示沉默Gli2基因表达后mIBEC中绿色荧光(胆管上皮细胞标记物CK19)增强，过表达Gli2基因后橙色荧光(间质细胞标记物α-SMA)增强。 结论:Shh信号通路在胆道闭锁肝纤维化中具有的重要作用，信号通路关键转录因子Gli2可显著调控肝内胆管上皮细胞EMT过程。

目的:探讨转录因子激活增强子结合蛋白4(TFAP4)在胃癌中的表达及对预后的影响，并观察TFAP4在胃癌细胞迁移和侵袭过程中发挥的作用。方法:通过生物信息学分析，获取TFAP4在胃癌中的表达及在胃癌患者的预后中所起到的作用。采用Transwell小室法及划痕实验检测TFAP4对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。应用蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低TFAP4后上皮-间充质转化(EMT)相关通路蛋白的表达变化。对独立样本采用 t检验。 结果:基因表达谱交互分析(GEPIA2)网站对胃癌组织的RNA测序(RNA-seq)数据进行分析，结果显示TFAP4在胃癌组织中高表达( t＝32.070， P<0.01)，差异有统计学意义。生存分析(KM-PLOTTER)网站对TFAP4进行生物信息学分析，TFAP4为胃癌预后的危险因素。划痕实验结果显示，敲低TFAP4的实验组在划痕48 h后相较于对照组迁移距离更短。Transwell实验结果显示，敲低TFAP4的实验组在24 h内穿膜细胞数量显著低于对照组[(83.000±3.786)个比(186.700±4.055)个， t＝18.690， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot结果显示，敲低TFAP4的表达后，上皮间充质转化(EMT)通路相关蛋白N-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达水平随之降低。 结论:TFAP4在胃癌中高表达，和不良预后呈正相关，具有促进胃癌细胞迁移和侵袭的作用。

目的:探讨SKOV3、MRTFA在卵巢癌中的表达变化及其对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的影响。方法:将2017年6月至2019年5月宁波市鄞州人民医院收治的91例卵巢癌患者作为观察对象，对卵巢癌组织内MRTFA mRNA相对表达量和临床特征关系进行分析；对卵巢癌SKOV3细胞进行培养，分为MRTFA干扰组、阴性对照组和对照组（各组具体处理因素要列出），经Transwell法测定SKOV3细胞侵袭能力，通过Western-blot法测定SKOV3细胞内MRTFA蛋白表达。结果:卵巢癌组织、癌旁组织内MRTFA mRNA相对表达量分别是（1.92±0.09）、（1.08±0.14），卵巢癌组织内MRTFA mRNA相对表达量显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（ t=48.146， P=0.000）；肿瘤直径<10 cm、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者卵巢癌组织内MRTFA mRNA相对表达量分别低于肿瘤直径≥10 cm、低分化、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移卵巢癌患者（ P<0.05）。MRTFA干扰组卵巢癌SKOV3细胞培养24、48、72及96 h后吸光度值均低于对照组及阴性对照组（ P<0.05）；MRTFA干扰组的卵巢癌SKOV3细胞培养24 h后侵袭细胞数（86.72±4.69）低于阴性对照组（121.89±3.65）和对照组（117.10±4.41），差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:MRTFA在卵巢癌中表达异常增高，对MRTFA蛋白表达进行特异性抑制，能阻断SKOV3细胞增殖及侵袭，其作用机制可能和SRF蛋白诱导上皮间充质的转化过程存在相关性。

随着围生期医疗技术的迅速发展，早产儿的存活率明显提高，但支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)发病率仍处于高水平。BPD是早产儿常见的慢性呼吸道疾病，BPD早产儿合并其他并发症的发生率和病死率显著增高。目前以肺损伤为特征的"经典BPD"已经转换为"新型BPD"，然而BPD的病理生理机制尚未阐明。近年来，一些体外和体内实验研究已经证实，肺泡Ⅱ型上皮细胞能以转化生长因子-β为枢纽，Wnt、SPHK1/S1P等多重信号通路诱导上皮间充质转化从而促进肺纤维化的发生，为防治BPD提供了新的思路。该文综述EMT中的多种信号传导途径在BPD中的作用机制，以期为临床治疗BPD提供参考。

目的:探讨钴胺素转运蛋白1(TCN1)在肺腺癌中的表达及其与肺腺癌患者预后的关系，以及TCN1对肺腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响。方法:采用非随机抽样的方法选取2020年7月至2021年7月在成都医学院第一附属医院行肺腺癌切除术的患者20例，收集20对经组织病理学证实的肺腺癌样本和距离肿瘤组织至少5 cm的正常肺组织样本。免疫组织化学染色分析TCN1在肺腺癌组织及癌旁正常肺组织中的表达情况，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测肺腺癌细胞系及正常肺上皮细胞系内TCN1表达情况。下载TCGA数据库中肺腺癌数据，分析TCN1与肺腺癌患者生存预后的关系，使用加权基因共表达网络分析与TCN1关系最密切的模块，用R 3.6.1软件对该模块内的基因进行基因本体注释(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析，以TCN1的中位值为截断值，将TCGA数据库中的肺腺癌样本分为TCN1高表达组和低表达组，采用GSEA 4.2.3软件分析预测高表达TCN1的肿瘤组织样本内基因富集的信号通路。选用A549肺腺癌细胞系为研究对象，运用噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测敲减TCN1后对A549细胞的增殖和迁移侵袭的影响，采用Western blot检测敲减TCN1后A549肺腺癌细胞内上皮间充质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果:免疫组织化学染色显示肺腺癌患者肺腺癌组织中TCN1染色为阳性。RT-qPCR和Western blot结果显示，与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比，肺腺癌细胞系A549、LC-2、HCC515和PC14中TCN1普遍高表达( P值均<0.05)。对TCGA数据库中肺腺癌的生存资料进行分析显示TCN1高表达的患者总生存期更短( HR＝1.6， P＝0.002 6)。富集分析结果显示WGCNA筛选出的与TCN1表达最相关的模块内的基因主要涉及胞外基质组成、胞外结构组成、细胞基质黏附等生物学过程以及黏着斑、细胞外基质受体相互作用等相关通路。GSEA软件结果也显示高表达TCN1的肿瘤样本内的基因主要富集在EMT相关通路。MTT结果显示，敲减TCN1 96 h后，A549细胞的增殖能力受到抑制，差异有统计学意义( t＝4.657， P＝0.009)。Transwell实验结果显示，敲减TCN1后，A549细胞的迁移和侵袭能力均受到抑制，差异均有统计学意义( t值分别为10.502、9.604， P值均<0.05)。Western blot结果显示，敲减TCN1后A549细胞内N-cad、ASMA、Slug、Vimentin、Snail等EMT相关蛋白表达降低( P值均<0.05)。 结论:TCN1在肺腺癌组织中为高表达，且与不良预后密切相关。TCN1低表达可能通过抑制EMT影响肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:观察胡桃醌(Juglone)对野百合碱(MCT)诱导肺动脉高压(PAH)大鼠内皮间充质转化(EndoMT)的影响。方法:采用随机数字表法将30只Sprague Dawley (SD)大鼠分为3组：正常对照组(Con)，PAH组，Juglone组，每组10只。通过MCT建立PAH模型。Juglone组于MCT干预2周后每天给予Juglone腹腔内注射；4周后，检测右心室收缩压(RVSP)及右心肥厚指数(RVHI)，并用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肺血管形态的改变；免疫荧光法测定大鼠肺小动脉壁中α-肌动蛋白(α-SMA)和血管性血友病因子(vWF)的表达；蛋白印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织EndoMT相关蛋白的表达水平。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果:PAH组大鼠体重低于Con组[(273.00±39.12) g比(408.90±17.63) g， q＝15.774， P<0.05]，而RVSP及RVHI则高于Con组[(39.66±5.26) mmHg、(44.02±5.47)%比(18.71±1.72) mmHg、(22.96±3.50)%， q＝17.255、16.126， P<0.05]；Juglone组大鼠体重高于PAH组[(346.30±16.12) g比(273.00±39.12) g， q＝8.320， P<0.05]，RVSP及RVHI则低于PAH组[(23.16±3.29) mmHg、(34.03±2.04)%比(39.66±5.26) mmHg、(44.02±5.47)%， q＝13.289、7.480， P<0.05]。HE染色示，PAH组肺小动脉管壁增厚；内皮细胞大部分脱落，部分空泡变性。Juglone干预后管壁明显变薄；内皮细胞分布均匀。免疫荧光染色示Con组内皮层vWF表达为强阳性，未见α-SMA表达；PAH组内皮层vWF表达减弱，α-SMA为表达加强，出现vWF和α-SMA的双阳性染色，Juglone组内皮层vWF表达增强，α-SMA表达减弱，双阳性染色细胞明显减少。Western blot示，PAH组中vWF，血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)相对表达量低于Con组(0.54±0.17比0.83±0.01、0.61±0.16比1.06±0.03， q＝4.517，8.231， P<0.05)；Juglone组vWF，VE-cadherin蛋白相对表达量高于PAH组(0.78±0.09比0.54±0.17、0.84±0.02比0.61±0.16， q＝3.738、4.207， P<0.05)；PAH组中波形蛋白(Vimentin)、α-SMA、脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)相对表达量高于Con组(1.10±0.05比0.70±0.09、0.94±0.07比0.53±0.06、1.01±0.07比0.48±0.01， q＝7.965、9.547、11.416， P<0.05)；Juglone组Vimentin、α-SMA、Pin1相对表达量低于于PAH组(0.86±0.11比1.10±0.05，0.63±0.09比0.94±0.07、0.73±0.12比1.01±0.07， q＝4.779、7.218、6.031， P<0.05)。 结论:胡桃醌能够减轻MCT诱导的PAH，其机制可能与其通过抑制Pin1进而抑制肺动脉EndoMT有关。

目的:探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)中脯氨酰顺反异构酶(Pin1)的表达及其调控内皮间充质转化(EndMT)的作用及机制。方法:利用低氧(1%O 2)24 h建立低氧诱导的EndMT细胞模型。将PAECs分为4组，常氧组(Nor)、常氧＋Pin1慢病毒敲低组(Nor＋Pin1-shRNA)、低氧组(Hyp)、低氧＋Pin1慢病毒敲低组(Hyp＋Pin1-shRNA)，分别培养24 h。应用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)方法检测各组细胞增殖，细胞迁移实验(Transwell)检测细胞迁移。蛋白印迹法(Western blot)检测Pin1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达，并检测EndMT相关标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、锌指转录因子(Snail)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)相关信号通路的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。 结果:Nor＋Pin1-shRNA组Pin1的蛋白相对表达量(0.292±0.061)明显低于Nor组(0.798±0.054)，Hyp＋Pin1-shRNA组Pin1的蛋白相对表达量(0.475±0.039)明显低于Hyp组(1.403±0.076)，差异有统计学意义( F＝271.983， P<0.01)；Hyp组(1.135±0.086)和Hyp＋Pin1-shRNA组(1.043±0.054)HIF-1α的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.735±0.042)，差异有统计学意义( F＝60.954， P<0.01)；Hyp组(20.500±1.871)EdU阳性细胞数明显高于Nor组(7.167±1.169)，Hyp＋Pin1-shRNA组(9.327±1.633)EdU阳性细胞数明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝128.416， P均<0.01)；Hyp组(464.500±10.599)细胞数明显高于Nor组(179.250±11.955)，Hyp＋Pin1-shRNA组(320.000±17.607)细胞数明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝501.244， P<0.01)；Hyp组(1.205±0.061)α-SMA的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.725±0.089)，Hyp＋Pin1-shRNA组α-SMA的蛋白相对表达量(0.870±0.058)明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝50.820， P<0.01)；Hyp组(0.547±0.066)VE-cadherin的蛋白相对表达量明显低于Nor组(0.975±0.079)，Hyp＋Pin1-shRNA组(0.797±0.051)VE-cadherin的蛋白相对表达量明显高于Hyp组，差异有统计学意义( F＝27.934， P<0.01)；Hyp组Snail(0.955±0.063)、TGF-β1(1.042±0.087)、p-Smad2(1.180±0.062)的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.510±0.036、0.647±0.053、0.807±0.053)，Hyp＋Pin1-shRNA组Snail(0.492±0.061)、TGF-β1(0.792±0.051)、p-Smad2(0.910±0.036)的蛋白相对表达量明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝82.842、38.131、48.617， P<0.01)。 结论:低氧条件下，PAECs中Pin1表达升高，并发生EndMT，抑制Pin1可减弱EndMT，其机制是Pin1通过影响TGF-β1-Smad信号通路，促进Snail等转录因子的表达。

目的:探索表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）对胆管上皮细胞增殖和上皮间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的作用，为胆道闭锁（biliary atresia, BA）肝纤维化的发生机制和治疗方向提供实验依据。方法:收集2019年1月至2020年1月就诊的28例BA和9例胆总管囊肿患儿的肝组织样本，分别作为BA肝脏组和对照肝脏组；收集28例中20例BA患儿的血清，并收集5例胆汁淤积患儿和20例年龄匹配健康体检婴幼儿的血清，分别作为BA血清组、疾病对照血清组和正常对照血清组。通过CK19和N-cadherin免疫组织化学检测肝组织胆管增生和EMT情况；通过酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清EGF的表达水平；进行体外人肝内胆管上皮细胞系（human intrahepatic biliary epithelial cell，HIBEpiC）培养，检测经EGF干预后细胞增殖和EMT的变化。结果:较对照肝脏组，BA肝脏组中胆管增生显著，差异具有统计学意义（ P<0. 001），胆管增生程度与肝纤维化程度正相关，增生的小胆管可分泌大量间质细胞成分。BA血清组EGF表达水平显著高于正常对照血清组，差异具有统计学意义（ P<0. 001），BA肝脏组EGF mRNA水平显著高于对照肝脏组，差异具有统计学意义（ P<0. 001），血清和肝组织EGF水平与肝纤维化程度相关。EGF可明显促进体外胆管上皮细胞增殖，EGF可诱导体外胆管上皮细胞发生EMT。 结论:EGF在BA中高表达，是促进肝内胆管上皮细胞增殖与EMT的重要诱导因子，其在BA肝纤维化进程中起重要作用。

目的:探讨肺癌食管癌缺失基因1（deleted in lung and esophageal cancer 1，DLEC1）对骨肉瘤细胞增殖和转移的影响及其机制。方法:16对骨肉瘤患者的癌组织和配对癌旁组织，比较其DLEC1免疫组织化学染色得分。以人骨肉瘤143B细胞系为研究对象，随机分为重组腺病毒DLEC1过表达载体（pDC316-DLEC1）转染组和对照载体（pDC316-Null）转染组。体外实验筛选稳定转染的细胞克隆，比较两组EdU阳性染色比例、细胞周期分布比例、凋亡细胞比例、Transwell迁移和侵袭细胞数量、钙黏蛋白E和波形蛋白表达量及NF-κB、AKT和ERK信号通路蛋白相对表达量的差异。体内实验构建骨肉瘤裸鼠皮下成瘤模型和尾静脉注射肺转移模型，比较两组皮下种植瘤肿瘤体积、肿瘤重量及肺转移结节数量的差异。结果:骨肉瘤癌组织和癌旁组织中DLEC1的免疫组织化学染色得分分别为（2.88±1.15）分和（4.25±1.06）分。pDC316-DLEC1组较pDC316-Null组，EdU阳性染色比例（36.47%±1.90%和51.47%±2.89%）和S期细胞比例（33.31%±0.61%和43.77%±1.47%）减少，而G0/G1期细胞比例（46.87%±0.73%和35.47%±1.14%）和凋亡细胞比例（13.83%±1.01%和3.30%±0.26%）增加。pDC316-DLEC1组的Transwell迁移细胞、侵袭细胞及波形蛋白的mRNA和蛋白相对表达量分别为（199.00±12.53）个、（104.67±9.07）个、0.59±0.02和0.54±0.08，均少于pDC316-Null组的（369.67±10.02）个、（299.67±12.06）个、1.00±0.02和1.00±0.00，而钙黏蛋白E的mRNA和蛋白相对表达量（2.40±0.05和1.98±0.10）均多于pDC316-Null组（1.00±0.02和1.00±0.00）。pDC316-DLEC1组中NF-κB（p65）、p-AKT（Ser473）和p-ERK（Thr202/Tyr204）的蛋白相对表达量分别较pDC316-Null组减少51.67%±4.04%、64.67%±5.51%和48.67%±4.73%。pDC316-DLEC1组较pDC316-Null组，皮下种植瘤肿瘤体积[（320.00±145.22）mm 3和（798.00±221.94）mm 3]、肿瘤重量[（0.49±0.17）g和（0.88±0.14）g]和肺转移结节数量[（7.71±1.80）个和（20.86±3.53）个]均减少。 结论:DLEC1可抑制人骨肉瘤143B细胞系的NF-κB、AKT和ERK信号通路，并进一步通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制其增殖能力，同时通过逆转上皮间充质转化进程抑制其转移能力。