目的:探讨负载蛋白聚糖4(PRG4)的温度敏感性聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯共聚物(PCEC)可注射水凝胶材料表征及修复新西兰兔软骨缺损的效果。方法:2022年3月至2023年6月，利用PCEC温敏性水凝胶负载了PRG4效应因子(PRG4@PCEC)，使用扫描电子显微镜观察冷冻干燥的PRG4@PCEC水凝胶的形貌，测量PCEC和PRG4@PCEC水凝胶的最低共溶温度；使用活/死细胞染色技术评估水凝胶的生物安全性；采用雄性新西兰大白兔18只，36个膝关节缺损样本，随机分为3组，其中12个缺损组用PRG4@PCEC水凝胶修复，12个缺损组用PCEC水凝胶修复，12个缺损组为空白对照组，观察水凝胶的软骨修复能力；通过微型计算机断层扫描(Micro-CT)分析软骨下骨再生，标本组织切片苏木精-伊红(HE)、马松(Masson)染色及荧光定量聚合酶链反应(PCR)评估水凝胶对软骨缺损的修复作用。组间比较采用 t检验。 结果:水凝胶具有明显的多孔微观结构，PCEC和PRG4@PCEC水凝胶分别在35 ℃和38 ℃表现出最低共溶温度；激光共聚焦观察活/死细胞染色结果证明PRG4@PCEC水凝胶对于兔软骨细胞具有良好的生物相容性；载有PRG4的水凝胶组在8周时，缺损已经完全被高含量的新生软骨组织填充，表明软骨缺损修复最佳；Micro-CT显示在8周时PCEC组[(37.33±0.39) mm 3]和PRG4@PCEC组[(25.33±0.21) mm 3]软骨下骨缺损体积均小于对照组[(51.57±0.49) mm 3， t＝32.19、69.56， P<0.01]；切片染色显示PRG4@PCEC水凝胶组软骨下骨有效形成；荧光定量PCR结果显示在4周和8周PCEC组(2.79±0.07、2.18±0.10)与PRG4@PCEC组白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平(1.54±0.07、0.80±0.10)均低于对照组(3.21±0.08、2.54±0.07， t＝0.68、4.97、27.63、24.43， P<0.01)，同时PCEC组(0.95±0.24、1.45±0.34)和PRG4@PCEC组Ⅱ型胶原蛋白(COL2)基因表达水平(1.19±0.45、1.53±0.26)高于对照组(0.64±0.07、1.01±0.14， t＝7.47、0.08、10.70、3.12， P<0.05)。 结论:负载PRG4的温度敏感性PCEC可注射水凝胶具有良好的温度敏感性和生物安全性，对关节软骨缺损有明显修复作用。

目的:探讨黏膜相关恒定细胞（MAIT细胞）在pSS患者唇腺组织中的表达，并分析其临床意义。方法:获取32例pSS患者和27例非SS对照患者的唇腺组织病理切片，采用免疫荧光方法检测MAIT细胞的表达水平，并结合临床资料进行分析。采用 t检验、方差分析和Spearman相关分析进行统计处理。 结果:pSS患者唇腺组织中的平均MAIT细胞数量为[（2.40±0.33）个/腺体]，显著高于对照组非SS患者的[（0.79±0.13）个/腺体（ t=4.24， P<0.01]；有口干（26例）症状的pSS患者，其唇腺中MAIT细胞的水平显著高于无口干症状pSS患者[（2.73±0.38）个/腺体和（0.95±0.15）个/腺体， t=2.24， P=0.03]；有猖厥龋齿症状（17例）的pSS患者，其唇腺中MAIT细胞的水平也显著高于无猖厥龋齿症状pSS患者[（3.13±0.54）个/腺体和（1.57±0.20）个/腺体， t=2.57， P=0.02]；pSS患者唇腺中MAIT细胞的水平与ESR和ESSDAI评分呈显著正相关[分别为 r=0.37， P=0.04和 r=0.65， P<0.01]；SSA抗体阳性（23例）的pSS患者，其唇腺中MAIT细胞的水平更高[（2.89±0.40）个/腺体和（1.13±0.32）个/腺体， t=2.61， P=0.01]；唇腺组织中淋巴细胞灶数多的pSS患者，MAIT细胞的水平也更高[（1灶：（1.50±0.49）个/腺体，2灶：（2.29±0.52）个/腺体；≥3灶：（3.66±0.59）个/腺体； F=4.22， P=0.02]。 结论:MAIT细胞在pSS患者唇腺组织中的表达高于非SS患者，且与口腔症状、病情活动及严重程度、抗体产生都有关联，提示MAIT细胞有可能参与了pSS的局部炎症反应，并在pSS的发病中起到一定作用。

目的:探讨白细胞介素-12（IL-12）对干燥综合征（SS）小鼠肝脏的损伤作用及其机制。方法:选取12周龄C57BL/6小鼠、非肥胖型糖尿病（NOD）SS模型小鼠、IL-12基因敲除NOD小鼠各5只，分别纳入正常对照组、SS模型组和IL-12 KO NOD组。各组小鼠取外周静脉血分离提取外周血单个核细胞（PBMC）和血清，处死小鼠解剖获取颌下腺组织和肝脏组织。（1）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织制备石蜡切片，HE染色观察肝脏肝小叶结构，MASSON染色观察肝脏纤维化情况。（2）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织、颌下腺组织的石蜡切片免疫组织化学染色观察比较IL-12阳性细胞光密度（OD）值的改变。（3）采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测正常对照组、SS模型组小鼠PBMC和肝脏组织IL-12 mRNA的相对表达量，以及正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠肝脏组织纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅰ型胶原（Col1）mRNA的相对表达量。（4）取正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠外周血血清和肝脏组织，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、转铁蛋白（TRF）、转铁蛋白受体（TFR）蛋白的表达情况。结果:（1）HE染色可见正常对照组小鼠肝小叶结构基本正常，而SS模型组小鼠肝脏的肝小叶、肝索结构紊乱，肝细胞胞浆内有空泡出现。MASSON染色可见SS模型组小鼠肝脏组织中见弥漫不规则的染为蓝色的胶原纤维，正常对照组小鼠肝组织中染为蓝色的胶原纤维则少见。（2）正常对照组小鼠颌下腺和肝脏IL-12阳性细胞OD值分别为0.08±0.01、0.03±0.01，高于SS模型组的8.74±0.78、2.58±0.07，差异均有统计学意义（ t=24.82、80.64， P值均<0.001）。（3）正常对照组小鼠肝脏组织及PBMC中IL-12 mRNA表达分别为1.07±0.15、1.03±0.14，均低于SS模型组的3.00±0.50、3.01±0.57，差异均有统计学意义（ t=8.27、7.54， P值均<0.001）。与正常对照组比，SS模型组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均增高，差异均有统计学意义（ P值均<0.001）；与SS模型组比较，IL-12 KO NOD组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；3组间Col1 mRNA的相对表达量差异无统计学意义（ P=0.243）。（4）与正常对照组比较，SS模型组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF蛋白相对表达量均明显降低，TFR蛋白相对表达量均增高，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。与SS模型组比较，IL-12 KO NOD组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF的相对表达量均增加，血清TFR蛋白的相对表达量降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；而肝脏组织中TFR蛋白的相对表达量差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:IL-12表达增高对SS小鼠肝脏组织的损伤起到了促进作用，其机制可能与增高的IL-12诱导肝脏细胞铁死亡有关。

目的:为了解决传统的中性树脂封片固化时间长，空间占用率高，不适合数字切片扫描等问题，探究紫外光固化胶的制备，保证切片制备质量同时提高封片效率。方法:选择环保安全的预聚物、活性稀释剂和光引发剂制备干燥速度快，透光率高，适用范围广，性质稳定的紫外光固化胶替代传统封片剂。结果:制备出的紫外光固化胶（UV42胶）封片后在紫外光照下15 s可完全固化，透光率达88.4%~89.7%（在波长400~600 nm范围内），广泛适用于冷冻和石蜡切片的常规染色处理封片。使用UV42胶封片的病理切片，放置3年后性质依然稳定，且耐黄变性能良好。结论:UV42胶满足快速病理切片封片的需求。

目的:探究Wnt/β-catenin信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病机制中的作用及清胰汤(QYD)的干预机制.方法:将40只大鼠分为假手术(Sham)组、Sham+QYD组、SAP组和SAP+QYD组.采用经胆胰管逆行注射3.5％牛磺胆酸钠建立SAP大鼠模型,造模48 h后取胰腺和肺组织,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理损伤,真空干燥法检测肺湿/干重比值(W/D),ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6水平,TUNEL试剂盒和蛋白免疫印迹法(WB)检测肺组织凋亡情况.免疫荧光法检测CyclinD1、β-catenin与SFTPC双染情况.WB法检测肺组织中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和下游细胞周期蛋白的表达.结果:与Sham组相比,SAP组大鼠HE切片显示胰腺和肺部病变严重,IL-6含量明显升高,SFTPC表达减少,提示肺泡上皮细胞严重损伤.与SAP大鼠相比,清胰汤治疗后大鼠胰腺和肺组织病理评分、W/D等各项指标均有不同程度改善,IL-6含量减少,凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和下游细胞周期蛋白表达明显上调,免疫荧光双染结果显示清胰汤治疗组出现更多的双染细胞,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:清胰汤通过激活Wnt/β-catenin信号通路减少肺泡上皮细胞凋亡,进而在促进急性胰腺炎相关肺损伤修复中发挥关键作用.

目的:优选出不同状态(新鲜、干燥)及不同药用部位的不同药用植物(滇重楼、密脉鹅掌柴、铁皮石斛)最适宜的制片方法,提高横切面组织装片制备效率.方法:采用不同防冰晶形成保护剂(不处理、蔗糖和甘油)处理新鲜材料并进行冰冻切片,采用甘油软化干燥材料并进行石蜡切片,比较不同前处理条件和两种制片方法的制片效果.结果:新鲜材料中,密脉鹅掌柴的茎叶,滇重楼的根茎、茎、叶采用甘油溶液做保护剂效果较佳,而铁皮石斛适用蔗糖磷酸缓冲溶液做保护剂;滇重楼的须根用石蜡切片法可获得组织结构完整的装片.此外,经甘油溶液软化,滇重楼的干燥根茎和密脉鹅掌柴的干燥叶可获得质量较好的石蜡切片.结论:质地稍硬的新鲜药材用甘油溶液处理后采用冰冻切片可以获取较为理想的效果;质地柔软的新鲜药材可不经任何处理或经蔗糖磷酸缓冲液浸泡后采用冰冻切片;干燥药材或含淀粉类药材采用石蜡切片法可获得理想的切片效果.

目的 通过药物成分含量检测与正交试验相结合的方式,确定当归趁鲜切片的工艺流程及工艺参数.方法 先考察鲜当归杂质处理方法、切片的厚度及其干燥的方式对当归趁鲜切制外观性状、内在结构和药物成分(阿魏酸、挥发油)含量的影响.然后采用L9(34)正交试验,对当归饮片中阿魏酸含量进行分析,选出当归趁鲜切制的最适宜工艺条件.结果 通过正交试验优化得到最适宜当归趁鲜饮片加工工艺为:首先将鲜当归除去芦头、须根和泥沙,并用水洗净其表面泥土和杂质,稍晾至没有水滴下滴时,放入温棚日晒干燥,直到当归归须和归尾(直径在5 mm以内)已干燥,归身变软,再将全当归切成4 mm薄片,最后放置在温棚日晒干燥,即得当归饮片,其饮片中阿魏酸含量为0.221 1％,挥发油含量为0.9％;当归趁鲜切制最适宜工艺所得的当归饮片质量优于传统方法所得的质量(阿魏酸含量为0.193 0％,挥发油含量为0.8％).结论 所得的加工工艺合理、可行,为后期当归趁鲜切片工艺研究奠定基础.

目的 探讨负载miR-34a的Bio-Oss?骨粉与转谷氨酰胺酶交联明胶(transglutaminase crosslinked gela-tin,Col-Tgel)的联合使用对辐照损伤大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的成骨分化作用及对辐照区骨缺损修复的作用.方法 本实验已获得单位实验动物伦理委员会批准.取2周龄SD大鼠长骨骨髓,培养BMSCs并进行鉴定.当BMSCs生长至贴满瓶底80%时,进行2 Gy 剂量X线照射,制备BMSCs辐照损伤模型备用.将2.5、5 μL Col-Tgel分别加入10 mg Bio-Oss?骨粉(P)中,制备复合骨替代材料PG-2.5和PG-5,通过体外和体内实验筛选骨粉与水凝胶合适比例.将lipofectamine 2000分别与Cy3-agomiR-34a、agomiR-34a或agomiR NC混合,然后将各组混合液分别加入10 mg Bio-Oss?骨粉(P)并进行冷冻干燥.将上述负载各组miR的 10 mg Bio-Oss?骨粉和未负载miR的Bio-Oss?骨粉分别与 2.5 μL Col-Tgel混合,制备PG-Cy3-miR-34a、PG-miR-34a、PG-miR NC、PG组复合骨替代材料.将辐照后的BMSCs与PG-Cy3-miR-34a组复合骨替代材料共培养,使用共聚焦显微镜观察转染效果.将辐照后的BMSCs与PG-miR-34a组、PG-miR NC组、PG组复合骨替代材料共培养,使用RT-qPCR检测miR-34a表达、CCK-8检测细胞增殖,并在成骨诱导14 d后利用RT-qPCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达.取8周龄SD大鼠进行双侧胫骨15 Gy 剂量X线照射,3周后在胫骨干骺端骨骺线下方2～3 mm处制备直径3 mm、深度2 mm的胫骨缺损,缺损区分别置入PG-miR-34a组、PG-miR NC组、PG组复合骨替代材料,植入8周后取材行micro-CT和HE切片观察体内骨缺损修复效果.结果 2 Gy辐照影响BMSCs成骨分化能力,辐照组ALP染色浅于非辐照组,辐照组茜素红染色矿化结节少于非辐照组.10 mg Bio-Oss?骨粉与2.5 μL Col-Tgel构建的复合材料具有较好的操作性能和成骨性能,并用于后续实验.PG-Cy3-miR-34a可将负载的Cy3-agomiR-34a转染入辐照损伤BMSCs中.PG-miR-34a可提高辐照损伤BMSCs中miR-34a的表达水平,对细胞增殖无抑制作用,并能显著促进成骨相关基因Runx2、ALP、OCN的表达.在辐照区骨缺损修复实验中,micro-CT显示PG-miR-34a组骨缺损区新生骨体积高于其他组,HE切片染色结果也验证了PG-miR-34a可促进骨缺损修复.结论 miR-34a骨粉复合胶原基水凝胶可促进辐照损伤BMSCs体外成骨分化,促进辐照区骨缺损修复.

目的 建立天麻Gastrodia elata鲜切片质量评价方法,为天麻饮片产地加工提供技术参考.方法 以7 个指标(天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E、醇溶性浸出物)含量和外观性状得分的综合评分为指标,采用AHP-CRITIC法确定各指标权重系数.在单因素试验结果的基础上,应用响应曲面法考察干燥温度、切片厚度、干燥时间对天麻鲜切片质量的影响,筛选天麻饮片最佳趁鲜加工工艺参数,同时采用化学计量学的方法对不同单因素天麻趁鲜加工工艺进行比较.结果 天麻饮片最佳趁鲜加工工艺为新鲜天麻块茎,洗净,待水沸后置于蒸锅上,一级天麻蒸制25 min,二级天麻蒸制 15 min,三级天麻蒸制 10 min,取出,斜切 6 mm,55℃干燥 13 h.结论 AHP-CRITIC评分法将主客观相结合,综合评价天麻趁鲜加工饮片质量优劣,评分结果科学、可靠,优化后的工艺条件稳定性好、简便可行,可用于天麻饮片趁鲜加工.

目的:考察不同干燥加工方法对枳壳药材外观性状和化学成分的影响,为筛选适宜的干燥加工方法提供依据.方法:比较不同干燥方法对枳壳水分、灰分、密度、浸出物含量等理化指标的影响;采用高效液相色谱法(HPLC)分析比较不同干燥方法对枳壳柚皮苷和新橙皮苷含量的影响;采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析比较不同干燥方法下枳壳挥发性成分的差异.结果:趁鲜切片干燥加工方法干燥速度快,枳壳中水分含量低,但浸出物、柚皮苷、新橙皮苷含量均高于其它干燥方法.烘干后切制和晒干后切制枳壳药材外观性状与内在品质相近,晒干枳壳表皮颜色呈棕褐色,烘干枳壳表皮呈绿褐色,两者化学成分相对含量差异不显著.陈放后的枳壳表皮色泽变暗,水分含量升高,浸出物减少,柚皮苷含量升高,新橙皮苷含量降低,挥发性成分减少.结论:综合考虑药材质量、干燥速度和经济性等因素,趁鲜切片干燥适用于枳壳药材的干燥加工.