目的 建立刺五加Acanthopanax senticosus HPLC指纹图谱及原儿茶酸、松柏苷、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷B1、刺五加苷E、丁香树脂酚7种成分含测定方法.方法 采用Diamonsil 5μm C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长210nm,柱温30 ℃,体积流量0.8mL/min,进样量10μL.通过"中国色谱指纹图谱相似度评价系统"(2012版),建立了刺五加HPLC指纹图谱,同时测定了 7种成分的含量.结合主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析和皮尔逊相关性分析对刺五加进行了质量评价.结果 建立了刺五加HPLC指纹图谱,共确定了 18个共有色谱峰;原儿茶酸、松柏苷、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷B1、刺五加苷E以及丁香树脂酚线性关系良好,r2均大于等于 0.9991,平均回收率分别为 92.51％、97.63％、95.11％、101.08％、105.29％、98.92％、85.44％、94.89％.主成分分析提取了 2个主成分,其方差累积为66.920％,表明这2个主成分可包含原有数据的大部分信息;正交偏最小二乘法判别分析筛选出刺五加样品中2个差异性成分(紫丁香苷、刺五加苷B1);皮尔逊相关性分析显示紫丁香苷、绿原酸和刺五加苷B1与其他化学成分的相关性最强.结论 建立的刺五加HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法简单、准确、重复性好,可用于刺五加的质量评价,为其质量控制提供依据.

目的:探讨刺五加苷B对人肺癌A549和H460细胞迁移侵袭的影响.方法:采用不同浓度的刺五加苷B(0、5、15、20、25、30、35、40、45 mmol/L)作用肺癌细胞A549和H460,同时设置对照组和空白组,筛选出最佳作用浓度.用最佳药物浓度刺五加苷B作用肺癌细胞进行细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验,观察细胞划痕面积变化和穿过Transwell小室的细胞数量,探究刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460迁移和侵袭的影响.应用Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Slug、Snail表达情况,探究刺五加苷B对肺癌A549和H460细胞上皮间质转化的作用.结果:刺五加苷B明显抑制肺癌A549和H460细胞划痕面积减少,穿过Transwell小室和基质胶的细胞数量减少.与对照组相比刺五加苷B明显上调上皮标志E-cadherin蛋白表达,并发现EMT 转录因子Slug和Snail表达水平显著降低.结论:刺五加苷B能明显抑制肺癌A549和H460细胞生长、并通过影响EMT进程抑制细胞迁移侵袭.

探讨刺五加苷B对肺癌A549 和H460 细胞凋亡和自噬的影响及其分子机制.采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric,MTT)检测 5、10、15、20、25、30、35、40、45 mmol·L-1 刺五加苷B对肺癌细胞的细胞毒作用;台盼蓝排斥实验检测不同时间刺五加苷B对肺癌细胞A549 和H460 存活率的影响;克隆形成实验检测刺五加苷B对肺癌细胞A549 和H460 增殖的影响;acridine orange/ethidium bromide(AO/EB)荧光双染、Hoechst 33342 荧光染色法检测刺五加苷B对肺癌细胞A549 和H460 凋亡的影响,并应用Western blot法检测凋亡相关蛋白探究凋亡相关分子机制;应用AO荧光染色、Western blot法检测自噬泡以及自噬相关蛋白P62 和微管相关蛋白1 轻链3 蛋白(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达情况.结果显示,与对照组相比,刺五加苷B以浓度依赖的方式抑制肺癌细胞A549 和H460 的生长,并得到刺五加苷B对肺癌细胞A549 和H460 最佳作用时间均为 24 h,最佳作用浓度分别为 28.64、22.16 mmol·L-1;刺五加苷B能够抑制肺癌细胞A549 和H460 集落形成;与对照组相比,在刺五加苷B的作用下能够促进凋亡小体的形成诱导细胞发生凋亡,同时诱导线粒体途径相关蛋白的表达;在刺五加苷B的作用下肺癌细胞中酸性自噬泡增多,LC3Ⅱ表达增加、P62 蛋白表达下降,磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶标(mamma-lian target of rapamycin,mTOR)通路中PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达下降.研究表明,刺五加苷B能够抑制肺癌细胞生长,减少集落形成,并发现是通过线粒体途径诱导肺癌细胞发生凋亡,此外还可诱导细胞自噬的发生,其作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR通路有关.

目的:基于网络药理学和分子对接探讨龙加通络胶囊治疗缺血性中风物质基础及作用机制.方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)以及查阅文献获得穿山龙、刺五加的主要活性成分;使用 PharmMapper数据库预测活性成分靶点,利用人类基因综合数据库(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)得到疾病相关靶点,对活性成分靶点与疾病靶点取交集后采用 DAVID数据库进行基因本体(GO)功能以及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.最后通过 AutoDock Vina软件对关键靶点和化合物进行分子对接批量处理.结果:筛选出穿山龙、刺五加针对缺血性中风的 14 个活性成分和 179个作用靶点.蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络拓扑分析发现白蛋白(ALB)、蛋白激酶 B1(AKT1)、胱天蛋白酶 3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)、酪氨酸激酶(SRC)是穿山龙、刺五加治疗缺血性中风的关键靶点.GO功能分析发现龙加通络胶囊生物过程主要集中在中性粒细胞脱粒、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录过程的正调控、凋亡过程的负调控等多个方面;KEGG信号富集分析主要涉及磷脂酰肌醇 3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/AKT)、有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、Ras相关蛋白 1(Rap1)等信号通路.分子对接结果显示活性物质与靶点蛋白之间存在较强的结合力,其中薯蓣皂苷与 AKT1 的结合力最强.结论:穿山龙、刺五加治疗缺血性中风具有多组分、多靶点相互协同的特点,为今后龙加通络胶囊的临床应用提供了理论基础和参考.

目的 研究细叶十大功劳Mahonia fortunei茎水提取物脂溶性部位的化学成分.方法 采用硅胶、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,通过化合物的谱学数据鉴定其结构.结果 从细叶十大功劳茎水提取物的醋酸乙酯可溶部位分离出38个化合物,分别鉴定为麦芽酚(1)、3-羟基-4-甲氧基苯乙醇(2)、紫丁香基乙酮(3)、1-羟基-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙酮(4)、α-羟基丁香丙酮(5)、紫堇定(6)、浙贝素(7)、香草酸(8)、丁香酸(9)、降氧化北美黄连次碱(10)、(+)-丁香脂素(11)、表丁香脂素(12)、五味子醇甲(13)、新海胆灵A (14)、8-氧化药根碱(15)、8-氧化小檗碱(16)、5-羟基麦芽酚(17)、5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯(18)、吐叶醇(19)、2,3-二羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(20)、马齿苋酰胺E (21)、石菖蒲碱A(22)、5-表石菖蒲碱A(23)、5-(甲氧基甲基)-1H-吡咯-2-甲醛(24)、(+)-南烛木树脂酚(25)、(-)-开环异落叶松脂素(26)、刺五加酮(27)、原儿茶酸(28)、腺苷(29)、3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(30)、2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(31)、扭旋马先蒿苷B(32)、虎皮楠苷(33)、(+)-丁香脂素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(34)、表丁香脂素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(35)、小檗碱(36)、3,4,5-三甲氧基苯基-(6'-O-紫丁香酰基)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(37)、红景天苷(38).结论 化合物3～7、13～15、17～19、21～27、29、31、33和38为首次从该属植物中分离得到,并且首次报道了化合物15的核磁波谱数据.

目的 建立一种高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)分析方法,可同时测定脑复清胶囊中刺五加苷E、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、异嗪皮啶、迷迭香酸、三七皂苷R1、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd和大黄素共11种成分的含量.方法 采用Agilent Poroshell 120 EC-C18 (75 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温35℃.质谱采用负离子多反应监测模式进行检测.结果 11个成分在各自浓度范围内线性关系良好(r＞0.996),刺五加苷E、二苯乙烯苷、异嗪皮啶、迷迭香酸、三七皂苷R1、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、大黄素的加样回收率分别为106.4％、104.2％、99.9％、102.3％、104.1％、98.3％、108.9％、103.6％、105.8％、101.9％、104.2％;11种成分在10批样品中的质量分数分别为0.274～0.310 mg/g、1.579～1.642 mg/g、0.093～0.099 mg/g、0.331～0.352 mg/g、1.115～1.229 mg/g、1.663～1.870 mg/g、4.884～5.173 mg/g、0.691～0.762 mg/g、2.974～3.358 mg/g、1.053～1.493 mg/g、0.100～0.115 mg/g.结论 所建立的方法灵敏度高,稳定快速,适用于同时测定脑复清胶囊中11个成分的含量,可以用于该产品质量控制.

目的 研究刺五加皂苷对小鼠急性酒精性肝氧化损伤的保护作用及分子机制.方法 采用Balb/c雄性小鼠随机分为对照组、酒精肝损伤模型组和3个不同剂量刺五加皂苷保护组.刺五加皂苷保护组每日给予低、中、高剂量皂苷灌胃连续1周.在第5～7日,模型组及各给药组动物给予无水乙醇(5 g·kg-1体重)灌胃.处死实验动物取血清检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),取肝组织检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及还原型谷胱甘肽(GSH),提取肝组织蛋白检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路及核转录因子kappaB(NF-κB)通路及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的表达.结果 酒精性肝损伤能够显著提高动物血清中ALT和AST水平,同时显著提高氧化损伤产物MDA水平,降低抗氧化酶SOD、CAT和GSH水平,提高p38MAPK的磷酸化水平,促进NF-κB核转位,提高炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达.而刺五加皂苷能够剂量依赖地改善上述酒精引起的各项指标变化.结论 酒精引起明显的肝脏氧化损伤,刺五加皂苷能够通过提高抗氧化酶,降低氧化应激,抑制氧化还原调控的p38MAPK和NF-κB信号通路,抑制炎症因子释放,从而发挥抗酒精性肝氧化损伤的保护作用.

目的 研究小驳骨Gendarussa vulgaris地下茎的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶色谱等方法进行化学成分的分离纯化,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果 从小驳骨地下茎的乙醇提取物分离得到了16个化合物,分别鉴定为胡萝卜苷(1)、6"-O-acetylisavitexin (2)、9,10-dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one (3)、22E,24R-ergosta-7,22-diene-3β,5a,6β,9a-tetraol (4)、异鼠李素(5)、槲皮素(6)、刺五加苷E(7)、gusanhmg A(8)、gusanlung B(9)、桦木醇(10)、异牡荆黄素-2"-O-鼠李糖苷(11)、异牡荆黄素(12)、芫花素(13)、芹菜素(14)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(15)、2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(2-hydroxy-5-methoxyphenyl)-3-oxo-1-propanol (16).结论 化合物3、5、11、12、15均为首次从该植物中分离得到,其中化合物2、4、13、16为首次从该属植物中分离得到.

本研究采用高效液相色谱建立了一种简便、灵敏可同时测定刺五加茎中原儿茶酸、L-苯丙氨酸、刺五加苷B、绿原酸、咖啡酸、刺五加苷E和异嗪皮啶含量的方法.采用Welchrom C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1％磷酸水为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为210 nm,柱温为30℃.在55 min内,刺五加茎中7种成分完全分离,样品含量与其对应峰面积Y呈现良好的线性关系(r =0.999 3 ～0.999 9);平均加样回收率为99.2％ ～ 100.7％,RSD为0.72％～ 1.14％.应用该方法,我们对采收于不同日期的刺五加茎中的七种成分进行了测定,测定结果表明,7种功效成分含量的综合评价指标在11月份较高.本研究建立的多成分HPLC测定方法简便、灵敏、稳定,适合用于刺五加多成分的定量分析和刺五加药材质量控制.

目的:基于正交设计结合G1-熵权法优选出剌五加有效成分的提取工艺.方法:采用G1-熵权法的主客观赋权法结合L9(34)正交设计,以料液比、提取时间、溶媒量为考察因素,刺五加B、刺五加苷E、异嗪皮啶、绿原酸的成分含量为评价指标,优选刺五加的最佳的提取工艺.结果:最佳提取工艺为提取时间75 min,料液比1∶25,70％的甲醇.在此条件下,4个评价指标的RSD均小于2.0％,3批验证试验数据组间均无明显差异.结论:优选出的提取工艺方法稳定,刺五加B、刺五加苷E、异嗪皮啶和绿原酸的提取率较高,可为中药材刺五加现代工业化生产提供技术参考.