目的 对扁刺峨眉蔷薇Rosa omeiensis f.pteracantha全株的化学成分和酪氨酸酶抑制活性进行研究.方法 将扁刺峨眉蔷薇样品进行干燥、粉碎,采用溶剂提取法、MCIHP20柱色谱、硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱、半制备RP-HPLC等方法进行分离纯化,利用1D-NMR、MS等多种现代波谱技术对化合物进行结构鉴定.并采用B16F10细胞建立酪氨酸酶抑制活性评价模型,利用多巴氧化法评价化合物对B16F10细胞中的酪氨酸酶抑制活性.结果 从扁刺峨眉蔷薇75％甲醇提取物的醋酸乙酯萃取部位中共分离得到21个化合物,分别鉴定为野鸦椿酸(1)、negundonorin A(2)、覆盆子酸(3)、刺梨苷(4)、野蔷薇苷(5)、2α,3α-dihydroxy-19-oxo-18,19-seco-urs-11,13(18)-dien-28-oicacid(6)、胡萝卜苷(7)、小麦黄素(8)、8-甲氧羰基儿茶素(9)、柚皮素(10)、槲皮素(11)、3,3'-O-二甲基鞣花酸(12)、1-hydroxy-2,6-bis-epi-pinoresinol(13)、东莨菪素(14)、3-吲哚甲醛(15)、短叶苏木酚酸甲酯(16)、3,4,5-trimethoxyphenyl-(6'-O-galloyl)-O-β-D-glucopyranoside(17)、没食子酸甲酯(18)、原儿茶酸(19)、β-羟基-3-甲氧基-4-羟基苯乙酮(20)、异香草酸(21).酪氨酸酶抑制活性筛选结果表明,在浓度40 μmol/L时,化合物1～3、5、13、14、16、21有显著酪氨酸酶抑制活性(P＜0.05、0.01),且抑制作用高于阳性药曲酸.在浓度20μmol/L时,化合物1、3、5、14、21具有显著的酪氨酸酶抑制活性(P＜0.05、0.001).结论 21个化合物均为首次从扁刺峨眉蔷薇中分离得到,其中化合物2、6、12、15、17、20为首次从蔷薇属中分离得到;多数化合物都具有显著的酪氨酸酶抑制活性,且活性高于阳性药曲酸.扁刺峨眉蔷薇资源在用于美白功效日用品的开发方面具有较高的潜力.

[背景]砷可引起肝脏功能紊乱、脂肪变性、炎症、纤维化等不同程度肝损伤,但其机制尚不明确且缺乏有效治疗手段.[目的]从S-腺苷甲硫氨酸(SAM)代谢角度初步探讨刺梨汁对砷致大鼠肝损伤的干预作用及机制.[方法]36只Wistar大鼠按随机数字法分为 6组,每组 6只,雌雄各半.低、中、高砷剂量组分别给予 2.5、5.0、10.0 mg·kg-1 亚砷酸钠(NaAsO2)(以体重计,后同)灌胃,对照组给予10 mL·kg-1 去离子水灌胃;刺梨汁干预组给予 10 mg·kg-1 NaAsO2 灌胃 4 h后给予 10 mL·kg-1刺梨汁灌胃;刺梨汁对照组给予 10 mL·kg-1 刺梨汁灌胃;每天灌胃 1次,每周灌胃 6 d,共处理4个月.苏木素-伊红染色(HE染色)观察大鼠肝脏组织病理学改变;酶循环法、速率法分别检测大鼠肝功能指标总胆汁酸(TBA)、谷氨酰胺转移酶(γ-GT);超高效液相色谱(UPLC-MS)检测大鼠肝脏SAM、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量;实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测大鼠肝脏中SAM代谢相关酶甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)、烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)基因(Gnmt、Nnmt、Pemt)的mRNA水平.[结果]对照组大鼠肝细胞核染清晰,胞浆染色均匀,肝索呈放射状排列,无炎性细胞浸润;低、中、高砷剂量组可见不同程度的肝窦扩张、充血,炎性浸润.与对照组比较,中、高砷组TBA及高砷组γ-GT明显增加(P<0.05),且随染砷剂量增加逐渐升高(P趋势<0.05).与对照组相比,低、中、高砷剂量组SAH含量明显增高,SAM含量、SAM/SAH明显降低(P<0.05),且均与染砷剂量呈剂量-反应关系(P趋势<0.05);SAM、SAM/SAH的降低与大鼠肝功能指标TBA(SAM:r=-0.569;SAM/SAH:r=-0.607)、γ-GT(SAM:r=-0.577;SAM/SAH:r=-0.622)的增加相关(P<0.05).此外,与对照组相比,高砷剂量组Gnmt及低、中、高砷剂量组Nnmt、Pemt基因mRNA表达水平均明显上升(P<0.05),且随染砷剂量升高呈上升趋势(P趋势<0.05).Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达与SAM(r=-0.490,r=-0.567,r=-0.593)、SAM/SAH(r=-0.433,r=-0.564,r=-0.746)均呈负相关(P<0.05).与高砷剂量组相比,刺梨汁干预组大鼠肝细胞肝窦扩张减轻,炎性浸润情况得到缓解;γ-GT、TBA明显降低,且恢复至对照组水平;Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达明显降低,SAH含量下降,SAM含量及SAM/SAH回升(P<0.05).[结论]砷诱导的大鼠肝损伤与肝脏Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达升高和SAM消耗密切相关.刺梨汁可能通过抑制砷诱导的Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达异常升高及SAM过度消耗改善砷引起的大鼠肝损伤.该研究结果为从维持SAM角度防治砷中毒肝损伤提供了依据.

目的 研究平卧菊三七Gynura proeumbens (Lour.) Merr.全草的化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、反相ODS等技术进行分离纯化;通过理化性质、核磁、质谱等方法鉴定化合物结构.结果 从平卧菊三七乙醇提取物中分离得到了27个化合物,分别鉴定为邻苯二甲酸二丁酯(1)、熊果酸(2)、山柰酚-3-O-p-D-葡萄糖苷(3)、5-hydroxymaltol (4)、对羟基苯甲酸(5)、4-氨基肉桂酸(6)、(E)-2-hexeny1β-D-glucoside (7)、1-(3-indolyl)-2,3-dihydroxy-propan-1-one (8)、山柰酚-7-D-β-D-葡萄糖苷(9)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸甲酯(11)、芦丁(12)、橙皮苷(13)、3,4-dihydroxyphenylacetic acid methyl ester (14)、刺梨酸(15)、委陵菜酸(16)、2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-O-β-D-glucopyranoside (17)、negletein (18)、没食子酸-3-甲基醚(19)、caesalpiniaphenol D(20)、2,5-二羟基苯甲酸(21)、原儿茶醛(22)、isohematinic acid (23)、icariside B1 (24)、dendranthemoside B(25)、4-甲氧基肉桂酸(26)、黄芩苷(27).结论 化合物4、6～9、11、13～27为首次从菊三七属植物中分离得到,化合物1、2、10和12为首次从平卧菊三七中分离得到.

[目的]测定蕨麻中刺梨苷和蕨麻苷含量.[方法]采用氨基固相萃取小柱对蕨麻提取物进行纯化,随后采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)对提取物含量进行测定.HPLC流动相为甲醇:水:四氢呋喃:磷酸=55:45:6:0.2(v/v).[结果]在10～160 μg/ml范围内,刺梨苷和蕨麻苷线性方程相关系数大于0.9995.两个目标化合物的日内和日间精密度标准差均小于4％.刺梨苷和蕨麻苷的最低检测限分为0.1和0.2 μg/ml,SPE和方法回收率均高于97％.[结论]本实验首次建立了蕨麻提取液中刺梨苷和蕨麻苷的SPE纯化,HPLC分离及含量测定方法,结果证实该方法具有良好的专属性,稳定性和准确性.

[目的]建立HPLC-ELSD法同时测定不同产地、不同等级蕨麻中野蔷薇苷和刺梨苷含量.[方法]本实验采用色谱柱JADE-PAK ODS(250 mm×4.6 mm,5μm,ECHWAY,China),以30％乙腈-70％水为流动相,流速设置为1.0 ml/min,进样体积为20μl,柱温为30℃;ELSD检测器漂移管温度为40℃,气体压力为350 kPa,检测信号放大倍数为8.[结果]野蔷薇苷和刺梨苷分别在34.80～754.00 μg/ml(r2=0.9981)和34.23～741.65 μg/ml (r2=0.9992)范围内呈现良好的线性关系;检测限和定量限分别为10.80和23.08μg/ml、14.17和28.92 μg/ml;日内和日间精密度的相对标准偏差分别为0.76％和2.36％、2.06％和6.12％;稳定性RSD均小于3.40％;加样回收率分别为97.57％和99.16％,且RSD均小于5.37％.11批不同产地和等级的蕨麻药材中,野蔷薇苷的含量在0.644 (g/g)‰～1.453(g/g)‰之间,刺梨苷的含量在0.312 (g/g)‰～0.563 (g/g)‰之间.[结论]本实验所建立的HPLC-ELSD方法,可以快速、简便、准确地测定出蕨麻药材中野蔷薇苷和刺梨苷的含量.来源于青藏高原产地的蕨麻药材中野蔷薇苷和刺梨苷含量更高;相同产地的蕨麻,等级越高(颗粒越饱满),野蔷薇苷和刺梨苷的含量越低.

目的:研究藏药人参果的化学成分.方法:采用减压硅胶柱色谱、中压反相ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱和高压快速制备色谱等手段等方法分离纯化,并根据理化性质和NMR、MS波谱等现代波谱技术对所得化合物的结构进行鉴定.结果:从人参果中分离得到13个化合物,分别鉴定为:crotonine(1)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、野蔷薇苷(3)、刺梨苷(4)、arjunetin(5)、覆盆子酸(6)、人参皂苷Rg1(7)、号角树酸-3-甲酯(8)、2-氧代坡模酸(9)、坡模酸(10)、dehydrodigallic acid monomethyl ester (11)、对羟基苯甲酸(12)、没食子酸甲酯(13).结论:其中,化合物1、2、7、8、11为首次从委陵菜属植物中分离得到.

目的 制定刺梨药材质量标准,用于刺梨的生产、监督、流通及使用等各环节的质量控制.方法 参照《中国药典》通用检测方法及相关指导原则分别制定刺梨的水分、总灰分、浸出物限度;采用特征图谱以及薄层色谱法控制刺梨整体质量.结果 刺梨特征图谱中应呈现6个特征峰,并应与对照药材参照物色谱峰中的5个特征峰保留时间相对应,另有1峰应与加入的异槲皮苷对照品参照物峰保留时间相对应.水分不得过14.0％,总灰分不得过5.0％,醇溶性浸出物不少于20.0％.结论 实验所建立的刺梨质量标准符合国家有关中药质量标准制定要求,能够以标准的形式对刺梨的质量进行控制.

民族药刺梨根茎在贵州少数民族地区有着广泛的应用,为验证其化学成分的抗炎活性,该文以民族药新鲜刺梨根茎为原料,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法对其根茎的化学成分进行分离纯化,通过理化性质和NMR等波谱数据鉴定化合物的结构;采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7作为炎症模型,考察刺梨根茎化学成分对巨噬细胞经LPS刺激后产生的NO炎症因子的影响,评价其抗炎活性.结果表明:(1)从刺梨根茎乙醇提取物中共分离获得15个化合物,结构分别鉴定为刺梨苷(1)、野蔷薇苷(2)、蔷薇酸(3)、β-D-glucopyranosyl-(2a→1b)-2a-O-β-L-arabinopyranosyl-(2b→1c)-2b-O-β-L-arabinopyranosyl-(2c→1d)-2c-O-β-L-arabinopyranosyl-(2d→1e)-2d-O-β-L-arabinopyranosyl-(2e→1f)-2e-O-β-L-arabinopyranoside(4)、儿茶素(5)、3-O-methylellagic acid-4′-O-β-D-xylopyranoside(6)、3-O-methylellagic acid-4′-O-α-L-rhamnopyranoside(7)、委陵菜酸(8)、桦木酸(9)、spinosic acid(10)、arjunic acid(11)、β-谷甾醇(12)、β-胡萝卜苷(13)、α-tocopherol(14)、正二十六烷(15).其中化合物4、6、7首次从该植物中分离得到.(2)对其中的化合物1-7进行体外抗炎活性实验,结果发现化合物1-7对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放的NO均有明显抑制作用,且呈剂量依赖关系;化合物1-7在抗炎作用上表现出较好活性,其IC50值分别为25.07、24.56、17.65、9.87、16.67、40.83、34.98μmol·L-1(阳性对照地塞米松为22.46μmol·L-1),其中化合物3、4、5的活性优于地塞米松.该研究结果阐明了刺梨根茎中的三萜类、鞣花酸类、黄酮类和寡糖类化合物是其抗炎作用的主要有效成分,并验证了刺梨根茎的民间抗炎功效.

目的 探讨刺梨苷经TGF-β1/ERK信号通路对亚砷酸钠诱导人永生化角质形成细胞(HaCaT)凋亡的影响.方法 将HaCaT细胞分别暴露于含终浓度为 0(对照组)、0.25 μmol/L亚砷酸钠的培养基中染毒 24 h,然后依次暴露于含终浓度为 0、10-15、10-14、10-13、10-12、10-11、10-10、10-9 mol/L刺梨苷溶液的培养基中继续培养 24 h,采用CCK-8 检测细胞存活率.将HaCaT细胞分为对照组(培养液)、亚砷酸钠组(0.25 μmol/L)、刺梨苷组(10-13 mol/L)、亚砷酸钠+刺梨苷组(0.25 μmol/L亚砷酸钠染毒 24h后,再加入 10-13 mol/L刺梨苷),染毒 24 h,以FITC/PI双染法检测HaCaT细胞凋亡率情况,以实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bax和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,0.25 μmol/L亚砷酸钠单独及联合各浓度刺梨苷均能增高HaCaT细胞的存活率,差异有统计学意义(P＜0.05).与 0.25 μmol/L亚砷酸钠组比较,0.25 μmol/L亚砷酸钠联合各浓度刺梨苷均能增高HaCaT细胞的存活率,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着刺梨苷染毒浓度的升高,0.25 μmol/L亚砷酸钠染毒HaCaT细胞的存活率呈先升高后下降的趋势,以 0.25 μmol/L亚砷酸钠+10-13 mol/L刺梨苷组最高.刺梨苷组HaCaT细胞的凋亡率＜对照组＜亚砷酸钠+刺梨苷组＜亚砷酸钠组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,亚砷酸钠组HaCaT细胞凋亡相关基因caspase-3、caspase-9 mRNA及蛋白表达水平和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax蛋白表达水平均增高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05);刺梨苷组HaCaT细胞caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达水平和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9 蛋白表达水平均下降,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞caspase-9、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和Bax蛋白表达水平显著增高,而caspase-3、Bax mRNA表达水平和caspase-3、cleaved caspase-9 蛋白表达水平均降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).与亚砷酸钠组比较,亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达和caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平增高,差异均具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,亚砷酸钠组HaCaT细胞TGF-β1/ERK信号通路相关基因TGF-β1、ERK1/2 mRNA及蛋白表达水平和p-ERK1/2 蛋白表达水平均增高,差异均有统计学意义(P＜0.05);刺梨苷组HaCaT细胞ERK1/2 mRNA及蛋白表达和TGF-β1 蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞TGF-β1 mRNA表达和p-ERK1/2 蛋白表达水平均升高,ERK1/2mRNA及蛋白表达和TGF-β1 蛋白表达均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与亚砷酸钠组比较,亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞TGF-β1 和ERK1/2mRNA及蛋白表达均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 刺梨苷可能通过抑制TGF-β1/ERK信号减轻亚砷酸钠诱导的HaCaT细胞凋亡.