目的 鉴定速效救心丸干预稳定型心绞痛气滞血瘀证患者的差异代谢物、代谢通路,探讨速效救心丸相关治疗作用机制.方法 选择 2019 年 9 月—2021 年 9 月在东直门医院等接受义诊的患者和健康人,试验组纳入30 例稳定型心绞痛气滞血瘀证患者,对照组纳入30 名健康人.利用液相色谱-质谱技术对两组受试者进行血清代谢组学分析,采用多变量偏最小二乘回归分析模型的前2 个主成分的VIP值,结合单变量分析差异倍数和P值筛选差异代谢物,基于京都基因与基因组百科全书数据库对差异代谢物进行代谢通路富集分析.结果 共鉴定出试验组与对照组的差异代谢物18 种,其中,4-羟基肉桂酰亚胺、胆绿素-Ⅸ-β、2-亚甲基谷氨酸等代谢物含量低于健康人,左旋肉碱、维生素BT、胍丁胺、柠康酸、鸟嘌呤、薄荷脑等代谢物含量高于健康人.对比试验组患者服用速效救心丸治疗前后的21 种差异代谢物,治疗后细菌叶绿素a、植物鞘氨醇、4-氧视黄醇、神经酰胺、1-甲基鸟嘌呤等代谢物含量较治疗前下降,6-酮前列腺素E1、树脂毒素、前列腺素G2 含量较治疗前升高.差异代谢物质的异常变化提示稳定型心绞痛患者体内可能存在氨基酸、脂质、视黄醇、嘌呤、卟啉和叶绿素、瞬时受体电位通道的炎症介质调节、血清素能突触等多种代谢途径的紊乱.结论 稳定型心绞痛气滞血瘀证患者与健康人体内代谢物存在明显差异,速效救心丸具有双向调节体内血清代谢物的作用,从而发挥调节肠道菌群、维持肠道屏障、改善血脂水平、增加血管内皮功能的稳定、减轻组织细胞炎症反应、抗氧化等作用.

根据已报道的刺甘草C4H基因序列(GenBank ID:D87520.1),采用RT-PCR技术克隆得到乌拉尔甘草悬浮细胞的C4H基因编码区序列,并对其进行生物信息学分析.另外,采用q-PCR方法对C4H基因受茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)诱导后的表达模式进行分析.所克隆的C4H基因编码区开放阅读框(Opening reading frame,ORF)长为1 515 bp,编码504个氨基酸.q-PCR实验证明C4H基因受MeJA的诱导,在悬浮体系添加MeJA后12h达到最高表达水平.

目的 研究平卧菊三七Gynura proeumbens (Lour.) Merr.全草的化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、反相ODS等技术进行分离纯化;通过理化性质、核磁、质谱等方法鉴定化合物结构.结果 从平卧菊三七乙醇提取物中分离得到了27个化合物,分别鉴定为邻苯二甲酸二丁酯(1)、熊果酸(2)、山柰酚-3-O-p-D-葡萄糖苷(3)、5-hydroxymaltol (4)、对羟基苯甲酸(5)、4-氨基肉桂酸(6)、(E)-2-hexeny1β-D-glucoside (7)、1-(3-indolyl)-2,3-dihydroxy-propan-1-one (8)、山柰酚-7-D-β-D-葡萄糖苷(9)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸甲酯(11)、芦丁(12)、橙皮苷(13)、3,4-dihydroxyphenylacetic acid methyl ester (14)、刺梨酸(15)、委陵菜酸(16)、2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-O-β-D-glucopyranoside (17)、negletein (18)、没食子酸-3-甲基醚(19)、caesalpiniaphenol D(20)、2,5-二羟基苯甲酸(21)、原儿茶醛(22)、isohematinic acid (23)、icariside B1 (24)、dendranthemoside B(25)、4-甲氧基肉桂酸(26)、黄芩苷(27).结论 化合物4、6～9、11、13～27为首次从菊三七属植物中分离得到,化合物1、2、10和12为首次从平卧菊三七中分离得到.

目的 探讨隔药灸神阙穴治疗原发性痛经的可能作用机制.方法 将40只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、隔药灸组、灌胃组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠采用皮下注射苯甲酸雌二醇和催产素联用的方法制备原发性痛经大鼠模型.第5日开始,隔药灸组给予隔药灸神阙穴;灌胃组给予复方益母草膏溶液80g/(kg·d)灌胃,两组均每日1次,连续6日.空白组皮下注射等容积生理盐水,每日1次,连续10日.观察各组大鼠腹腔注射催产素后30 min内的扭体反应情况.给药结束后检测大鼠腹主动脉血,进行主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析,寻找隔药灸组与灌胃组主要差异性代谢产物和代谢通道. 结果 与模型组比较,隔药灸组、灌胃组扭体潜伏期均延长,扭体次数均减少(P＜0.01);与灌胃组比较,隔药灸组扭体潜伏期、扭体次数差异均无统计学意义(P＞0.05).隔药灸组筛选后得到10种差异性代谢物,其中鉴定了4种对分类有重要贡献的差异性代谢物,主要表现为血液中的羟脯氨酸、丙酮酸、L-半胱氨酸、谷氨酸的上升,涉及的代谢通路有谷胱甘肽代谢通道、氨基酸代谢通道、苯丙氨酸代谢通道.灌胃组筛选后得到12种差异性代谢物,其中鉴定了3种对分类有重要贡献的差异性代谢物,主要表现为血液中的氢化肉桂酸、硫磺酸、2-酮己二酸3的下降,涉及的代谢通路有氨基酸代谢通道、苯丙氨酸代谢通道.结论 隔药灸神阙穴对通过谷胱甘肽代谢通道代谢的胶原蛋白类氨基酸的影响可能是其治疗原发性痛经的特异性机制之一.

采用色谱方法对沙苑子的95％乙醇提取物正丁醇萃取部位进行分离纯化,并通过质谱、核磁共振谱和文献比对等方法对分离得到的单体化合物进行结构鉴定.从中分离并鉴定了20个化合物,包括15个黄酮类和5个其他类化合物.化合物1为1个新的黄酮苷,命名为沙苑子苷C.19个已知化合物分别鉴定为:山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(2),山柰酚-3-O-α-L-阿拉伯糖苷(3),山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4),鼠李柠檬素-3-O-β-D-葡萄糖苷(5),鼠李柠檬素-3-O-[5-O-阿魏酰-β-D-呋喃芹菜糖-(1→2″)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),鼠李柠檬素-3-O-[5-O-对香豆酰-β-D-呋喃芹菜糖-(1→2″)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(7),沙苑子苷B(8),鼠李柠檬素-3-O-[β-D-呋喃芹菜糖-(1→2)]-β-D-葡糖糖苷(9),沙苑子A(10),槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷(11),沙苑子杨梅苷(12),杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷(13),杨梅素-3-O-[β-D-吡喃木糖-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(14),毛蕊异黄酮(15),对氨基肉桂酸(16),邻苯二酚(17),赤式-愈创木基甘油-β-阿魏酸醚(18),D-3-O-甲基肌醇(19),去氧土大黄苷(20).其中化合物1为新化合物,化合物16～19为首次从该植物中分离得到.该研究为沙苑子化学成分研究提供一定的参考.

目的:基于白及提取物具有广泛的生物活性,本研究对白及95％乙醇提取物乙酸乙酯部位的化学成分进行研究,为白及的质量控制和开发利用提供一定的理论依据.方法:采用反复硅胶LH-20羟丙基葡聚糖(Sephadex LH-20)凝胶、制备薄层色谱、制备高效液相色谱等多种方法对白及的乙酸乙酯部位进行分离纯化,应用TLC,HPLC跟踪监测,分离得到纯度较高的单体化合物.根据理化性质及质谱(MS),1H-NMR和”C-NMR等波谱数据鉴定化合物结构.结果:从白及的乙酸乙酯萃取部位分离得到12个化合物,分别鉴定为大黄素甲醚(1),红灰青素(2),8-C-对羟基苄基山柰酚(3),N-苯甲酰-L-苯丙氨酸-N-苯甲酰-L-苯丙氨酸酯(4),松脂醇(5),(E)-4'''-羟基苯乙基3-(4′-羟基苯基)丙烯酸酯(6),对甲氧基二氢肉桂酸(7),对羟基苯甲醛(8),对羟基苯甲酸(9),香草酸(10),邻苯二甲酸二丁酯(11),棕榈酸乙酯(12).化合物类型包括蒽醌类(1和2),黄酮类(3),氨基酸衍生物(4),木脂素(5),苯丙素(6和7),以及其他小分子芳香族化合物(8～11)和脂肪族(12).结论:化合物2,3,4,6,7,11和12均为首次从白及植物中分离得到.

肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是木质素生物合成的关键酶之一,对木质素生物合成途径的碳流具有重要的调控作用.研究毛竹(Phyllostachys edulis)CCR基因的分子特征和表达模式对于揭示影响竹子材性的木质素调控机制具有重要意义.采用同源序列比对的方法在毛竹基因组中获取13个CCR基因同源序列,其中9个具有完整的保守结构域,依次命名为PeCCR1～PeCCR9.PeCCRs基因的内含子数量、长度和位置均存在较大差异,如PeCCR2有5个内含子,而PeCCR5没有内含子;内含子最长的为4 090 bp,最短的仅为89 bp.PeCCRs编码的氨基酸序列长度范围为136～391 aa,推测分子量在14.97～43.05 kD之间,理论等电点介于5.60～8.31之间.PeCCRs的氨基酸序列在N-端和C-端均存在明显的差异,二级、三级结构进一步显示了其差异,但中部序列具有很高的一致性,都含有肉桂酰辅酶A还原酶家族蛋白特有的保守结构域和催化位点,表明其进化上是比较保守的.基于转录组数据的基因组织表达特异性分析表明,Pe CCRs在各组织中的表达量差异明显,如PeCCR6在盛花期花序、鞭和笋中均未检测到基因表达,PeCCR9在盛花期花序中的表达是所有PeCCRs最高的,而PeCCR5在50 cm笋中则是所有检测到PeCCRs中最低的.本研究为进一步研究毛竹CCR基因家族成员的功能提供了参考,为利用基因工程调控竹子木质素提供了依据.

目的 探究淹水胁迫对杭菊绿原酸合成途径中的关键酶香豆酰基喹酸酯3'-单加氧酶(C3'H)和莽草酸羟基肉桂酰基转移酶(HCT)基因的表达和活性成分的影响.方法 使用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)方法基于杭菊转录组数据库克隆HCT和C3'H基因各2个,其中C3'H酶的2个基因CmC3'H1、CmC3'H2,HCT酶的2个基因CmHCT1、CmHCT2,并进行生物信息学分析;同时在杭菊花芽分化期进行淹水胁迫,以β-actin为内参基因,使用qRT-PCR检测以上4个基因的相对表达量;然后使用HPLC法测定杭菊这4个基因的下游产物及其他指标成分含量.结果 通过研究获得了4条基因的完整开放阅读框,并且预测其氨基酸序列的相对分子质量和理论等电点(pI),同时构建蛋白质三级结构模型.qRT-PCR结果显示在花芽分化期对杭菊进行持续3d的淹水处理会导致以上4个基因在不同生长时期内的表达显著变化.HPLC结果显示淹水处理后的杭菊C3'H和HCT所催化形成的下游产物绿原酸含量显著高于对照组,同时发现其他2种指标成分木犀草苷和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量也显著高于对照组.结论 杭菊在淹水胁迫下可以通过调节4种基因的表达来调控下游产物的合成,从而对淹水胁迫做出应答,而且花芽分化期进行淹水胁迫可以显著增强杭菊活性成分的积累.

目的 基于细辛转录组测序结果,克隆甲基丁香酚合成相关酶基因,了解相应的序列信息.方法 以细辛叶片为材料,通过RT-PCR扩增得到苯丙氨酸裂解酶(PAL)、肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-羟基肉桂酰辅酶A连接酶(4CL)、肉桂醇脱氢酶(CAD)等基因的cDNA全长,并进行生物信息学分析.结果 AhPAL、AhC4H、Ah4CL和AhCAD基因的ORF长度分别为2 157、1 278、1 623、1 071 bp,编码718、425、540、356个氨基酸.4种蛋白均具有各自的保守结构域.除AhC4H外,AhPAL、Ah4CL和AhCAD与已报道的其它物种相应酶的氨基酸序列相似性都较高.结论 对细辛甲基丁香酚合成相关酶基因进行克隆和生物信息学分析,为后续基因功能分析及甲基丁香酚生物合成调控机制的解析奠定基础.

肉桂酸4-羟基化酶(cinnamic acid 4-hydroxylase,C4H)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,在植物黄酮类物质合成代谢过程中发挥重要作用.鲜切荸荠贮藏过程中由于黄酮类物质积累而导致的黄化现象很可能离不开C4H的参与.本研究利用RACE技术在荸荠中克隆得到C4H基因cDNA全长,命名为CwC4H(GenBank登录号:MG719237),该序列长度为1 736 bp,编码一条由505个氨基酸组成的多肽,分子量为57.826 kD.CwC4H包含细胞色素P450结构域,其二级结构以oα-螺旋为主.多重比对结果表明,CwC4H具有该基因家族特有的保守结构域并与其它植物的C4H蛋白有很高的相似性.系统进化分析表明CwC4H与高梁C4H蛋白亲缘关系较近.荧光定量PCR分析表明,鲜切荸荠黄化过程中CwC4H表达量快速上升,水杨酸处理抑制了鲜切荸荠的黄化和CwC4H的表达.