目的 研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因 10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG 10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后.方法 选取2017年1月～2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者.实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG 10 mRNA 及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素 Dl(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达.免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG 10蛋白表达.相关性采用Pearson相关分析.Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG 10表达组EC患者的预后差异.COX回归分析EC患者的预后影响因素.结果 EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG 10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652～54.588,均P＜0.05).癌组织中IGF2BP1(70.00％),PEG10(72.00％)蛋白阳性率高于癌旁组织(100％,9.00％),差异具有统计学意义(x2=75.000,82.363,均P＜0.05).EC 中 IGF2BP1 mRNA,PEG 10 mRNA 表达与 PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA 表达呈 正相关(r=0.562～0.625,均P＜0.05).EC 中 IGF2BP1 mRNA 与 PEG 10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P＜0.05).FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49％,87.50％),PEG 10(89.19％,90.63％)阳性率高于 FIGO 分期 Ⅰ～Ⅱ 期(60.32％,61.90％)、无淋巴结转移(61.77％,63.24％),差异具有统计学意义(x2=6.863～8.608,均P＜0.05).IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00％(49/70)低于阴性组的90.00％(27/30);PEG 10阳性组患者三年总体生存率为69.44％(50/72),低于阴性组的92.86％(26/28),差异具有统计学意义(Log-rank x2=4.133,5.491,P=0.042,0.019).FIGO 分期Ⅲ期(OR=1.449,95％CI:1.148～1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95％CI:1.124～1.850),IGF2BP1 阳性(OR=1.637,95％CI:1.239～2.163)及 PEG 10 阳性(OR=1.576,95％CI:1.136～1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P＜0.05).结论 EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物.

目的:观察体外受精-胚胎移植(IVF-ET)对子代胎盘父系表达基因 3(PEG3)、父系印记基因 L3MBTL1(L3MBTL1)、核转录因子-κB(NF-κB)表达水平影响及其临床意义.方法:选取 2021 年 6 月-2022 年 12 月在本院产科行 IVF-ET的剖宫产产妇及自然受孕剖宫产产妇各 45 例为 IVF-ET 组、对照组.胎盘娩出后收集两组胎盘组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot法测定胎盘组织中 PEG3、L3MBTL1、NF-κB mRNA及蛋白表达;比较不同新生儿结局 IVF-ET产妇胎盘组织中PEG3、L3MBTL1、NF-κB mRNA及蛋白表达;应用 Spearman相关系数分析胎盘组织中各指标表达与新生儿结局关系.结果:IVF-ET 组胎盘组织中 PEG3、L3MBTL1 mRNA 及蛋白表达均低于对照组,NF-κB mRNA 及蛋白表达高于对照组;IVF-ET 组中出现不良新生儿结局产妇胎盘组织中PEG3、L3MBTL1 mRNA及蛋白表达均低于无不良新生儿结局产妇,NF-κB mRNA及蛋白表达高于无不良新生儿结局产妇(均P＜0.05).Spearman相关系数分析显示,IVF-ET产妇胎盘组织中 PEG3、L3MBTL1 mRNA 及蛋白表达与新生儿结局呈正相关,NF-κB mRNA及蛋白表达与新生儿结局呈负相关(均P＜0.05).结论:IVF-ET 子代胎盘PEG3、L3MBTL1、NF-κB异常表达,且表达与不良新生儿结局有关.

目的 探讨饮酒对男性精子印记基因Peg3 DNA甲基化水平的影响.方法 分别于2015年3-4月和2016年3-4月,在山西省妇幼保健院和山西医学科学院山西大医院不孕不育男科门诊中进行婚前检查或孕前检查的就诊者中选取213名健康育龄期男性作为研究对象,分为饮酒组(n=83)和非饮酒组(n=130).通过结构式问卷,收集研究对象的行为习惯及生活方式等人口学信息资料.使用焦磷酸测序法检测精子印记基因Peg3 DNA甲基化水平.结果 饮酒组的人群吸烟率和精子中Peg3 DNA的甲基化率均高于非饮酒组,差异有统计学意义(P＜0.05);而2组人群年龄、水产品摄入情况、受教育水平和BMI间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).经多重线性逐步回归分析结果显示,排除混杂因素后,饮酒组男性精子Peg3 DNA甲基化水平较高(P＜0.05).结论 饮酒可能会导致男性精子印记基因Peg3 DNA甲基化水平升高.

目的 探讨十溴联苯醚(BDE-209)和双酚A(BPA)暴露对人胚胎干细胞系FY-hES-10体外早期神经分化中印记基因表达的影响.方法 利用添加小分子抑制剂的方法将FY-hES-10细胞系进行神经贴壁诱导,并在培养基中添加低剂量的BDE-209或/和BPA,每24 h换液1次,连续暴露11 d.收集诱导分化第11天的细胞检测nestin阳性率以及印记基因SNRPN、KCNK9、UBE3A和PEG10的表达水平.结果 BDE-209、BPA单独或联合暴露组nestin的阳性率明显低于对照组(P<0.05).印记基因SNRPN、KCNK9、UBE3A在BDE-209、BPA单独或联合暴露组表达均明显低于对照组,PEG10在BDE-2091 nmol/L和BDE-2091 nmol/L+BPA 1 nmol/L组表达明显低于对照组,而在BPA 1 nmol/L组中表达与对照组无明显区别.结论 低剂量BDE-209/BPA单独或联合暴露均有可能通过影响胚胎干细胞早期神经分化中印记基因表达从而产生神经发育毒性,BDE-209和BPA联合暴露可能加重神经发育毒性.

目的 通过检测父方表达印记基因PEG10 DNA在胎儿生长受限(FGR)患者胎盘组织甲基化水平,探索FGR是否与其胎盘中印记基因的甲基化程度相关.方法 采用前瞻性研究,收集2014年1月至2017年1月在上海市第一人民医院宝山分院妇产科住院分娩的FGR者56例(研究组)和同期正常单胎晚孕分娩者56例(对照组),采用亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测研究组和对照组胎盘组织的PEG10 DNA甲基化水平,分析其甲基化水平与FGR的临床病理关系.结果 FGR胎盘组织印记基因PEG10表现为异常甲基化水平,与对照组相比,研究组胎盘组织印记基因PEG10 DNA甲基化水平在CPG岛1无明显差异,而在CPG岛2及CPG岛3明显高于对照组(t值分别为94.97,7.16,均P<0.05),尤其以CPG岛2最为明显(研究组表达为0.544±0.027,对照组表达为0.152±0.015).结论 胎盘组织父方表达的印记基因的DNA甲基化水平可能是导致FGR发病的原因之一.

目的 观察不同人口学特征的男性精子印记基因甲基化水平的分布情况.方法 收集440例进行孕前检查已婚男性的一般资料和精液样本.提取精子DNA并进行亚硫酸盐修饰,采用焦磷酸测序法对精子H19、Peg3、Meg3基因甲基化差异区(DMR)CpGs位点的甲基化水平进行检测.比较不同年龄、BMI、吸烟和饮酒情况者精子印记基因的甲基化水平.结果 不同年龄、BMI、饮酒情况者H19、Peg3、Meg3基因DMR各CpG位点甲基化水平差异无统计学意义.吸烟者H19基因的CpG2、CpG7位点和Meg3基因的CpG2位点甲基化水平高于非吸烟者(P均＜0.05).结论 不同年龄、BMI和饮酒情况的男性精子H19、Peg3、Meg3基因甲基化水平无统计学差异;有吸烟习惯的男性精子H19基因的CpG2、CpG7位点和Meg3基因的CpG2位点甲基化水平高于非吸烟者.

目的:探讨胎停育发生的父源性表观遗传学机制.方法:选取2015年3-4月和2016年3-4月于山西省妇幼保健院生殖中心进行孕前检查的已婚男性70例作为研究对象,收集其人口学信息和精液样本,并用焦磷酸测序法检测精子印记基因H19、Peg3和Meg3甲基化水平,并以此为基线追综其生育结局.其中胎停育35例(胎停育组),根据年龄、BMI、吸烟、饮酒、受孕方式进行1∶1配对选择对照组35例.用Wilcoxon符号秩和检验比较两组精子DNA印记基因H19、Peg3和Meg3甲基化水平和各CpG位点甲基化水平.结果:胎停育组与对照组精子DNA印记基因H19、Peg3和Meg3平均甲基化率没有差异(P＞0.05),进一步比较各CpG位点,去掉极端值(n=4)胎停育组Meg3的甲基化率[0.0(0.0,1.7)]低于对照组[1.9(0.0,3.9)](P＜0.05),而其余CpG位点两组无差异(P＞0.05).结论:精子印记基因Meg3的CpG3位点甲基化水平的降低可能增加胎停育发生风险.

背景 辅助生殖技术是治疗不孕症的主要手段,全球通过辅助生殖技术出生的婴儿已经超过800万.辅助生殖技术存在多种不良妊娠结局,影响着子代近期和远期的健康.目的 探讨控制性超促排卵对小鼠胎盘功能基因表达及胎儿体质量的影响.方法 将自然妊娠小鼠囊胚移植入自然交配假孕鼠(NC组,n=8)及超促排卵后假孕鼠(COH组,n=8)子宫内,以消除控制性超促排卵对卵母细胞、体外受精和体外胚胎培养等的影响,单独研究子宫内环境对胎盘功能基因及胎儿体质量的影响,并于妊娠18.5 d取胎鼠及胎盘称重,采用q-PCR技术检测胎盘生长相关印记基因的表达,采用Luminex液相悬浮芯片技术检测胎盘生长相关细胞因子变化.结果 与NC组比较,控制性超促排卵组小鼠胎鼠体质量降低,胎盘重量降低,胎盘效率降低(P<0.05).控制性超促排卵组小鼠胎盘生长相关印记基因Igf-2、Peg3、H19、Mest、Cdkn1c、Mash2、Cd81、Plagl1、Zim1、Ube3a表达水平降低(P<0.05).控制性超促排卵组小鼠胎盘生长相关细胞因子VEGF、PIGF-2、PDGF-BB、MMP-2、MMP-9、VEGFR2表达水平降低(P<0.05).结论 控制性超促排卵可以降低小鼠胎盘生长相关印记基因的表达水平,降低胎盘生长相关细胞因子表达水平,降低胎鼠体质量.

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后新鲜胚胎移植(ET)与冷冻胚胎移植(FET)不同移植周期对胎盘中印迹基因PEG10和L3MBTL1表达的影响.方法:收集2019年6月至2021年3月在郑州大学第三附属医院行IVF-ET患者分娩的胎盘.根据患者移植周期不同将收集到的胎盘分为两组:新鲜胚胎移植组(ET组,16例)与冷冻胚胎移植组(FET组,16例).比较两组患者的新生儿出生体重,采用实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法和免疫组化法检测胎盘中印记基因PEG10和L3 MBTLI的表达.结果:FET组与ET组的孕妇年龄、孕周、孕前BMI、孕期增重、胎盘重量及新生儿出生体重方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05).FET组的新生儿出生体重较ET组有增加趋势[(3013.75±388.928)g vs(2871.25±459.273)g].FET组胎盘组织中PEG10 mRNA和蛋白表达[4.554±1.992、106.0965±21.6540]明显高于ET组[1.255±0.4781、77.0741±24.9101],差异有统计学意义(P<0.000,P=0.002),而两组间L3MBTL1表达无显著差异(P>0.05).结论:FET患者子宫内膜更接近生理状态,胎盘中PEG10表达较ET患者增加,进而促进胎儿发育.

目的 初步研究父系表达印记基因PEG10低表达对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建4组PEG10干扰载体[si-898、si-1854、si-1951及对照(si-NC)],然后转染到HTR-8/Svneo细胞株并进体外培养,si-NC组为对照组.流式细胞术检测HTR-8/Svneo细胞的细胞周期和细胞凋亡,qRT-PCR检测Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax及Cyclin D1 mRNA的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力.结果 与对照组比较,转染3组siRNA片段均能显著抑制PEG10基因的表达(P<0.05),其中si-898、si-1854抑制作用更显著(P<0.01).转染si-898或si-1854的HTR-8/Svneo细胞Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax mRNA的表达显著升高(P<0.01),而Cyclin D1 mRNA的表达显著降低(P<0.05),并且细胞凋亡率也显著高于对照组(P<0.05).MTT法检测细胞增殖活力显示,与对照组相比,干扰PEG10基因后细胞在48 h和72 h的增殖活力也显著降低(P<0.05).流式细胞术检测显示,干扰PEG10基因后细胞周期阻滞在G1期.结论 干扰PEG10基因能诱导人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞凋亡,降低细胞增殖活力,阻止细胞周期从G1期到S期的转化进程,导致细胞周期阻滞.