目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制.方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida 3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只.以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 POI 的标志物骨形态发生蛋白 15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平.通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型.结果:①造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E2水平降低,表明模型构建成功.②相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P＜0.05).③与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P＜0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P＜0.05).@pZP3组体内Treg细胞数量降低(P＜0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P＜0.000 1).pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P＜0.05).⑤pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P＜0.000 1),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P＜0.000 1).测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调.结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,hUC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用.

卵泡膜细胞不仅为卵泡的完整性提供支持，还在卵泡发育、闭锁及优势卵泡选择和排卵中发挥至关重要的作用。尽管卵泡膜细胞在女性生殖过程中起到重要作用，但目前针对该类细胞发育、起源及其干细胞的相关研究非常稀少。卵泡膜干细胞的研究不仅能让我们深入了解卵泡膜细胞的募集、生长和分化过程，也能使我们尝试通过卵泡膜干细胞制备高活性的卵泡膜细胞，这对人类卵巢疾病的诊断、预防和治疗以及再生医学都具有重要的临床意义。本文就卵泡膜细胞功能、来源以及卵泡膜干细胞研究进展作一综述，同时也简单介绍单细胞测序技术在卵巢干细胞研究领域中的应用，为进一步探索卵巢卵泡发育机制、病理改变和疾病治疗等方面提供参考。

目的:探索人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells，hAMSCs）对自身免疫性早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency，POI）小鼠卵巢功能和子宫内膜容受性的影响。方法:使用透明带3多肽-弗氏免疫佐剂诱导小鼠自身免疫性POI，一次性尾静脉注射移植hAMSCs 1×10 6细胞/只，将动物分为正常组（ n=10）、模型组（ n=15）、hAMSCs组（ n=15），阴道涂片监测动情周期，酶联免疫法检测血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hornome，FSH）、雌二醇与抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）含量，HE染色观察卵巢和子宫病理组织学变化，免疫组织化学检测子宫同源框A10（homeobox A10，HOXA10）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和FSH受体（FSH receptor，FSHR）蛋白表达，综合评价子宫内膜容受性。 结果:hAMSCs移植6周，hAMSCs组动情周期异常率［40.00%（6/15）］低于模型组［86.67%（13/15）， P=0.021］。与模型组血清FSH［（10.239±1.091）μg/L］、雌二醇［（103.325±4.952）ng/L］和AMH［（1.133±0.494）μg/L］水平相比，hAMSCs组FSH水平［（7.664±0.735）μg/L］明显降低（ P<0.001），雌二醇［（126.883±23.370）ng/L］和AMH［（2.204±0.453）μg/L］水平均明显升高（ P=0.015， P<0.001）。与模型组不同，hAMSCs组卵巢指数、子宫指数增高；卵巢组织不同发育阶段的卵泡数增加，间质纤维化和闭锁卵泡少见，子宫壁与子宫内膜增厚，腺体数量和体积增加。HOXA10吸光度（absorbance， A）值hAMSCs组（5.90±1.94）高于模型组（2.79±1.27， P=0.029），TNF-α A值hAMSCs组（3.83±1.23）低于模型组（6.26±0.96， P=0.002）；FSHR A值hAMSCs组（3.61±1.66）与模型组（2.74±0.22）差异无统计学意义（ P>0.05），但模型组低于正常组（4.13±0.54， P=0.006）。 结论:移植hAMSCs在恢复自身免疫性POI小鼠卵巢功能的同时，可明显改善子宫内膜容受性，有助于提高生育能力。

目的:探讨重组胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对 MEX3C基因敲除小鼠卵巢发育的影响。 方法:采用聚合酶链式反应（PCR）法鉴定4周龄FVB（SPF级）小鼠基因型，将鉴定出的雌性小鼠随机分为4组（每组6只）：野生型组、 MEX3C基因敲除小鼠纯合子（简称纯合子组）、纯合子+IGF-1处理组、处理对照组。比较IGF-1注射前后各组小鼠体质量及卵巢湿重变化；酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中雌二醇水平；HE染色观察卵巢形态结构；免疫组织化学法和Western blotting法测定MEX3C、重组胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）和p-AKT （Ser473）蛋白表达。 结果:IGF-1注射前，纯合子组体质量［（6.33±0.31）g］明显轻于野生型组［（15.20±0.35）g］，差异有统计学意义（ P<0.001）。ELISA结果显示，与处理对照组［（8.124 8±0.847 7）ng/L］相比，纯合子+IGF-1处理组［（17.245 3±0.073 1）ng/L］血清雌二醇水平显著较高，差异有统计学意义（ P<0.001）。HE染色结果显示，与处理对照组相比，纯合子+IGF-1处理组中原始卵泡数（19.83±2.94）和初级卵泡数（15.50±2.69）增多，且闭锁卵泡数（7.17±1.42）减少，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。Western blotting结果证实，与处理对照组相比，纯合子+IGF-1处理组IGF-1R和p-AKT蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（ P=0.014 1， P=0.002 5）。 结论:IGF-1促进 MEX3C基因敲除小鼠卵巢卵泡发育，其机制是通过上调IGF-1R和p-AKT水平，提高血清雌激素水平促进卵泡发育。

肿瘤患者放、化疗治疗可能会导致卵巢功能紊乱、生育能力丧失，如何保护年轻肿瘤患者的生育力，提高愈后生活质量，是肿瘤治疗者面临的问题。卵巢组织冻存与移植可以恢复患者的生殖内分泌功能，是保护年轻肿瘤患者生育力的重要方法之一，为不适用于卵母细胞冻存和胚胎冻存患者的生育力保存提供了新的选择。近年来，有越来越多的健康婴儿借助卵巢组织移植技术出生，但该技术仍存在移植初期卵泡闭锁、再次引入肿瘤细胞的风险等问题。本文就卵巢组织冻存与移植技术的发展现状进行综述。

目的:研究脐带间充质干细胞改善卵巢早衰家兔卵巢功能的潜在机制。方法:将10只家兔按随机数表法分为治疗组和模型组各5只，均采用腹腔注射环磷酸酰胺（50 mg·kg -1·d -1，连续2 d）构建卵巢早衰模型。造模1周后，治疗组予以耳缘静脉注射人脐带间充质干细胞（2 mL/d，连续3 d），模型组予以注射等量无菌水。第28日后采集两组家兔卵巢组织标本，通过苏木精-伊红染色法观察两组家兔卵巢组织形态结构，并采用蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR及免疫组织化学技术检测两组家兔卵巢组织内基质金属蛋白酶组织抑制物1（tissue inhibitor of metalloproteinases 1，TIMP1）、纤连蛋白（fibronectin，FN）、纤维形成相关因子基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP9）在蛋白及mRNA水平上的表达。 结果:①模型组家兔卵巢组织内原始卵泡数量少，闭锁卵泡多，各级卵泡颗粒层排列紊乱，卵细胞核出现固缩，发生凋亡，卵巢间质出现纤维化；而治疗组家兔卵巢组织内原始、初级卵泡数量多，闭锁卵泡少，各级卵泡颗粒细胞排列规则。②与模型组相比较，治疗组家兔卵巢组织内TIMP1蛋白（0.546±0.021比0.820±0.085）和FN蛋白表达量增多（0.221±0.065比0.516±0.064）（ P均<0.001），而MMP9蛋白表达量减少（0.504±0.049比0.204±0.066， P<0.001）。③与模型组相比较，治疗组家兔卵巢组织内 TIMP1 mRNA（0.217±0.024比0.470±0.039）和 FN mRNA的表达量增多（0.039±0.006比0.125±0.012， P均<0.001），而 MMP9 mRNA的表达量减少（0.009±0.000比0.002±0.000， P<0.001）。④TIMP1和FN主要表达在颗粒细胞和卵细胞膜，TIMP1还表达在卵巢间质组织，治疗组TIMP1和FN的表达多于模型组，差异均具有统计学意义（ P<0.001， P=0.005）。MMP9主要表达在颗粒细胞和卵巢间质组织，治疗组MMP9的表达少于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.001）。 结论:脐带间充质干细胞能够通过调节卵巢组织内TIMP1、FN和MMP9水平来改善卵巢功能。

卵巢储备功能减退 （DOR） 包括生殖功能减退和内分泌功能减退，最终导致女性生育力下降。内质网是细胞内重要的细胞器，参与蛋白的合成折叠与分泌、脂质代谢、类固醇激素合成、Ca 2+储存等细胞内活动。细胞内外环境的变化，如氧化应激等皆有可能扰乱内质网稳态，导致内质网未折叠蛋白反应 (UPR）。初期UPR有助于维持机体细胞存活，但刺激强度过高或时间过长，则会导致细胞凋亡。越来越多的研究证实，内质网应激参与DOR发生的病理机制，与卵泡闭锁、卵巢纤维化增加、激素合成功能下降等过程密切相关。本文将综述DOR发生发展过程中的内质网应激机制及其研究进展。

目的:探讨模拟海拔6 500 m低氧环境对BALB/c雌性小鼠生殖功能的影响。方法:将50只6周龄BALB/c雌鼠按体质量随机区组法分为对照组和高原组，其中高原组又分为高原3 d组、高原5 d组、高原10 d组及高原15 d组，每组10只，高原组放置于低压低氧舱模拟海拔6 500 m高原环境，每天光照/黑暗比为12 h∶12 h，然后取卵巢测定卵巢指数，免疫组织化学法（immunohistochemistry，IHC）、蛋白免疫印迹法（Western blotting，WB）测定卵巢组织中低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）的表达，苏木素-伊红（hematoxylion and eosin，HE）染色评估卵巢卵泡情况，酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定血清生殖激素水平，了解模拟高原低氧环境对雌性小鼠生殖功能的影响。结果:①生殖激素指标比较：与对照组的抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）［（3 417.67±316.02）μg/L］相比，高原各组AMH水平均降低，其中高原10 d组［（2 643.50±210.01）μg/L］、高原5 d组［（2 195.50±160.88）μg/L］、高原15 d组［（2 174.40±709.23）μg/L］差异均有统计学意义（均 P<0.05）。与对照组卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）［（68.02±2.80）U/L］相比，高原5 d组、高原10 d组、高原15 d组FSH水平均有下降，其中高原5 d组［（64.20±4.11）U/L］、高原10 d组［（59.05±5.16）U/L］、高原15 d组［（57.46±3.58）U/L］差异均有统计学意义（均 P<0.05）。与对照组黄体生成素［luteinizing hormone，LH；（6.71±1.01）U/L］相比，高原5 d组、高原10 d组、高原15 d组LH水平均有下降，其中高原10 d组［（5.18±0.30）U/L］、高原15 d组［（4.86±0.53）U/L］差异有统计学意义（ P=0.005， P<0.001）。与对照组雌二醇［（105.56±5.43）pmol/L］相比，高原5 d组［（90.92±5.08）pmol/L］、高原15 d组［（81.46±3.96）pmol/L］差异有统计学意义（ P=0.038， P<0.001）。与对照组孕酮［（13.63±0.69）μg/L］相比，高原各组孕酮值均下降，高原3 d组［（11.45±0.65）μg/L］、高原5 d组［（8.86±0.72）μg/L］、高原10 d组［（9.56±0.53）μg/L］、高原15 d组［（9.29±0.64）μg/L］差异均有统计学意义（均 P<0.001）。②卵巢组织学改变：小鼠卵巢HE染色显示，与对照组相比，高原组卵巢各级生长卵泡数目减少，闭锁卵泡增多，颗粒细胞凋亡，可见到静脉血管淤血扩张。③HIF-1α的表达：IHC检测显示，随低氧时间延长，表达HIF-1α的阳性细胞比率增加，WB检测显示，高原各组较对照组HIF-1α蛋白表达升高（均 P<0.001）。④卵巢指数比较：与对照组（0.408±0.083）相比，高原各组卵巢指数均降低，高原3 d组、高原5 d组、高原10 d组和高原15 d组分别为0.271±0.087、0.114±0.035、0.076±0.052、0.109±0.026，5组间比较差异均有统计学意义（均 P<0.001）。 结论:暴露于模拟海拔6 500 m高原低氧环境使得卵巢组织缺氧，对雌性小鼠生育力造成一定的不良影响，为下一步进行女性生育力保护相关研究提供了理论基础。

目的:探讨连续重复给予含左炔诺孕酮（levonorgestrel，LNG）紧急避孕药（emergency contraception pills，ECPs）对雌性大鼠生育力及其F1代仔鼠健康的影响。方法:成年SPF级雌性大鼠于每个动情周期连续给予3次LNG-ECPs，分别给予3个（P-3）、6个（P-6）和12个（P-12）动情周期。雌性大鼠每个给药时程下，采用Excel产生随机数按体质量分层随机分为2组，分别为LNG-ECPs组和溶媒对照组，分别灌胃给予0.12 mg/kg LNG-ECPs和等体积溶媒。各组于末次给药后4 h分别取1/2动物（12~18只）进行解剖（6~9只）和交配（6~9只）；剩余1/2动物（12~18只）于停药恢复3个动情周期后再分别进行解剖（6~9只）和交配（6~9只），计算脏器系数。采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测雌性大鼠血清中卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（lutenizing hormone，LH）、雌激素、孕激素、睾酮、抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）以及游离甲状腺激素3（free thyroid hormone，fT3）的水平。雌性大鼠卵巢组织切片苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色后进行卵泡计数。记录LNG-ECPs给药结束和停药恢复期雌性大鼠妊娠率及窝仔数，测定F1代仔鼠生长指数以及主动和被动运动能力等指标。取P-12大鼠卵巢组织进行转录组学测序，建立LNG-ECPs致卵巢差异表达基因谱，分析LNG-ECPs致卵巢损伤的差异基因，并进行基因本体（gene ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。结果:①连续给予3个和6个动情周期后，LNG-ECPs组雌鼠的血清激素水平和生育力与溶媒对照组相比，差异均无统计学意义（均 P>0.05）；F1代仔鼠生长指数和行为学结果与溶媒对照组仔鼠相比差异均无统计学意义（均 P>0.05）。②连续给予12个动情周期后，与溶媒对照组相比，LNG-ECPs组大鼠血清中FSH［（0.21±0.17）U/L］、LH［（0.27±0.08）U/L］和孕激素［（0.68±0.23）μg/L］水平显著低于溶媒对照组［（1.00±0.82）U/L， P=0.043；（1.00±0.50）U/L， P=0.006；（1.00±0.20）μg/L， P=0.027］，雌二醇［（2.24±1.03）μg/L］和睾酮［（1.25±0.25）μg/L］水平明显高于溶媒对照组［（1.00±0.35）μg/L， P=0.019；（1.00±0.07）μg/L， P=0.044］；卵巢中原始卵泡数量（4.88±2.36）显著少于溶媒对照组（16.13±9.36， P=0.005），闭锁卵泡数量（24.38±5.01）显著高于溶媒对照组（19.13±2.30， P=0.018）；LNG-ECPs组中F1代仔鼠负重游泳时间［（157.13±32.29）s］明显低于溶媒对照组［（198.06±40.01）s， P=0.003］。停药恢复3个动情周期后，LNG-ECPs可造成大鼠血清中FSH［（2.48±1.18）U/L］、LH［（1.60±0.41）U/L］、睾酮［（1.37±0.23）μg/L］及FSH/LH值（1.61±0.41）显著高于溶媒对照组［（1.00±0.67）U/L， P=0.024；（1.00±0.27）U/L， P=0.014；（1.00±0.18）μg/L， P=0.011；1.00±0.49， P=0.042］，且雌激素水平［（0.49±0.15）μg/L］和AMH水平［（0.79±0.15）μg/L］显著低于溶媒对照组［（1.00±0.37）μg/L， P=0.011；（1.00±0.10）μg/L， P=0.016］，同时，大鼠卵巢中原始卵泡数量（6.25±5.06）仍显著少于溶媒对照组（12.00±5.56， P=0.048）；F1代仔鼠在旷场中的运动总距离［（89.85±36.98）m］以及负重游泳时长［（112.00±29.52）s］均显著低于溶媒对照组［（147.55±23.13）m， P<0.001；（137.69±25.85）s， P=0.014］。③转录组测序结果表明，与溶媒对照组相比，LNG-ECPs组雌性大鼠卵巢组织中存在 Cd5、 Cxcr1、 Lexm、 Fga、 Mybphl和 Gstm5等显著差异表达的基因，参与萜类骨架生物合成、卵巢类固醇生成和皮质醇的合成与分泌等类固醇激素合成相关过程，还涉及碳代谢、丁酸甲酯代谢和半胱氨酸等物质代谢过程，以及细胞因子-细胞因子受体相互作用、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用等免疫调节过程。 结论:在雌性大鼠中，短期重复（<12个周期）给予LNG-ECPs对雌鼠生育力及其F1代仔鼠生长发育和行为学未见明显影响；而长期重复（12个周期）给予LNG-ECPs会导致卵巢功能损伤，并会对F1代仔鼠的健康产生负面影响，停药恢复3个动情周期后仍未见明显改善。

目的:探讨慢性不完全睡眠剥夺（sleep deprivation，SD）对小鼠卵巢储备功能的影响及其可能作用机制。方法:16只SPF级7~8周龄雌性C57BL/6小鼠，适应性饲养1周后，简单随机化分为对照组和SD组，每组8只，其中SD组小鼠每天7∶00~10∶00采用剥夺杆进行慢性不完全SD，共计40 d。在实验开始前与结束前的9 d内每天进行阴道脱落细胞涂片检查，记录动情周期。于第40天通过酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒检测血清雌二醇、孕酮、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、促黄体生成素（luteinizing hormone，LH）和褪黑素（melatonin，MT）水平。取卵巢，计算卵巢指数，并通过切片苏木精-伊红染色计数原始卵泡数量。免疫组织化学方法检测灌注取脑后小鼠视交叉上核（suprachiasmatic nucleus，SCN）脑区神经元c-Fos表达情况。结果:相比于对照组，SD组小鼠动情周期出现紊乱趋势。SD组小鼠雌二醇［（20.19±3.67）ng/L］、孕酮［（2.88±0.53）μg/L］、FSH［（13.42±2.36）U/L］水平明显低于对照组小鼠［（24.66±2.15）ng/L， P=0.010；（3.43±0.49）μg/L， P=0.049；（17.01±1.49）U/L， P=0.003］。SD组小鼠LH和MT水平低于对照组小鼠，但差异均无统计学意义（均 P>0.05）。SD组小鼠卵巢原始卵泡数量与对照组小鼠相比，差异无统计学意义（ P>0.05），但是SD组卵母细胞形态不佳，颗粒细胞排列紊乱，闭锁卵泡数量减少，卵巢纤维化明显。免疫组织化学染色观察到SD组小鼠SCN区神经元c-Fos蛋白表达上调。 结论:连续40 d每天进行3 h SD后小鼠卵巢储备功能受损，可能与SCN过度激活有关。