骨关节炎(OA)尚缺乏有效的治疗方式.众多研究表明,金属蛋白酶家族在OA发病机制中起着重要作用,或许能在OA治疗中发挥巨大作用.其中去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)具有巨大潜力,其相关靶向药物已在临床上应用于其他疾病的治疗或者进行临床试验,如治疗阿尔茨海默病及免疫抑制.本文对ADAM10及其介导的Notch信号通路在OA发病机制中的研究进展进行综述,为ADAM10相关药物在OA治疗上的应用提供初步理论基础.

目的:基于"柔肝养筋"理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型小鼠膝关节软骨的影响.方法:以超速离心法从3月龄(年轻)和22月龄(老年)C57BL/6雄性小鼠肝脏提取外泌体.将48只7周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组12只.KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组小鼠采用前交叉韧带横断术进行KOA造模,Sham组小鼠接受手术但不离断前交叉韧带.术后14 d开始,向Young-EVs组和Aged-EVs组小鼠膝关节腔分别注射10 μL年轻和老年小鼠肝脏来源外泌体,每周2次,连续注射4周;Sham组和KOA组用同样方法向膝关节腔注射10 μI.PBS溶液.外泌体干预结束后,对各组小鼠造模侧膝关节进行X线检查;苏木精-伊红染色和番红0-固绿染色后进行组织病理学观察,并采用国际骨关节炎研究协会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)骨关节炎软骨组织病理学评价系统及Mankin病理评分系统评价小鼠软骨退变程度;免疫组化法检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ,COL Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)13和一种具有血小板反应蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)5表达量.结果:①小鼠膝关节X线检查结果.Sham组小鼠膝关节关节间隙正常,关节面平整光滑,软骨完整,关节边缘无骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为0级;KOA组小鼠膝关节间隙未见明显狭窄,关节面粗糙,软骨出现部分缺损,关节边缘可见明显骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅱ级;Young-EVs组小鼠膝关节间隙轻微变窄,关节表面稍有粗糙表现,软骨缺损较KOA组减少,关节边缘可见轻微骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅰ级;Aged-EVs组小鼠膝关节间隙、关节表面粗糙程度、软骨缺损情况、关节内游离体数量较KOA组更为严重,Kellgren-Lawrence分级为Ⅲ级.②小鼠膝关节软骨组织病理学观察结果.4组小鼠膝关节软骨OARSI评分和Mankin评分组间总体比较,差异均有统计学意义[OARSI评分:(0.417± 0.376)分,(4.500±0.632)分,(2.417±0.492)分,(5.417±0.492)分,F=116.800,P=0.000;Mankin 评分:(1.083±0.665)分,(7.250±0.880)分,(3.583±0.917)分,(8.833±0.683)分,F=117.100,P=0.000].KOA 组、Young-EVs 组及 Aged-EVs 组的OARSI 评分和 Mankin 评分均高于 Sham 组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs 组的OARSI评分和Mankin评分均低于KOA组(P=0.000,P=0.000);Aged-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均高于KOA组、Young-EVs 组(P=0.025,P=0.000;P=0.015,P=0.000).③小鼠膝关节软骨组织免疫组织化学检测结果.4组小鼠膝关节软骨中COLⅡ和ACAN阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[COLⅡ:(40.050±2.324)％,(26.083±1.119)％,(23.317±2.599)％,(16.717±2.479)％,F=118.500,P=0.000;ACAN:(51.500±3.191)％,(17.700±3.415)％,(19.383± 3.924)％,(12.300±1.908)％,F=185.500,P=0.000].KOA 组、Young-EVs 组及 Aged-EVs 组的 COL Ⅱ 和 ACAN 阳性表达面积比均低于 Sham 组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs 组与 KOA 组 COLⅡ、ACAN 阳性表达面积比的组间差异均无统计学意义(P=0.167,P=0.799);Aged-EVs组的COL Ⅱ和ACAN阳性表达面积比均低于KOA组、Young-EVs组(P=0.000,P=0.000;P=0.039,P=0.005).4组MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[MMP13:(11.733±2.191)％,(46.150±6.237)％,(34.417±5.027)％,(57.233±4.049)％,F=106.600,P=0.000;ADAMTS5:(7.950±1.344)％,(30.533±6.184)％,(22.083±3.418)％,(39.317±5.606)％,F=51.450,P=0.000].KOA 组、Young-EVs 组及 Aged-EVs 组的 MMP13 和 ADAMTS5 阳性表达面积比均高于 Sham 组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs 组的 MMP13 和 ADAMTS5 阳性表达面积比均低于 KOA 组(P=0.002,P=0.021);Aged-EVs 组的 MMP13 和 ADAMTS5 阳性表达面积比均高于 KOA 组、Young-EVs 组(P=0.003,P=0.000;P=0.016,P=0.000).结论:小鼠肝脏来源外泌体可能参与软骨细胞合成及分解代谢反应;其中老年小鼠肝脏来源外泌体可加速细胞外基质降解、减少聚集蛋白聚糖合成,加剧KOA小鼠软骨退变;而年轻小鼠肝脏来源外泌体可抑制软骨细胞外基质降解,保护KOA小鼠软骨.

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性加重的神经系统退行性疾病,特征是学习记忆功能下降、多个认知领域受损,最终无法执行日常任务.越来越多的证据表明,靶向Aβ仍是目前AD诊断和治疗的重要策略.去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)作为淀粉样蛋白前体蛋白切割过程中的关键分泌酶,不仅能减少Aβ的产生,还影响AD的病理,包括减少tau蛋白过度磷酸化、维持正常的突触功能、促进海马神经发生和神经元网络的稳态.ADAM10可能成为早期和准确诊断AD的生物标志物.本文对ADAM10性质及其在AD发病机制中的作用进行综述,并讨论ADAM10作为治疗AD靶点的潜力,以期为AD的深入研究和治疗提供理论基础和思路.

目的 研究苓桂术甘汤对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜及去整合素金属蛋白酶 17(ADAM17)/表皮生长因子受体(EGFR)通路的影响.方法 取 63 只雄性SD大鼠,随机选 10 只作为正常对照组,其余大鼠采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常法建立慢性萎缩性胃炎模型.将造模成功大鼠随机分为萎缩性胃炎组,维酶素组及苓桂术甘汤低、中、高剂量组,每组10 只.苓桂术甘汤低、中、高剂量组分别按照1.8 g/kg、3.6 g/kg、7.2 g/kg灌胃给予大鼠苓桂术甘汤,维酶素组按照0.2 g/kg灌胃给予维酶素,萎缩性胃炎组及正常对照组灌胃给予生理盐水,均 1 次/d,连续 30 d.测定造模完成后及灌胃结束后大鼠体重,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)水平及胃黏膜组织中一氧化氮(NO)、P选择素(SELP)、白细胞内皮细胞黏附分子-1(LECAM-1)、内皮素-1(ET-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,酸碱滴定法测定胃液酸度,比色法测定胃蛋白酶活性,HE染色法观察胃组织病理学形态,RT-PCR法测定胃黏膜组织中表皮生长因子(EGF)、EGFR、ADAM17 mRNA 表达情况,Western blot 法测定胃黏膜组织中 EGF、EGFR、AD-AM17 蛋白表达情况.结果 与正常对照组比较,萎缩性胃炎组大鼠体重、血清GAS及IL-10 水平、胃液酸度及胃蛋白酶活性、胃黏膜组织中SOD及GSH-Px含量均明显降低(P均<0.05);血清MTL、TNF-α、CRP、IL-1β 水平,胃黏膜组织中 NO、SELP、LECAM-1、ET-1、MDA 含量和EGF、EGFR、ADAM17 mRNA及蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);胃黏膜组织病理性改变.与萎缩性胃炎组比较,苓桂术甘汤各组及维酶素组大鼠体重、血清GAS及IL-10 水平、胃液酸度及胃蛋白酶活性、胃黏膜组织中SOD及GSH-Px含量均明显升高(P均<0.05);血清MTL、TNF-α、CRP、IL-1β水平,胃黏膜组织中NO、SELP、LECAM-1、ET-1、MDA含量和EGF、EGFR、AD-AM17 mRNA及蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);胃黏膜病理改变明显改善;苓桂术甘汤各组随着苓桂术甘汤剂量的增加,各项指标变化更明显.结论 苓桂术甘汤能够显著减轻慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜组织炎症损伤,促进胃功能的恢复,调节胃液酸度及胃蛋白酶活性,其机制可能与调节ADAM17/EGFR通路有关.

目的 研究去整合素-金属蛋白酶(deintegrin metalloproteinase,ADAM)17、Notch1及α-平滑肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在子宫内膜异位症(EMs)组织中的表达,及其与子宫内膜异位症的临床病理特征之间的相关性.方法 选取2019年10月至2020年10月潍坊医学院附属医院收治的EMs病人异位内膜40例(异位内膜组)、在位内膜25例(在位内膜组),正常内膜25例作为对照组.采用免疫组化法及半定量分析法分别检测ADAM17、Notch1、α-SMA在三组中的表达.分析异位内膜组织中ADAM17、Notch1、α-SMA的表达与病理特征的关系.采用Pearson相关分析分析ADAM17、Notch1、α-SMA在三组中的表达的相关性.结果 ADAM17、Notch1、α-SMA在异位内膜组中的表达高于在位内膜组(4.77±1.35比3.24±1.09,4.40±1.24比3.44±0.96,4.42±1.30比3.36±0.95),差异有统计学意义(P<0.05),在位内膜组的表达高于正常内膜组(2.36±1.22、2.24±1.01、2.16±1.028),差异有统计学意义(P<0.05).异位内膜组中ADAM17、Notch1、α-SMA在Ⅲ～Ⅳ期中的表达高于Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05).EMs病人异位内膜组中ADAM17、Notch1、α-SMA的表达与年龄及囊肿大小差异无统计学意义(P>0.05).ADAM17、Notch1、α-SMA在异位内膜中的表达两两之间具有正相关性(P<0.05).结论 ADAM17、Notch1、α-SMA在EMs发生及发展中起重要作用,ADAM17可能通过Notch通路参与EMs的纤维化发生并调控EMs的纤维化严重程度.

目的 探讨西红花苷对椎间盘退变的治疗效果和作用机制.方法 将收集的人类髓核组织Pfirrmann II级样本分成两部分,一部分提取髓核细胞并培养,根据培养基的成分,将髓核细胞分为4 组,包括空白对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激组、西红花苷低浓度治疗组(10 μg/mL)以及西红花苷高浓度治疗组(40 μg/mL).培养24h后,采用实时定量PCR检测4 组髓核细胞中炎症因子和代谢标志物的mRNA表达水平.培养0、15、30 min和48h后,采用Western blotting 检测 4 组髓核细胞中炎症因子、代谢标志物、凋亡标志物以及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)信号通路关键蛋白 p-P65 的蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因检测西红花苷对NF-κB信号通路的作用效果.另一部分髓核组织进行离体培养,根据培养基不同,分为空白对照组、TNF-α刺激组以及西红花苷治疗组(40 μg/mL).使用免疫组化检测各组髓核组织中炎症因子以及细胞代谢标物的蛋白表达水平.结果 实时定量 PCR检测与Western blotting 检测结果显示,与空白对照组相比,TNF-α刺激组髓核细胞的炎症反应及细胞外基质降解加剧,促炎因子诱导型一氧化氮合酶、环氧化酶-2、去整合素和金属蛋白酶-5及基质金属蛋白酶 13 的基因转录与蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而软骨可聚蛋白多糖与II型胶原蛋白的基因转录与蛋白表达水平明显下降(P<0.05).同时Western blotting 检测结果也显示,与空白对照组相比,TNF-α刺激组髓核细胞的抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达水平明显下降(P<0.001),而促凋亡因子中的Bcl-2相关X蛋白(P=0.004)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的蛋白表达水平明显升高(P= 0.005).而在10 μg/mL和 40 μg/mL的西红花苷治疗组中上述由 TNF-α 所诱导的变化均被明显抑制(P<0.05).此外,在NF-κB信号通路的实验中,与空白对照组相比,TNF-α刺激组中p-P65 的蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而在10 μg/mL和 40 μg/mL的西红花苷治疗组中p-P65 的蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),并且在治疗时长 15、30 min的西红花苷组中p-P65 的蛋白表达水平均明显下降(P<0.05).同时在双荧光素酶报告基因检测中,相较于空白组,TNF-α 刺激组的荧光强度增加(P<0.001),而经过西红花苷治疗后,荧光强度明显下降(P= 0.006).结论 西红花苷可抑制髓核细胞的炎症反应、细胞外基质降解及细胞凋亡,NF-κB信号通路在西红花苷抑制椎间盘退变中发挥重要作用.

目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用.本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制.方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A(soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA)和可溶性UL16结合蛋白2(soluble UL16 binding protein 2,sULBP2)的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2,将PAX6过表达质粒(PAX6-OE)和空载体(NC)转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株,分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平;在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力,ELISA法检测其上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、去整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力.结果:与健康人相比较,HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低(P=0.002),而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高(P=0.004和P<0.001).Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比,HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05).免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2.与NC组比较,PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降(均P<0.05);PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05),且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平均显著低于NC组(均P<0.05).流式细胞术显示:与NC组比较,PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高(均P<0.05).结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低,过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长,增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率,其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和sULBP2的分泌水平有关.

[目的]应用高通量测序技术对3例宫颈癌组织及癌旁组织标本进行全外显子测序,筛选与宫颈癌发生相关的突变基因.[方法]选取3例癌组织及癌旁组织标本三对6个进行全外显子高通量测序,测序结果与UCSC的数据库、dbSNP数据库、千人基因组计划数据库、外显子组测序计划数据库以及AVSIFT数据库等进行比对,筛选出与宫颈癌相关的突变基因.[结果]3例宫颈癌组织及癌旁组织的全外显子测序中,发现120个非同义突变,4个无义突变,75个同义突变,7个未知变异,共涉及包括IL-10在内的31条信号通路.与COSMIC数据库中所记录的突变基因相比,发现泛素特异性蛋白酶10 (USP10) (COSM3787244)、抽搐相关类似基因6(SEZ6L) (COSM76394)和去整合素和金属蛋白酶家族29(ADAM29) (COSM5656204)三个位点在2个宫颈癌标本中存在.[结论]USP10(COSM3787244)、SEZ6L(COSM76394)和ADAM29 (COSM5656204)三个位点在宫颈癌组织中存在,其可能与宫颈癌的发生相关.

目的观察T2DM大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 (p-NR2B)、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的表达变化.方法将40只健康雄性SD大 鼠采用随机数字表法分为对照组(Con,n=20),糖尿病组(DM,n=20).Con组以普通饲料喂养8周后单 次空腹腹腔注射柠檬酸缓冲液.DM组以高脂高糖喂养8周诱导IR后腹腔小剂量注射STZ 35 mg/kg, 3 d后测血糖,血糖≥16. 7 mmol/L确诊T2DM.造模成功后10、20 d分别通过Y迷宫、八臂迷宫检测认 知功能改变,17、21、28 d取大鼠海马,Western blot测定海马p-NR2B、Wnt3a和ADAM10的表达.结 果与Con组比较,DM组在Y迷宫自发活动次数为(6. 9±3. 2)次,自主选择率(SA％)为(42. 2± 29. 5)％,差异有统计学意义(P<0. 05);DM组在八臂迷宫的1、3、6 d测试时间分别为(459. 2±143. 5)s、 (357. 3±131. 7)s、(274. 0±145. 1)s,较 Con组延长(P<0. 05),记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME) 和总记忆错误(TE)比较,差异无统计学意义(P>0. 05).与Con组比较,DM组各时间点海马中 p-NR2B、Wnt3a和 ADAM10的表达降低(P<0. 05).结论 T2DM大鼠海马中 p-NR2B、Wnt3a 和 ADAM10的表达减少可能参与其早期认知功能的下降.

[目的]检测结肠癌组织中去整合素样金属蛋白酶8 (ADAM8) 基因表达以及患者外周血中ADAM8蛋白表达的变化, 探讨了其相关的临床意义.[方法]收集2017年2月～2018年10月我院普外科治疗的结肠癌患者82例, 另取我院体检中心健康体检者30例作为正常健康对照.ELISA法检测外周血中ADAM8蛋白表达水平.荧光定量PCR检测ADAM8基因表达水平.[结果]结肠癌患者癌组织中ADAM8基因的2-△△Ct值为0.38±0.09, 显著高于癌旁组织的0.16±0.04 (P<0.01) .结肠癌患者外周血ADAM8蛋白表达水平为 (22.35±5.14) μg/L, 显著高于对照组的 (8.07±0.15) μg/L (P<0.01) .结肠癌患者癌组织中ADAM8基因2-△△Ct值和蛋白表达水平在肿瘤大小≥5 cm患者为 (0.44±0.12) 和 (25.24±5.65) μg/L, 显著高于<5 cm患者的 (0.31±0.06) 和 (18.32±4.52) μg/L (P<0.05), 在Ⅲ、Ⅳ期患者为 (0.43±0.11) 和 (25.50±5.76) μg/L, 显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者的 (0.32±0.07) 和 (19.16±4.63) μg/L (P<0.05), 在淋巴结有转移患者为 (0.45±0.14) 和 (25.20±5.83) μg/L, 显著高于无转移患者的 (0.25±0.04) 和 (16.86±4.45) μg/L (P<0.01) .[结论]结肠癌患者肿瘤组织和外周血中ADAM8高表达, 高表达的ADAM8可能参与了结肠癌的发生、侵袭和转移过程.