目的 验证运用有机溶剂/去污剂(S/D)处理法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中辛德毕斯病毒(Sindbis virus)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活/去除效果.方法 采用S/D处理法灭活人凝血因子Ⅸ中添加的Sindbis virus,噬斑滴定法检测灭活前后的病毒滴度;膜过滤法去除添加的PPV,细胞病变法检测去除前后的病毒滴度.结果 经S/D处理法灭活后,3 批人凝血因子Ⅸ中Sindbis virus降低量分别为>4.62 lgPFU/mL、>4.64 lgPFU/mL、>4.50 lgPFU/mL.经Planova 15N膜过滤后,3 批人凝血因子Ⅸ中PPV降低量分别为≥4.50 lgTCID50/0.1 mL、≥4.56 lgTCID50/0.1 mL、≥4.38 lgTCID50/0.1 mL.结论 通过对指示病毒的验证效果评估,证明运用S/D法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中的Sindbis virus和PPV均有较好的灭活/去除效果.

目的:研发一款适用于放射性核素污染的去污膜，对其物理性质、核素清除效果和安全性进行考察。方法:以海藻酸钠和壳聚糖为基质膜，负载复方洗消剂配方制备去污膜。通过将去污膜置于生理盐水中，测试其溶胀性能；通过拉力机测试去污膜的断裂应力与应变。以生理盐水、基质膜、1%二乙烯三胺五乙酸五钠(DTPA-5Na)基质膜组作为对照组，在豚鼠完整皮肤与伤口模型上检测去污膜对铀、铯、钴、铈和锶的清除效果。采用噻唑蓝比色法(MTT)测试去污膜的浸提液对小鼠上皮样成纤维细胞(L929)的毒性；将去污膜的浸提液注射到Kunming (KM)小鼠体内，测试其全身急性毒性。将去污膜覆盖于新西兰兔背部测试皮肤刺激性。结果:去污膜成膜时间为1.5 min，溶胀率为(134.96 ± 3.49)%，断裂应力为(393.88 ± 53.53)kN/m 2，断裂应变为(163.00 ± 35.29)%。在完整皮肤上，去污膜对铀的清除率为(95.38 ± 0.23)%，对铯为(96.57 ± 0.49)%。在伤口模型上，去污膜对铀、铯、锶、钴和铈的清除率分别为(92.16 ± 0.52)%、(90.44 ± 1.16)%、(92.03 ± 0.87)%、(92.79 ± 0.51)%和(92.85 ± 0.82)%，均优于生理盐水、基质膜与1% DTPA-5Na基质膜组( t ＝ 3.81 ～ 4 498.55， P<0.001)。安全性评价试验表明，去污膜符合国家医疗器械生物学评价标准。 结论:去污膜能够快速成膜且对多种核素均有良好的清除效果，安全性良好，适用放射性核素污染人员的完整皮肤或伤口去污，有望为核污染区域的工作人员提供安全保障。

细菌通过群体感应(QS)分泌信号分子和细胞外聚合物(EPS),使细菌聚集和黏附到生物和非生物表面,在一定条件下形成抗性强、危害性大的生物被膜.目前,生物被膜在医疗、食品和农业等领域中的危害日益严重.尤其是一些致病菌不仅对人类健康构成威胁,甚至会造成较大的社会经济损失.一些传统消毒、杀菌方法难以将其彻底清除,且存在二次污染风险.生物被膜在不同介质表面的强黏附性是其难以被清除的主要原因之一.因此,采用高活性的溶液进行浸泡、清洗是去除生物被膜的有效策略.低温等离子体活化水中的活性氧(ROS)和活性氮(RNS)能破坏细菌的细胞壁、肽聚糖结构,有效抑制微生物黏附和聚集.低温等离子体活化水作为一种高效消毒抑菌溶液,被广泛应用于生物医学、食品去污和种子萌发领域.但低温等离子体活化水中活性物质易消散,难以长期贮藏,导致其抑菌性能减弱.近年来,通过向低温等离子体活化水中添加不同介质或联合其他技术制备的低温等离子体活化溶液,有效延长了活性物质的衰退,使其逐渐成为消毒、抑菌研究的新方向.本文综述了低温等离子体活化水和低温等离子体活化溶液的杀菌作用机理及其对生物被膜的清除效果,重点介绍了生物被膜的形成过程.旨在为环境、医疗及食品行业的生物被膜清除和控制提供理论参考.

目的 探讨保留软骨的去细胞全喉支架的制备方法及在大鼠喉软骨缺损中的修复效果.方法 取6只大鼠用于支架的制备,分离颈总动脉,结扎分支,经颈总动脉灌注去污剂(SDS、Triton X-100、PBS离子型),3只大鼠去除喉黏膜、肌肉、韧带的同时,保留细胞外基质和软骨细胞制备保留软骨的去细胞全喉支架,其余3只用于制备对照组支架.另取34只大鼠,建立0.5 cm×0.5 cm全层喉软骨缺损模型,根据处理方法不同随机分为对照组(n=17)和保留软骨组(n=17),对照组植入未经处理的异体喉骨支架,保留软骨组植入保留软骨的去细胞全喉支架,比较两组的修复效果.结果 ①两种支架经过脱细胞灌注处理后,全喉大体结构完整,体积未发生明显的变化;②保留软骨的去细胞全喉支架未见表面细胞组织填充,可见胶原、细胞外基质成分组成的腔隙,细胞之间结构紧密,存在于会厌、声带、环状软骨等表面;对照组支架组织中的细胞成分被完全去除,但是依稀可见网状连接,结构之间不紧密;③免疫荧光结果显示:保留软骨的去细胞全喉支架除了有肌肉、软骨细胞外,主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ染色均为阴性;对照组支架免疫荧光染色下MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ染色均为阳性;④保留软骨组大鼠修复6 w后缺损部位存在少许不成熟的软骨细胞,极少的软骨形成陷窝,表面存在纤维组织及炎症细胞;修复12 w 后缺损部位得到修复,形成软骨陷窝,炎症反应减少;对照组修复6 w后缺损部位周围软骨细胞较少,缺损部位与周围组织边界明显,存在大量炎症细胞;修复12 w后存在少量纤维组织,存在炎症因子.结论 保留软骨组植入保留软骨的去细胞全喉支架在喉软骨缺损中具有良好的修复效果.

背景:前交叉韧带损伤越来越多见,传统治疗方式主要是前交叉韧带重建,随着组织工程研究在临床广泛运用,韧带组织工程治疗前交叉韧带损伤已成为目前研究的热点.目的:探讨人羊膜间充质干细胞和人脱细胞羊膜支架的体外生物相容性.方法:采用酶消化法获得人羊膜间充质干细胞并对其进行鉴定.采用酶消化法和化学去污法对新鲜人羊膜进行脱细胞处理,以苏木精-伊红染色以及免疫荧光染色检测细胞成分移除情况以及细胞外基质破坏情况.取第3代人羊膜间充质干细胞,分别使用人脱细胞羊膜浸提液(实验组)与普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养, CCK-8法检测两组细胞增殖能力.人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜共培养14 d后,扫描电镜与倒置显微镜观察人脱细胞羊膜上的细胞黏附及生长情况.结果与结论:①倒置相差显微镜观察显示人羊膜间充质干细胞呈漩涡状、贴壁生长,高表达波形蛋白,低表达CK-19,具有成骨、成脂、成软骨诱导分化能力;②苏木精-伊红染色显示人脱细胞羊膜上皮细胞及间充质干细胞已完全移除,细胞外基质成分无明显破坏;免疫荧光染色显示Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原均呈阳性表达;③人脱细胞羊膜浸提液对人羊膜间充质干细胞无细胞毒性,不影响其增殖活性;④倒置相差显微镜及扫描电镜均显示人脱细胞羊膜可以促进人羊膜间充质干细胞增殖及黏附,二者具有良好的生物相容性.

目的:比较非离子型去污剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和离子型去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)对SD大鼠皮下移植猪主动脉瓣巨噬细胞表型极化的作用. 方法:分别采用Triton X-100和SDS对猪主动脉瓣进行去细胞处理,将瓣膜分为Triton X-100处理组和SDS处理组,三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液处理组作为未处理组.将处理后的猪主动脉瓣埋入SD大鼠胸部左右两侧皮下,建立SD大鼠皮下移植猪主动脉瓣模型,分别在第3、14、28天时取出移植的猪主动脉瓣,免疫组织化学染色比较猪主动脉瓣中CCR7(M1型巨噬细胞标志物)和CD163 (M2型巨噬细胞标志物)的表达情况,计算M2型巨噬细胞与M1型巨噬细胞的比值(M2型/M1型巨噬细胞=CD163+细胞数/CCR7+细胞数). 结果:未处理组猪主动脉瓣皮下移植28 d时,M2型/M1型巨噬细胞比值＜1,巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化,发挥促炎作用;SDS处理组、Triton X-100处理组瓣膜在皮下移植14 d和28 d时,M2型/M1型巨噬细胞比值＞1,巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,发挥促进组织修复的作用.瓣膜皮下包埋14 d时,SDS处理组猪主动脉瓣M2型/M1型巨噬细胞比值明显高于Triton X-100处理组和未处理组(P均＜0.05). 结论:去细胞处理可促进移植瓣膜中巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,采用SDS进行去细胞处理对巨噬细胞极化的作用优于Triton X-100.

生物膜工艺因其处理成本低、运行性能高和二次污染少等优点,近年来常作为预处理工艺逐渐应用于污染原水净化,其生物膜菌群结构受到多种因素制约并影响系统去污性能.定期收集浙江某全规模原水预处理生物曝气池的生物膜样品,分析其菌群时空变化特征.结果表明,在原水生物膜预处理工艺中,生物膜菌群结构受运行时间和系统位置变化的影响较为明显.系统启动初期生物膜菌群多样性指数较低,随着系统运行逐渐增加,生物膜主要菌群为Proteobacteria、Bacteroidetes、Planctomycetes、Firmicutes、Actinobacteria、Verrucomicrobia、Acidobacteria和Gemmatimonadetes,其中Proteobacteria占优势地位.值得注意的是,原水生物膜预处理工艺生物膜生长有一定比例的蓝藻和病原菌,但其相对丰度较低.综合分析认为,原水生物膜预处理系统运行过程中有机物和氮素的去除由多种菌群相互作用共同完成.

目的 比较无去污剂的细胞总蛋白三种酶切样品制备方法. 方法 采用细胞吸入胶内酶切法、蛋白吸入胶内酶切法及超滤管辅助溶液酶切法对细胞总蛋白进行酶切,再用液质联用技术对三种酶切方法制备的多肽样品进行蛋白鉴定.结果 通过液质联用技术鉴定,细胞吸入胶内酶切法制备的样品获得3 835个蛋白,蛋白吸入胶内酶切法制备的样品获得2 340个蛋白,超滤管辅助溶液酶切法制备的样品获得4 248个蛋白.韦恩图分析显示,不同酶切方法得到的蛋白种类存在差异.对细胞吸入胶内酶切法和超滤管辅助溶液酶切法所获得的蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)分析发现,细胞吸入胶内酶切法能获得更多膜结合蛋白. 结论 三种无去污剂酶切方法,避免了去污剂的种种弊端,其中超滤管辅助溶液酶切法和细胞吸入胶内酶切法更优.

目的 通过改良去污剂联合酶法(DEM)制备周期短、成本低的兔气管脱细胞基质并评价其性能.方法 采用改良DEM对新西兰大白兔气管进行脱细胞处理,通过宏观测量和生物力学测试分析脱细胞基质力学结构;组织学染色观察基质微观结构改变;细胞毒性试验检测基质的体外生物相容性;同种异体埋植术后苏木精-伊红(HE)染色和CD68分子标记评估基质的体内生物相容性;采用t检验和方差分析对各组数据进行统计学分析.结果 2个改良DEM周期处理后,弹性模量[(0.544±0.073) N/mm2]较原生气管[(0.598±0.042) N/mm2]仅轻微下降;组织学染色显示上皮和黏膜层细胞被完全去除,糖胺聚糖含量下降;免疫组织化学染色显示,脱细胞后非软骨区主要组织相容性复合体(MHC)低表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)证实在第3～5天骨髓间充质干细胞在2周期组表达高于原生组(第5天,0.484±0.027比0.421±0.014),差异有统计学意义(t=-3.557,P＜0.05);术后染色表明脱细胞基质的结构保持相对完整,炎性细胞浸润较少.结论 经过2个周期的改良DEM处理,可获取与原生气管结构及生物力学性能相似、低免疫原性的兔脱细胞气管基质.本方案制备周期短、成本低、污染风险小,可用于组织工程气管移植研究.

膜蛋白在诸多生物过程,例如呼吸作用、光合作用、信号识别和分子转运等方面发挥重要作用.近年来,去污剂的快速发展,在一定程度上极大地推动了膜蛋白研究的进展.去污剂广泛应用于膜蛋白的提取、增溶、纯化、理化性质及结构研究.然而,如何选择合适的去污剂通常是一项复杂的任务.本文从以下两个方面入手,系统地描述了去污剂的重要理化性质及其在膜蛋白结构功能研究中的应用:(1)去污剂结构及其对去污剂性质和水溶性的影响,去污剂形成胶束的条件及影响去污剂胶束形成的其他因素.希望这些关于去污剂的基本性质和参数的介绍,可以为相关科研工作者选用去污剂提供理论依据.(2)去污剂抽提膜蛋白的流程和注意细节,对膜蛋白纯化时分子量测定的影响,膜蛋白研究中去污剂的置换与去除,以及膜蛋白结构与功能研究案例的归纳.希望这些应用细节与课题研究,能为相关科研工作者研究膜蛋白结构功能时提供经验借鉴.