目的 探讨新型量子点荧光免疫层析法测定血清淀粉样蛋白A(SAA)的应用.方法 采用双抗夹心法结合量子点荧光免疫层析技术制备以二硝基苯酚(DNP)-牛血清白蛋白(BSA)系统为质控线的SAA检测试剂盒.通过鸡IgY-羊抗鸡IgY系统作为对照评价了 DNP-BSA系统作为质控线的可行性,并通过优化量子点微球与抗体的偶联条件,进一步提高试剂盒的性能,并对试剂盒的空白限、检出限、线性范围、精密度、准确度、特异度、稳定性,以及临床实际样本测定等方面进行了评价.结果 以DNP-BSA系统作为质控线的SAA试剂盒受干扰成分浓度的影响小,稳定性高,热稳定性好.量子点微球与SAA抗体偶联比例为100 μg/mg,偶联反应液浓度为25 mmol/L 3-吗啉丙磺酸pH 7.4,与DNP-BSA偶联比例为100 μg/mg,偶联反应液浓度为25 mmol/L吗啉乙磺酸pH 6.0时偶联效果最佳.试剂盒最低检出限为0.5 mg/L;线性范围为1～200 mg/L,R2≥0.99;批内精密度变异系数(CV％)≤5.31％,批间精密度CV％≤15％;在低、高浓度的回收率分别为101.42％、98.83％;在血红蛋白浓度≤5 g/L,胆红素浓度≤0.15 g/L,胆固醇浓度≤15 g/L,甘油三酯浓度10 g/L时,SAA的检测结果无干扰;试剂盒在50 ℃放置21 d,稳定性良好;试剂盒与Roche的SAA电化学发光试剂盒同步检测67例样本结果具有高度一致性.结论 研制的SAA检测试剂盒灵敏度、线性、精密度、准确度、特异度及加速稳定性都满足试剂盒的要求,与鸡IgY-羊抗鸡IgY系统相比DNP-BSA系统作为质控线独立性好,测定临床样本准确度和热稳定性更佳.

目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)融合前F蛋白(prefusion F protein,pre-F)三聚体定量检测方法,并对其进行方法学验证和初步应用.方法 选取RSV pre-F三聚体特异性抗体AM14 作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的RSV pre-F特异性抗体D25 作为检测抗体,通过方阵滴定法确定捕获抗体和检测抗体的最佳浓度,对封闭液进行优化,建立双抗体夹心ELISA.分别对该方法的专属性、准确度、精密度和耐用性进行验证,并应用于RSV亚单位疫苗工艺开发中pre-F三聚体的定量检测.结果 该方法确定的捕获抗体AM14 包被浓度为 1.25 μg/mL,检测抗体D25 浓度为0.50 μg/mL,封闭液为1%牛血清白蛋白(bo-vine serum albumin,BSA).方法验证结果显示,线性范围为 1.50～24.00 ng/mL,标准曲线R2>0.99,最低检测限可达1.33 ng/mL;该方法专属性良好,仅与RSV pre-F三聚体反应;准确度和精密度验证结果显示回收率为 87.41%～117.03%,变异系数(coefficient of variation,CV)为 5.47%～14.07%;检测抗体孵育时间及显色时间在一定范围内波动时,回收率在 87.65%～106.45%,证明该方法耐用性优良;该方法可应用于RSV pre-F发酵和纯化等样品的检测.结论 成功建立并验证RSV pre-F三聚体定量检测方法,该方法专属性强,准确度、精密度、耐用性均优良,可应用于RSV疫苗工艺开发中pre-F三聚体的定量检测,无需Octet或者Biacore等精密仪器,具有操作简单、定量准确、成本低、便于推广应用等优点.

目的 制备抗猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)A35R蛋白单克隆抗体并建立其双抗体夹心ELISA检测方法,同时对方法进行验证.方法 原核表达MPXV A35R蛋白并免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术制备抗A35R蛋白单克隆抗体,对单克隆抗体的特异性、结合活性进行鉴定;建立双抗体夹心ELISA检测方法,对该方法的线性范围、检测限、专属性、准确性、精密度进行验证.结果 制备了 7 株抗MPXV A35R单克隆抗体.Western blot鉴定结果显示,7株单克隆抗体均与MPXV A35R蛋白及灭活MPXV发生特异性反应;7株单克隆抗体结合活性为11.35～27.73 ng/mL;抗体经配对筛选后,确定以7G5和2F5为最佳配对抗体,用于建立双抗体夹心ELISA方法.该方法对灭活MPXV抗原最低检测限为1.250×104 TCID50/mL,对MPXV A35R蛋白最低检测限为 1.95 ng/mL,线性范围为 3.91～125.00 ng/mL,线性回归方程为y=1.732 0x-0.920 8,R2=0.984 3;该方法专属性较强且不与其他病毒及蛋白发生交叉反应;准确性验证结果显示,病毒抗原回收率为 96.94%～110.04%;批间CV为 0.26%～8.13%,批内CV为 2.10%～5.48%.结论 成功制备了抗MPXV A35R蛋白单克隆抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测方法.验证结果显示,该方法具有较高的灵敏度、准确度、重复性及专属性,可用于以A35R蛋白为基础的猴痘亚单位疫苗的生产质量控制.

目的:探讨高压氧(HBO)联合成纤维细胞生长因子(FGF)治疗皮肤创伤对患者创面愈合的疗效和血清指标的影响。方法:选取2017年3月至2019年7月在重庆医科大学附属第三医院皮肤整形美容中心收治的84例皮肤创伤患者作为研究对象。按照随机数字表法将患者分为观察组( n＝42)和对照组( n＝42)。对照组采用人成纤维细胞生长因子(FGF)治疗，观察组在对照组治疗的基础上联用HBO治疗。统计2组患者创面愈合时间及治疗15 d后创面愈合率。在治疗前及治疗后5、10、15 d取患者创面渗出液，用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-33(IL-33)、可溶性ST2(sST2)、转化生长因子-β1( TGF-β1) 、结缔组织生长因子(CTGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等指标的表达水平。观察2组患者在治疗过程中出现的瘙痒及创面发红等不良反应。 结果:治疗15 d后，观察组患者创面愈合时间短于对照组，创面愈合率明显高于对照组，差异均有统计学意义( P<0.05)。2组患者治疗5、10、15 d后CRP与TNF-α水平较治疗前明显降低，且观察组CRP与TNF-α水平明显低于对照组，差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。2组患者治疗5、10、15 d后创面血清IL-33、sST2水平明显低于治疗前，且观察组治疗后IL-33、sST2水平明显低于对照组，差异均有统计学意义( P<0.05)。2组患者治疗5、10、15 d后创面血清TGF-β1、VEGF、CTGF水平均明显高于治疗前，且观察组治疗后TGF-β1、VEGF、CTGF水平显著高于对照组，差异有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。患者在入院治疗过程中，预期出现的瘙痒、创面发红的不良反应发生率均较低，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:采用HBO联合FGF治疗皮肤创伤患者临床疗效好，且安全性高，其主要通过调节炎性因子和皮肤创面修复促进因子水平实现的。

目的:研究儿童肺炎支原体肺炎(MPP)外周血中Th1/Th2细胞因子变化及临床意义。方法:回顾性分析2016年1月至2020年2月在杭州市儿童医院接受治疗的MPP患儿60例的临床病例资料，根据病情进展程度将MPP患儿分为急性期组( n＝29)和恢复期组( n＝31)，另选取同期于该院进行体检的健康儿童50例作为健康对照组，采用双夹心抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)水平。 结果:MPP急性期组IFN-γ、IL-4水平[(1 235.24±254.64)ng/L、(781.13±113.09)ng/L]均明显高于恢复期组[(545.38±58.57)ng/L、(331.27±64.18)ng/L]( t＝14.683、19.108，均 P＝0.001)和对照组[(477.96±46.61)ng/L、(241.86±39.07)ng/L]( t＝20.534、30.813，均 P＝0.001)，Th1/Th2水平[(1.65±0.37)]明显低于恢复期组[(1.97±0.42)]( t＝3.123， P＝0.003)和对照组[(2.28±0.56)]( t＝5.405， P＝0.001)；MPP恢复期组IFN-γ、IL-4水平均高于对照组( t＝5.729、7.805， P＝0.003、0.001)，Th1/Th2水平低于对照组( t＝2.652， P＝0.010)。 结论:MPP患儿存在Th2占优势的免疫失调。

目的:建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay，DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)滴度。方法:以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检测抗体，通过对其抗体浓度的优化来确定DAS-ELISA较适反应条件，并对该方法的特异性、重复性、灵敏度及适用性进行验证。结果:选择用AM14抗体作为捕获抗体，D25作为检测抗体。捕获抗体AM14较适工作浓度为20 μg/mL，检测抗体D25的稀释比例为1∶3 000。建立的DAS-ELISA与轮状病毒(rotavirus，RV)和人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3，HPIV-3)无交叉反应，且不同稀释倍数的RSV病毒进行批内与批间重复试验的变异系数(coefficient of variation， CV)均<10%；不同亚型的RSV及蛋白进行试验，均能检测到病毒滴度；检测结果与CCID 50比较，可检测的稀释倍数略高。 结论:建立了检测RSV滴度的DAS-ELISA，该方法可为实验室RSV病毒滴度检测提供依据。

目的:观察瑞马唑仑对脑血管介入手术患者术后谵妄（postoperative delirium, POD）的影响。方法:选取2021年7月至2022年6月在空军军医大学西京医院行全麻下脑血管介入手术的患者，采用区组随机化方法分为丙泊酚组（P组）和瑞马唑仑组（R组）。P组患者静脉注射丙泊酚1.0~1.5 mg/kg行麻醉诱导，静脉泵注丙泊酚4~10 mg·kg -1·h -1术中维持麻醉；R组患者静脉注射瑞马唑仑0.1 mg/kg行麻醉诱导，静脉泵注瑞马唑仑0.3~0.7 mg·kg -1·h -1术中维持麻醉。记录两组患者一般情况、术前合并疾病情况、手术时长及术中血管活性药物使用情况。于术前20 min和术后5 min采集两组患者静脉血样本，双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清IL-6、血清S100钙结合蛋白β（S100 calcium binding protein β, S100β）和TNF-α水平。采用ICU意识模糊评估法（Confusion Assessment Method-intensive care unit, CAM-ICU）量表于拔管后30 min、术后1 d和术后3 d进行POD评估。 结果:共129例患者完成研究，其中P组64例，R组65例。两组患者一般情况、术前合并疾病情况、手术时长差异无统计学意义（ P>0.05）。两组患者拔管后30 min、术后1 d和术后3 d POD发生率差异无统计学意义（ P>0.05）。两组患者术前、术后的IL-6、TNF-α和S100β水平差异均无统计学意义（ P>0.05）；与术前比较，两组患者术后IL-6、TNF-α和S100β水平差异无统计学意义（ P>0.05）。R组术中升压药使用率低于P组（ P<0.05），两组患者术中降压药和阿托品使用率差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:与丙泊酚相比，瑞马唑仑全麻不会增加脑血管介入手术患者POD发生率，也不引起血清IL-6、TNF-α及S100β水平的显著变化。

目的:获得乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)C2蛋白的HBV多肽。方法:同源重组法构建含1.2倍HBVC2全基因组表达重组体；脂质体法转染HepG2和Huh-7细胞；荧光定量PCR法检测HBV DNA水平；双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)的水平；免疫荧光法检测核心抗原(HBcAg)水平和分布。电转染法转染人永生化B淋巴细胞系(B-lymphoblastoid cell line，BLCL)，液相色谱串联质谱(liquid chromatography-mass spectrography/mass spectrometry，LC-MS/MS)法分离鉴定HBV多肽，生物信息学预测亲合力，并检索已报道序列。结果:成功构建了含3881 bp目的片段的HBVC2全基因组的重组体，即pAAV/HBV1.2 C2。HepG2和Huh-7细胞转染重组体后24、48和72 h，培养上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg均呈现较高水平；HBcAg多分布在细胞核，均在48 h表达水平达高峰。从5株BLCLs细胞裂解液中检出来源于HBsAg、HBeAg和HBcAg的HBV多肽(序列长度≥8aa)共95条。比较分析共同序列和包含或重叠(≥8aa)序列，67条多肽形成了11个HBV多肽热点核心区域，有92条已见报道。51(53.68%)条多肽有相应的人类白细胞表面抗原(human leukocyte antigen，HLA)等位基因分型，而与5株细胞所携带HLA等位基因一致的共有21条。 结论:成功构建和表达了pAAV/HBV1.2 C2，获得了真实世界的HBVC2多肽谱。

目的:探讨升陷汤加味对脓毒症所致急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者血管外肺水指数（EVLWI）和肺损伤预测评分（LIPS）的影响。方法:前瞻性队列研究。将符合入选标准的2019年1月－2021年5月上海中医药大学附属曙光医院宝山分院200例脓毒症所致ARDS患者，采用随机数字表法分为２组，每组100例。对照组采用西医常规疗法治疗，观察组在对照组基础上服用升陷汤加味治疗。2组均治疗7 d。采用全自动血气分析仪检测pH值、吸入氧浓度（FiO 2）、PaO 2、PaCO 2，计算氧合指数；采用ELISA法检测血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IL-6，双抗体夹心免疫发光法检测降钙素原（PCT）；采用急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHE Ⅱ）、LIPS评估肺损伤严重程度及预后；采用液体复苏中连续心排血量监测技术监测患者EVLWI和心脏指数（CI），观察并记录机械通气时间和重症监护室住院时间。 结果:治疗后，观察组PaCO 2［（37.15±5.42）mmHg比（38.24±3.24）mmHg， t=2.03］低于对照组（ P<0.05）；氧合指数［（292.34±78.91）比（236.54±70.58）， t=5.27］高于对照组（ P<0.05）；血清hs-CRP［（35.21±6.73）mg/L比（48.97±8.52）mg/L， t=12.67］、IL-6［（40.57±8.51）ng/L比（47.61±9.97）ng/L， t=5.37］、PCT［（0.75±0.21）μg/L比（1.14±0.38）μg/L， t=8.98］水平低于对照组（ P<0.01）；APACHE Ⅱ［（11.14±0.54）分比（14.67±0.89）分， t=33.91］、LIPS［（2.21±0.73）分比（4.59±0.88）分， t=20.82］、EVLWI［（6.19±0.42）ml/kg比（8.24±0.78）ml/kg， t=23.14］低于对照组（ P<0.01）；CI［（4.49±1.27）L/（min·m 2）比（3.61±0.88）L/（min·m 2）， t=5.70］高于对照组（ P<0.01）。治疗期间，观察组机械通气时间和重症监护室住院时间均较对照组缩短（ t值分别为3.66、5.74， P<0.01）。 结论:升陷汤加味可降低脓毒症所致ARDS患者炎症因子水平及EVLWI、LIPS评分，改善血气分析指标，缩短机械通气时间和重症监护室住院时间。

乙型肝炎核心抗体是病毒感染后产生的特异性抗体，出现早，持续时间长，利用双抗原夹心化学发光微粒子免疫检测法测量其在血清中的水平，具有更高的灵敏度和特异性，为乙肝患者的诊断、治疗及停药管理提供新的临床指标。本文就乙肝核心抗体定量检测的临床意义及研究进展作综述，阐述其在临床实践中的研究应用及前景。