运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术及超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)对小柴胡颗粒化学成分及大鼠口服后的入血成分进行鉴定.采用CORTECS UPLC C18+色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据后与对照品比较保留时间、精确相对分子质量、二级离子碎片以及参照相关文献进行化学成分鉴别;通过皮下注射干酵母建立大鼠发热模型后,灌胃给予正常组及模型组大鼠小柴胡颗粒,给药后于不同时间点眼眶静脉取血,分离血浆,在多反应监测模式(MRM)下进行扫描鉴定入血成分.从小柴胡颗粒中共初步鉴定出112种化学成分,包括63种黄酮类、31种皂苷类、6种有机酸类、4种苯丙素类、3种氨基酸类以及5种其他类化合物;从血浆中鉴定得到18个入血原型成分.该研究鉴定了小柴胡颗粒化学成分及入血成分,为进一步的药效物质基础及质量控制研究奠定了基础.

目的:基于Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)和核因子E2相关因子2/泛素结合蛋白p62(Nrf2/p62)通路研究三臣散(SCP)对脂多糖(LPS)诱导的幼鼠肺部炎症的抗炎及抗氧化作用机制.方法:将76只雄性Wistar幼鼠随机分为空白组(n=12)和造模组(n=64).造模组幼鼠通过LPS经口气管滴注诱导肺部炎症,将造模后幼鼠随机分为三臣散高剂量组(HSCP组)、三臣散低剂量组(LSCP组)、地塞米松组(DEX组)和模型组(Model组),每组16只.HSCP组大鼠给予0.10 g/mL SCP灌胃,LSCP组给予0.05 g/mL SCP灌胃,DEX组给予0.025 g/mL地塞米松灌胃,Model组和空白组给予1 mL/100g羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液灌胃,2次/d.分别于第2、4天末次给药后24 h取材(n=8).取材后先行肺部病理切片检测造模是否成功,各组取12只(第2、4天各6只)造模成功幼鼠进行后续指标检测.观察幼鼠的一般情况、体质量,检测凝血四项、血常规,HE染色观察肺组织病理情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下丘脑发热中枢介质和支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子的含量,检测肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫印迹法检测肺组织中TLR4、IKBα、p65和Nrf2、p62蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组幼鼠肺部在第2天出现大量炎症细胞浸润,肺泡结构破坏,肺泡壁出现透明膜,肺泡壁增厚、融合,支气管有片状渗出物;第4天肺泡壁增厚加重,肺泡数量减少,肺间质纤维化.与模型组比较,HSCP组、LSCP组、DEX组幼鼠肺部整体损伤程度更低,其中HSCP组最低.第2天,模型组幼鼠中性粒细胞数、前列腺素E(PGE)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4表达量、MDA含量均高于空白组(P＜0.05),环磷酸腺苷(cAMP)、转化生长因子-β(TGF-β)均低于空白组(P＜0.05);第4天,模型组幼鼠中性粒细胞数、PGE、IL-6、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、TNF-α、MDA含量均高于空白组(P＜0.05),cAMP、TGF-β、IκBα、SOD水平均低于空白组(P＜0.05).第2天,HSCP组幼鼠cAMP、TGF-β高于模型组、LSCP组和DEX组(P＜0.01或P＜0.05),PGE、IL-6、TNF-α、IL-4、MDA 含量低于模型组、LSCP 组和 DEX 组(P＜0.01 或 P＜0.05);HSCP 组幼鼠 IL-10 高于模型组(P＜0.01),TLR4表达量高于LSCP组、DEX组(P＜0.05);DEX组幼鼠TLR4表达量低于模型组(P＜0.05).第4天,HSCP组、LSCP组和DEX组幼鼠cAMP、IL-10、TGF-β高于模型组(P＜0.05或P＜0.05),中性粒细胞、PGE、IL-6、TNF-α、IL-4、MDA含量低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).各组幼鼠第4天TLR4、IκBα蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:SCP可以减轻LPS诱导的幼鼠轻型肺部炎症,其作用机制可能是通过调控TLR4/NF-κB通路下游的炎症因子来抑制炎症反应,以及激活Nrf2/p62通路调控与氧化应激相关的因子来抑制氧化应激反应.

目的:本研究旨在探究扶阳解表颗粒(FYJBKL)对病毒性感染肺炎的治疗作用机制.方法:利用网络药理学所建立的网络模式,研究FYJBKL病毒性肺炎的目标表达点,从而确定治疗病毒性肺炎的主要靶点和重要的信号传递途径.其次,将药品中的主要组成部分和主要靶点进行对接;然后,建立发热、发汗和炎症大鼠模型以探索FYJBKL的解热、发汗和抗炎作用机制;最后,采用ELISA法分析大鼠的血液样本IL-17、IL-1β、TNF-α和IL-6的含量;HE染色观察肺组织形态的变化.结果:173个节点、456条边,其中发挥成分有槲皮素、木犀草素、山奈酚等,主要机制靶点有IL-17、IL-1β、TNF-α、IL-6等.KEGG富集分析发现了30条信号路径(P<0.05),涵盖了白细胞介素17信号路径、人类巨细胞病毒感染路径、卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感/染路径等.经过分子对接的研究,发现活性物质和可能的关键目标的联系效率良好.FYJBKL的高、中浓度组明显减少了炎症模式下大鼠血液中IL-17、IL-1β、TNF-α、IL-6的表达(P<0.05).显著减轻蛋清所致的大鼠足肿胀,明显抑制酵母所致大鼠升高的体温;与正常组相比,FYJBKL使大鼠足跖部汗点数显著增高(P<0.05);HE染色显示FYJBKL均不同程度地改善肺组织纤维化及炎症渗出现象.结论:推测扶阳解表颗粒在抗病毒、抗免疫、抗炎症的相关信号通道以及生物细胞过程中的作用,很可能是由槲皮素、木犀草素、山奈酚等活性成分与其共享靶点的结合所引起的;扶阳解表颗粒可以改善病毒性肺炎引起的相关症状,其机制可能与炎症调节的多个靶点TNF、IL-17以及IL-6等相关通道的活性有关.

目的 初步探讨不同处方扶正辟邪颗粒的药效学.方法 制得不含与含挥发油的样品A与样品B.采用最大给药量法观察 2 种样品对小鼠的急性毒性作用.采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、环磷酰胺致小鼠免疫力低下模型及脂多糖致大鼠发热模型分别观察 2种样品的抗炎、免疫调节及解热作用.结果 各组小鼠体质量均自然增大,不同样品组小鼠体质量及主要脏器系数与对照组比较均无显著变化(P>0.05).3 个模型检测结果依次为,2 种样品低剂量组小鼠耳肿胀度均显著低于模型 1 组(P<0.05);各给药组小鼠耳肿胀度与模型 2 组比较均无显著改变(P>0.05);样品A低剂量组大鼠腹腔注射脂多糖后 3.0h,样品B低剂量组0.5h、1.0h、3.0h及样品B高剂量组 1.0h时大鼠肛温变化值与模型 3 组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 扶正辟邪颗粒具有抗炎、调节免疫力、解热等药效学作用.与单用浸膏比较,加入挥发油的处方药效更强.

目的:探索小儿风热清合剂的抗炎解热镇痛药理作用.方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型,测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的含量,评价小儿风热清合剂的抗炎药理作用;采用干酵母致大鼠发热模型评价小儿风热清合剂的解热药理作用;采用冰醋酸致痛扭体法和热板法评价小儿风热清合剂的镇痛药理作用.结果:阳性对照组和小儿风热清低、中、高剂量组二甲苯致小鼠耳廓肿胀度低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);小儿风热清中、高剂量组小鼠血清TNF-α含量均低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.01);小儿风热清高剂量组小鼠血清IL-6含量低于模型组(P＜0.05).小儿风热清高剂量组小鼠脾脏指数低于模型组(P＜0.05).小儿风热清低、中、高剂量组大鼠体温低于模型组,且呈现剂量依赖性,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).小儿风热清中、高剂量组小鼠扭体反应次数低于模型组(P＜0.05);小儿风热清合剂可提高热板实验小鼠的痛阈值,随着小儿风热清合剂剂量增加,小鼠痛阈值呈正相关提高,差异有统计学意义(P＜0.05).且其镇痛效果在60 min内达到峰值.结论:小儿风热清合剂具有良好的抗炎解热镇痛药理作用.

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制.方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E2(PGE2)与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达.结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65 蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65 表达(P<0.05).结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 与cAMP的分泌和减少脑组织 NF-κB p65 蛋白表达有关.

目的:基于指纹图谱及解热镇痛抗炎实验对银青抗感口服液进行质量控制及药效学评估.方法:采用SunfireTM-C18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长分别为327、245、202 nm,建立银青抗感口服液的指纹图谱并确定共有峰,通过与对照品相对保留时间及紫外光谱吸收进行色谱峰对应化合物的指认,确定共有峰的归属;观察银青抗感口服液对干酵母致热大鼠、二甲苯致小鼠耳肿胀及醋酸所致小鼠扭体的影响,进行药效学评估.结果:建立了银青抗感口服液的HPLC特征图谱,共标定了16个共有峰,并通过对照品指认了其中的10个成分,各批次样品的相似度均>0.9.与模型组相比,发热大鼠给药组体温明显下降(P<0.01),血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量明显下降(P<0.01);给药组白细胞计数明显下降(P<0.01),小鼠耳组织纤维排列紊乱、水肿及充血的情况有所改善,小鼠扭体次数明显减少(P<0.01).结论:银青抗感口服液能有效发挥解热镇痛抗炎的药效作用.本研究所建立的HPLC方法灵敏,结果准确,重复性好,可全面有效地评价该制剂的质量.

目的 研究不同时机针刺大椎穴对发热大鼠体温及下丘脑PGE2含量变化的影响,分析体温与PGE2变化的关系,探寻退热的最佳针刺时机和针刺大椎的退热作用机制.方法 使用 20%酵母悬液建立大鼠发热模型,建模成功后随机分为模型对照组、治疗1组(造模成功时针刺)、治疗2组(造模成功后1 h针刺)、治疗3组(造模成功后2 h针刺)、治疗 4 组(造模成功后 3 h针刺)、非经非穴组,在大椎进行针刺.另设空白对照组.各组进行体温与下丘脑PEG2含量测量.结果 4 个治疗组均可使发热大鼠体温降至空白对照组水平,解热时间:峰值治疗组(3 h)＜峰值后治疗组(4 h)＜峰值前治疗组(6 h)＜上升期治疗组(8 h);各治疗组体温降低幅度和PGE2 降低幅度由大到小依次为峰值治疗组、峰值后治疗组、峰值前治疗组、上升期治疗组;体温降低值与PGE2 降低值具有显著正相关关系.结论 不同时机针刺发热大鼠大椎均有退热作用并可使体温退至正常值,以体温到达峰值时进行针刺效果最佳.其作用机制可能是通过抑制下丘脑中PGE2 等内源性脂类介质的释放来实现的.针刺退热具有穴位特异性.

目的 研究复方香鱼口服液及其处方药味对大鼠发热模型的解热作用.方法 采用背部皮下注射干酵母法建立SD大鼠发热模型,将模型大鼠随机分为模型组、阿司匹林组、复方香鱼口服液高低剂量组、鱼腥草高低剂量组、三叶香茶菜高低剂量组,给药后6 h测量各组大鼠的肛温,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆中前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)及下丘脑中cAMP水平;采用腹腔注射脂多糖(LPS)法建立SD大鼠发热模型,分组同干酵母致热实验,给药后4 h测量各组大鼠的肛温,ELISA法检测血浆cAMP及下丘脑中PGE2水平.结果 干酵母致大鼠发热模型:与模型组相比,各给药组大鼠体温均明显下降,且复方鱼香口服液的解热作用优于单味药;复方香鱼口服液高低剂量组、鱼腥草高剂量组、三叶香茶菜高剂量组大鼠血浆及下丘脑cAMP水平显著降低;复方香鱼口服液高剂量组大鼠血浆PGE2水平显著降低.LPS致大鼠发热模型:与模型组相比,复方香鱼口服液高低剂量组、鱼腥草高剂量组、三叶香茶菜高低剂量组大鼠体温均明显下降;复方香鱼口服液高低剂量组、鱼腥草高剂量组、三叶香茶菜高低剂量组血浆cAMP水平显著降低;复方香鱼口服液高低剂量组、鱼腥草高低剂量组、三叶香茶菜高剂量组下丘脑PGE2水平显著降低.结论 复方香鱼口服液具有明显的解热作用,且作用强于单味药,其解热作用可能与抑制cAMP、PGE2的合成与分泌,从而截断体温调节点上移有关.

目的 比较劳力型热射病(exertional heat stroke,EHS)与经典型热射病(classical heat stroke,CHS)大鼠动物模型心肌损伤的差异,为热射病心肌损伤的临床治疗提供可能的实验室依据.方法 80只SD大鼠按随机数表法随机分为对照组(n=10)、运动对照组(EXC,n=10)、经典热射病组(CHS,n=30)和劳力型热射病组(EHS,n=30).对照组和EXC组大鼠置于温度(25±0.5)℃,相对湿度(50±5)％环境中;EHS组和CHS组大鼠置于模拟热气候动物舱内,舱内环境温度(39±0.5)℃,相对湿度(50±5)％;EHS组和EXC组大鼠给予跑台运动处理,跑步速度设置为12 m/min,坡度为0°,每运动8 min休息2 min,以监测大鼠直肠温度等.核心体温达到42.3℃或出现瘫倒(掐尾反射消失)作为热射病的开始,之后将大鼠移至常温环境复温.采用超声心动图仪检测大鼠心功能指标,生化法检测血清心肌酶(AST、LDH、CK-MB、CK)水平,苏木精-伊红(HE)染色法检测大鼠心肌组织病理,TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡情况.采用蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织中醌氧化还原酶1(Nrf2)、切割半胱天冬氨酸蛋白酶(Cl-Caspase-3)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)、促凋亡蛋白(Bax)、血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达水平.结果 与CHS组大鼠比较,EHS组大鼠热射病潜伏期显著缩短(P＜0.01),且诱发热射病所需的热负荷显著减少(P＜0.01).CHS组大鼠的脱水率显著大于EHS组(P＜0.01),但EHS组大鼠的脱水速率显著高于CHS组(P＜0.01).两组大鼠热射病发生时的直肠温度无显著差异(P＞0.05).超声心动图提示,EHS组大鼠的左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)显著低于CHS组大鼠(P＜0.05).EHS组大鼠的AST和LDH水平显著高于CHS组大鼠(P＜0.01).两组大鼠均出现急性心肌损伤的病理改变,表现为心肌细胞水肿、肌纤维排列混乱、断裂,可见炎性浸润,且EHS组心肌损伤病理评分高于CHS组(P＜0.05),EHS组心肌细胞凋亡比率亦显著高于CHS组(P＜0.05).氧化应激相关信号通路中,EHS组大鼠心肌组织的蛋白质表达水平显著高于CHS组.结论 高温同时复合运动有更高的热射病易感性,EHS介导的心功能异常及心肌细胞凋亡较CHS更重,且可能与氧化应激相关信号通路活化相关.