目的 采用羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl chitosan,CMCS)负载富血小板血浆裂解液(platelet-rich plasma lysate,PL)制备微针,探究PL微针在治疗糖尿病创面领域的应用前景.方法 使用CMCS作为基础材料,加入适量聚乙烯基吡咯烷酮K-60(Polyvinylpyrrolidone,PVPK-60)共同制备不同浓度的针体材料,通过考察成针率,形貌特征及力学性能等,确定最佳浓度,并考察PL微针中生长因子活性.制备糖尿病小鼠背部创面,随机分为4组治疗,对照组不做任何处理,P L涂抹组使用P L涂抹,空白微针组使用不含有P L的微针,P L微针组使用含有P L的微针,通过大体观察,H&E染色及免疫组化的检测结果,评价PL微针应用于糖尿病小鼠创面愈合的效果.结果 当PVPK60为40 mg/mL时,成针率为100％,阵列完整,针体饱满,针尖锐利.根据力学-位移曲线与砝码压变实验结果显示制备的PL微针具有较好的机械强度.生长因子检测结果显示,PL中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量为(625±35)pg/mL,血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)含量为(18 741±1 287)pg/mL,制备成针后,VEGF 含量为(183±2)pg/mL,PDGF-BB 含量为(8 049±1157)pg/mL,成针后生长因子浓度虽有所降低,但仍较好地保持了生长因子活性.糖尿病小鼠创面愈合实验结果显示,PL微针组愈合较好,创面愈合率相较于前3组有差异(P＜0.01).H&E染色结果显示PL微针组可见较少的炎细胞浸润和出血点;对照组组织内成纤维细胞,新生毛细血管数量均低于PL涂抹组与PL微针组.免疫组化结果显示PL微针组促炎因子IL-6表达下降,抗炎因子TGF-β表达上升,血管新生指标CD31表达上升,且于其他3组有明显差异(P＜0.01).结论 本实验制备的PL微针具有较好的机械性能,能较好地保持生长因子活性,对糖尿病小鼠创面愈合有着积极的作用,为糖尿病创面愈合提供了新思路.

以羧甲基壳聚糖(CMCS)和醛化羧甲基纤维素(CMC-CHO)为原料,制备可溶性CMCS/CMC-CHO复合膜.结果发现:复合膜具有较好的拉伸强度、延展性、透湿性和透光性,且对近紫外光具有良好的阻隔作用;CMCS/CMC-CHO涂膜液对黑曲霉和扩展青霉的抑制效果优于CMCS.草莓涂膜保鲜实验显示,CMCS/CMC-CHO涂膜液的应用效果优于CMCS和CMCS/CMC-CHO/Gly,经7 d贮藏,草莓的腐烂率、质量损失率分别比对照减少了41.94％、10.64％,而硬度、有机酸含量、可溶性固形物含量、还原糖含量和抗坏血酸(VC)含量分别比对照提高了35.11％、36.67％、14.13％、3.51％和 44.30％.

背景:活性生物材料的良好组织相容性和生物活性与神经干细胞的多向分化潜能均有极大的应用前景和应用价值.目的:观察神经营养因子3-壳聚糖活性生物材料支架在体外对神经干细胞的诱导分化作用及神经干细胞神经营养因子3信号通路关键蛋白的表达.方法:提取并纯化新生24 h Wistar大鼠脊髓神经干细胞,分4组进行诱导分化:对照组(单纯培养基组)、可溶性神经营养因子3组、单纯壳聚糖组、神经营养因子3-壳聚糖组.诱导6 h,提取蛋白质行Western Blot检测神经营养因子3信号通路关键蛋白TrkC、Akt/p-Akt、Erk/p-Erk的表达;诱导7 d,行MAP2、MBP、GFAP 免疫细胞化学染色观察神经元的多向分化及各类细胞的分化比例;诱导14 d,行 MAP2、Synapsin-1、PSD95免疫细胞化学染色观察神经营养因子3-壳聚糖活性生物材料是否诱导神经干细胞分化形成神经网络.结果与结论:①神经营养因子3-壳聚糖组诱导神经干细胞高比例分化为神经元,比例为73.8%,明显高于其他3组,同时分化形成的胶质细胞低于其他3组;②神经营养因子3-壳聚糖组中关键蛋白TrkC、p-Akt、p-Erk的表达高于其他3组;③神经营养因子3-壳聚糖可以诱导神经干细胞在体外分化形成神经网络.

目的 制备纳米聚吡咯(polypyrrole,PPy)/甲壳素复合膜并观察其生物相容性.方法 采用微乳液聚合法合成纳米PPy,与壳聚糖共混并成膜后,进行乙酰化改性得到纳米PPy/甲壳素复合膜(A组),制备壳聚糖膜(B组)及经乙酰化改性得到的甲壳素膜(C组)作为对照组,使用扫描电镜、红外光谱观察等方法对纳米PPy、各组膜进行鉴定并测定其导电性.将3组膜与雪旺细胞体外共培养,采用倒置显微镜观察、活细胞染色、细胞计数、免疫荧光染色等方法观察膜的体外生物相容性,使用溶菌酶溶液评价膜的体外降解情况.结果纳米PPy合成后,经红外光谱观察,显示在1 543.4 cm-1和1 458.4 cm-1处出现PPy c=c的特征振动吸收峰;扫描电镜观察发现纳米PPy的粒子聚合体直径为100～ 200 nm.3组膜制备后,红外光谱观察显示,A、C组膜出现乙酰化改性后的1 562 cm-1左右的酰胺Ⅱ谱带特征峰,显示A、C组膜成功乙酰化成甲壳素.导电性检测显示A组膜的电导率为(1.259 2±0.005 7)×10-3 S/cm;B、C组膜均未检测出电导率.扫描电镜观察到A组膜表面有均匀分布的纳米PPy聚合颗粒,对照组光滑平整,显示纳米PPy与壳聚糖共混并改性后成功得到导电纳米PPy/甲壳素复合膜.将雪旺细胞与3组膜共培养,经二乙酸荧光素活细胞染色、可溶性蛋白-100免疫荧光染色及倒置显微镜观察发现,培养的雪旺细胞存活,功能状态良好;共培养2、4d后,细胞计数显示A组膜上细胞增殖数量显著多于B、C组(P＜0.05),显示A组膜表现出比对照组更强的支持细胞黏附增殖的能力.膜的体外降解观察发现各时间点A、C组膜体外降解率均显著高于B组(P＜0.05),表明同等条件下乙酰化改性处理的膜降解性能优于壳聚糖膜.结论 纳米PPy与壳聚糖可成功共混并顺利乙酰化改性,所得纳米PPy/甲壳素复合膜导电可降解,具有较好的体外生物相容性.

目的 通过体外实验和动物实验验证一种富含富血小板血浆的羧甲基壳聚糖可溶性敷料(PRP/CMC敷料)的促凝血和止血效果.方法 1)用血栓弹力图仪比较术益纱(对照组)和PRP/CMC敷料(实验组)体外凝血性能.2)用兔股动脉出血模型观察体内止血效果:将12只新西兰兔制作出股动脉出血后,随机分成3组(n=4),分别用医用脱脂纱布(空白组)、术益纱(对照组)和PRP/CMC敷料(实验组)对兔子的股动脉断端止血,记录止血时间,计算出血量并观察生命体征.结果 1)PRP/CMC敷料组的ACT值为(94.67±25.15)s,小于术益纱组(123.00±16.09) s(P＞0.05)和空白组(141.67±17.90)s(P＜0.05);2) PRP/CMC敷料组的α角度为(77.03±4.63)°,大于术益纱组(74.50±4.82)° (P＞0.05)和空白组(55.87±7.88)°(P＜0.05);3) PRP/CMC敷料组的MA值为(73.00±7.71)mn,大干空白组(66.10±1.54) mm和术益纱组(68.33± 1.86) mm (P＞0.05);4) PRP/CMC敷料组的止血时间为(84.000±10.149)s,小于医用脱脂纱布组(354.000±39.345)s (P＜0.05)和术益纱组(122.000±34.395) s(P＞0.05);失血量为(0.482±0.247)g,小于医用脱脂纱布组(2.443±0.321) g(P＜0.05)和术益纱组(0.572±0.234)g(P＞0.05).结论 富含PRP的羧甲基壳聚糖可溶性敷料是一种止血性能良好的止血产品,可与市场上的同类产品媲美,能明显缩短凝血时间、出血时间,减少出血量.

目的 探讨子宫内膜异位症患者血清附睾分泌蛋白4(HE4)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)及可溶性多配体蛋白聚糖1(Syndecan-1)水平变化及意义.方法 选择子宫内膜异位症患者124例(观察组)、体检健康者100例(对照组),采集两组空腹外周静脉血并分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清HE4、YKL-40及Syndecan-1.对比两组及不同分期、不同痛经程度子宫内膜异位症患者以上指标的变化.结果 观察组血清HE4、YKL-40及Syndecan-1水平高于对照组(P均<0.05).Ⅱ期子宫内膜异位症患者血清HE4、YKL-40及Syndecan-1水平低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P均<0.05),Ⅲ期子宫内膜异位症患者血清HE4、YKL-40及Syndecan-1水平低于Ⅳ期患者(P均<0.05).轻度痛经患者血清HE4、YKL-40及Syndecan-1水平低于中度痛经、重度痛经患者(P均<0.05),中度痛经患者血清HE4、YKL-40及Syndecan-1水平低于重度痛经患者(P均<0.05).血清HE4、YKL-40及Syndecan-1和EMS分期、痛经程度之间均呈正相关(r分别为0.824、0.797、0.912、0.856、0.948、0.786,P均<0.05).结论 子宫内膜异位症患者血清HE4、YKL-40、Syndecan-1水平升高,且三者水平变化可反映患者的分期及痛经程度.

目的 建立一种壳聚糖稀释液的制备方法,并制备一种生物相容性较好、安全性高、可有效提高疫苗免疫效果的兽用疫苗稀释液,以用于草原牧区大规模动物免疫.方法 在酸性条件下溶解壳聚糖,向上清中滴加NaOH使已溶解的可溶壳聚糖析出,制备再生壳聚糖.用不同pH的0.2 mol/L磷酸-柠檬酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液和磷酸盐缓冲液配制1％～5％的壳聚糖以及再生壳聚糖溶液,并在115℃条件下湿热灭菌.通过溶解特性以及外观等条件筛选最佳缓冲体系.利用不同浓度的可溶壳聚糖稀释液(soluble chitosan diluent,SCD)及再生壳聚糖稀释液(regenerated chitosan diluent,RCD)稀释山羊痘活疫苗,通过免疫山羊后的安全性及ELISA抗体水平筛选最佳稀释液配方,并建立最佳稀释液的制备流程.利用制备的稀释液稀释山羊痘活疫苗及猪瘟活疫苗并免疫动物,检测制备的稀释液的安全性及免疫增强作用.结果 筛选得到的最佳稀释液配方及其制备过程为:0.2 mol/L pH 4.0醋酸-醋酸钠缓冲液配制3％浓度的壳聚糖溶液,离心去除杂质后,上清滴加NaOH至沉淀完全析出;收集再生壳聚糖,用0.2 mol/L pH 4.6醋酸-醋酸钠缓冲液配制成2％浓度的再生壳聚糖溶液,115℃湿热灭菌30 min;用1 mol/L无菌醋酸钠溶液调pH至6.0并稀释至终浓度0.5％,即为0.5％ pH 6.0的RCD.使用该稀释液配制疫苗,仅免疫1次即可达到其他稀释液配制疫苗免疫2次后的抗体水平,免疫增强作用高于铝胶稀释液,同时具备与生理盐水一致的安全性.结论 本研究利用再生壳聚糖制备了性状优良、pH接近中性、生物相容性好的兽用疫苗稀释液.基于壳聚糖良好的抗原吸附及缓释特性,稀释液可在疫苗注射剂量不足的情况下达到理想的免疫效果,较为适合大规模动物免疫时使用.