目的:探究双氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)和索拉非尼(sorafenib, SOR)诱导未分化甲状腺癌(anaplastic thyroid cancer, ATC)细胞发生铁死亡的协同作用及分子机制。方法:以细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测DHA和SOR对ATC细胞CAL-62增殖及铁死亡的影响；实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11基因(SCL7A11)、脂氧合酶-15(LOX-15)及p53表达水平的变化；对应的检测试剂盒检测铁死亡中间代谢产物乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛、亚铁离子(Fe 2+)、一氧化氮(NO)、活性氧簇(ROS)水平；建立裸鼠肿瘤模型分析DHA和SOR对ATC在体内的抑制作用。 结果:与对照组相比，DHA、SOR和DHA+SOR处理均呈剂量依赖性抑制细胞增殖( P<0.001)，LDH、Fe 2+、丙二醛及ROS含量明显增多，GSH活性明显降低( P<0.001)，其作用均被硫酸亚铁(FeSO 4)促进，被铁抑素-1逆转。与对照组及单独用药组比较，DHA+SOR组15-LOX-2及p53表达上调，GPX4和SCL7A11水平降低( P<0.001)，15-LOX-1蛋白含量差异无统计学意义；此外，DHA+SOR组NO的含量显著降低( P<0.001)。DHA和SOR在体抑制ATC肿瘤生长。 结论:DHA与SOR协同作用上调15-LOX-2基因的表达，抑制NO的合成，从而诱导ATC细胞发生铁死亡。

目的:分析心房颤动（房颤）患者肠道菌群脂多糖合成功能的变化特点及其可能的作用。方法:本研究为前瞻性、横断面研究。选取2016年3月至2018年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院住院的非瓣膜性房颤患者作为房颤组，并选取同期遗传背景匹配的体检者作为对照。收集所有研究对象的临床基线资料及粪便样本，提取肠道细菌DNA，采用Illumina novaseq进行宏基因组学测序。基于宏基因组学测序数据，分析脂多糖合成过程中的同源基因簇（KEGG orthology，KO）、合成酶的编码基因及含有这些酶基因的细菌的丰度。基于LASSO分析，筛选与房颤相关的参与脂多糖合成的关键因子，并采用受试者工作特征（ROC）曲线分析、中介分析和logistic回归分析评价其在房颤发病中可能的作用。结果:房颤组50例，年龄66.0（57.0，71.3）岁，男性32例（64%）。对照组50名，年龄55.0（50.5，57.5）岁，男性41例（82%）。有20个参与脂多糖合成的KO、7个脂多糖合成酶的编码基因和89个同时可编码9个脂多糖合成酶的肠道细菌在对照组与房颤组间存在差异。LASSO回归分析显示，有5个KO、3个酶基因及9个种层级物种被筛选为关键因子，其中富集在房颤组的因子包括：2个KO（K02851和K00972），3个酶基因（LpxH、LpxC和LpxK），7个种层级物种（ Intestinibacterbartlettii、 Ruminococcussp. JC304、 Coprococcuscatus、 unculturedEubacteriumsp.、 Eubacteriumsp. CAG：251、 Anaerostipeshadrus、 Dorealongicatena）。基于上述关键因子构建回归模型，ROC曲线分析示：KO、酶基因、物种分值识别房颤的曲线下面积（ AUC）和95% CI分别为0.957（0.918~0.995）、0.940（0.889~0.991）和0.972（0.948~0.997）。中介分析的结果显示，参与脂多糖合成的肠道细菌的变化可影响房颤发病，其中有35.17%是通过富集相应的KO所介导。多因素logistic回归分析结果显示，KO分值绝对值增大，房颤的发生风险增加（ OR值<0.001，95% CI：<0.001~0.021， P<0.001）。 结论:房颤患者肠道内富集了参与脂多糖合成的细菌，其通过编码脂多糖合成酶基因，使得房颤患者脂多糖合成功能有所上调。

目的:基于规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白（CRISPR/Cas13a）的特异性识别切割与非特异性的“反式切割”活性，建立易操作、检测限低、特异性好的核酸免扩增可视化快速检测方法—基于CRISPR/Cas13a的新型冠状病毒核酸免扩增快速检测技术。方法:参照新型冠状病毒的基因序列，利用生信技术筛选并设计合成多个新型冠状病毒特异的crRNA（CRISPR RNA），以体外转录的通用ssRNA（单链RNA）靶标建立检测技术并优化检测体系，以新型冠状病毒假病毒核酸标准物来评价方法检测限。收集临床样本，其中阳性样本应包含不同的新型冠状病毒变异株，阴性样本包括其他的常见呼吸道病原体（甲型流感病毒/乙型流感病毒、人类副流感病毒、肺炎克雷伯菌等）临床样本。分别用实时荧光定量PCR（qPCR）、数字PCR及本研究建立的免扩增可视化快速检测技术，对各种样本进行检测，分析评价新建立技术的灵敏度和特异度。采用四格表确切概率法针对荧光定量PCR、数字PCR与本技术检测结果进行统计学分析，采用双侧检验， P<0.01为差异有统计学意义。 结果:本研究设计合成了10条crRNA，用于基于CRISPR/Cas13a的新型冠状病毒核酸免扩增可视化快速检测技术的建立与优化，本技术可在最短6 min内检出新型冠状病毒的核酸。利用新型冠状病毒假病毒核酸标准物评价该技术的检测限，结果显示仪器辅助下本技术检测限为14拷贝/μl，肉眼下检测限为28拷贝/μl。以qPCR和数字PCR确认的113份临床样本对所建立的检测技术进行敏感度和特异度分析，利用相关公式及SPSS22软件计算分析，该检测技术的敏感度98.5%（66/67），特异度100%（46/46），本研究建立的基于CRISPR/Cas13a的新型冠状病毒免扩增可视化快速检测技术检测结果与金标准qPCR检测结果差异无统计学意义（ P=1）。 结论:本研究成功建立了一种基于CRISPR/Cas13a的新型冠状病毒核酸免扩增可视化快速检测技术，该技术流程简单、操作便捷，对操作环境要求低，检测限接近qPCR，有较强的现场检测应用潜力。

目的:分析结膜淋巴上皮癌的临床病理学和基因突变特征。方法:回顾性病例系列研究。收集2006年1月至2022年12月于天津市眼科医院诊断为结膜淋巴上皮癌且接受肿瘤切除手术的3例患者资料和4份石蜡标本（其中1例患者先后行2次手术），采用免疫组织化学染色方法检测上皮抗原和淋巴细胞性抗原，采用原位杂交方法检测Epstein-Barr病毒（EBV）编码的RNA（EBER），应用二代测序方法对2例患者的3份标本进行全外显子组测序。结果:3例患者均为男性，年龄均大于65岁，病程3~44个月。均为单眼发病，肿瘤位于球结膜或角结膜缘，呈红色，肿瘤最大径4~20 mm。影像学检查显示肿瘤位于眼球前方，眶骨、眼外肌、视神经和副鼻窦未受累。所有患者均无局部淋巴结转移。病理表现为未分化癌巢伴有显著的反应性淋巴细胞、浆细胞浸润；肿瘤细胞呈广谱细胞角蛋白、上皮膜抗原、肿瘤蛋白40和肿瘤蛋白63阳性，细胞增殖抗原Ki67增殖指数大于80%；淋巴细胞分化簇20阳性、CD3阳性、CD8阳性；原位杂交显示例1患者的2份标本部分瘤细胞表达EBER。二代测序显示3份标本发生体细胞突变的基因个数分别为58、50和36个，突变基因参与的信号通路富集于黑色素瘤信号通路、缺口蛋白1信号通路和大鼠肉瘤同源物家族Q三磷酸鸟苷酶循环；生化过程富集于氨基酸饥饿后反应，程序性坏死，调控脂类合成、钠离子转运和染色体分离等；3份标本均发生突变的基因是癫痫阈值2（SZT2），并且SZT2参与氨基酸饥饿后反应。1例行部分切除手术后40个月行第2次完整切除手术，另外2例行完整切除手术；3例均未行放射治疗或化学治疗，2例未复发，1例失访。结论:结膜淋巴上皮癌伴有明显的淋巴细胞、浆细胞浸润，部分病例与EBV感染有关，结膜淋巴上皮癌存在SZT2等基因突变。

目的:利用规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)-CRISPR相关蛋白9(CRISPR associated protein 9，Cas9)技术对痘苗病毒(vaccinia virus, VACV)胸腺激酶(thymidine kinase，TK)区进行定向重组，建立高效的痘苗病毒靶基因插入重组技术。方法:设计合成靶向TK区的引导RNA(guide RNA, gRNA)对应的2条互补寡核苷酸，磷酸化修饰后变性退火，克隆到去除核定位信号的PX458载体上，同时改造原有TK区重组质粒。将gRNA及Cas9共表达质粒转染293T细胞，介导VACV与TK区重组质粒进行同源重组，然后通过蓝白斑的出现率评估病毒重组率。结果:本研究中设计并合成的gRNA序列介导的重组效率大于1%，高于经典的同源重组方法10倍以上。结论:本研究利用CRISPR/Cas9技术建立了高效痘苗病毒TK区重组体系，为新发突发传染病的疫苗或多价研究以及肿瘤治疗等提供临床前研究技术支持。

目的:不同地区人群肠道菌群分布具有较大差异，本研究旨在探究福建厦门地区牛奶蛋白过敏（CMPA）患儿和健康儿童间肠道菌群的结构与分布，揭示肠道菌群与CMPA发生发展的关联性。方法:收集2022年6月至2023年3月在厦门市儿童医院确诊的30例CMPA患儿的粪便样本，同时收集30例同龄健康儿童粪便样本，通过16S rDNA基因测序和生物信息学方法分析两组人群肠道菌群结构和分布差异。结果:CMPA患儿和健康儿童的肠道菌群结构和分布具有较大差异。组间α多样性指数差异无统计学意义（ P>0.05）。而ANOSIM检验结果显示，两组样本间肠道菌群分布差异有统计学意义（ R=0.037， P<0.05）。β多样性指数PCA分析表明，两组间的菌群结构差异有统计学意义（ P<0.05）。与健康儿童相比，CMPA患儿中嗜黏蛋白阿克曼菌属丰度显著降低，棒状杆菌属丰度显著升高。LEfSe分析显示，变形菌门主要在CMPA患儿中富集，而毛螺菌科主要富集于健康儿童组。此外，KEGG分析表明，CMPA患儿中20条通路的富集度显著降低（ P<0.05），如果糖和甘露糖代谢。COG分析显示CMPA患儿中半乳糖变位旋转酶及其相关酶等通路富集度显著降低（ P<0.05），而预测的金属硫簇生物合成酶等2条通路富集度显著升高（ P<0.05）。 结论:CMPA患儿和健康儿童的肠道菌群结构和分布存在显著差异，提示CMPA的发生发展与肠道菌群有一定相关性。

患者男，63岁。因双眼视物不清1年到济南明水眼科医院就诊。患者无其他伴随症状，既往身体健康，无家族遗传眼病史。眼部检查：右眼、左眼视力分别为0.1、0.12，矫正均不能提高。右眼、左眼眼压分别为13.2、11.3 mm Hg（1 mm Hg= 0.133 kPa）。双眼眼前节未见异常，晶状体轻度混浊，玻璃体轻度混浊。双眼视盘边界清楚、颜色淡红，大血管走行尚可，上下血管弓以内散在黄白色圆点状病灶（图1A）；左眼黄斑区可见卵黄样圆形橘黄色病灶，边界较清晰，视网膜血管跨越其上（图1B）。眼底自身荧光（AF）检查，右眼病灶中部强荧光背景下散在边界清晰的圆点状弱AF，黄斑中心弱AF，病灶整体周边过渡区呈稍弱AF，病灶颞侧显示不易被察觉的细点状弱AF（图1C）；左眼卵黄样病灶呈稍强AF，黄斑中心部分弱AF，病灶整体周边过渡区呈稍弱AF（图1D）。荧光素眼底血管造影（FFA）检查，早期右眼后极部可见大量大小不一、单个点状或融合成簇的强荧光，在暗背景下呈典型的"星空状"表现，黄斑区弱背景荧光（图1E）；左眼后极部可见大量大小不一，单个点状或融合的强荧光，卵黄样病灶处呈圆形弱背景荧光（图1F）。FFA晚期，右眼可见细点状荧光减弱，黄斑区大的点状荧光增强，融合更广（图1G）；左眼细点状荧光减弱，黄斑区出现中心凹弱荧光，外围被环状强荧光包绕（图1H）。光相干断层扫描（OCT）检查，双眼视网膜色素上皮（RPE）/Bruch膜复合体层失去光滑完整的结构，出现多个连续、呈锯齿状的小结节状突起（图1I）；左眼黄斑区视网膜下见大量略强反射物质沉积（图1J）。眼电图检查，患者双眼Arden比正常。患者拒绝行基因检测。临床诊断：双眼表皮玻璃膜疣（cuticular drusen）、左眼卵黄样病变。

目的:建立一种基于RAA-CRISPR/Cas12a的特异性强、灵敏度高的猴痘病毒核酸检测方法。方法:根据已知猴痘病毒基因保守区设计合成重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification, RAA)引物和成簇规律间隔的短回文重复序列RNA(clustered regularly interspaced short palindromic repeats RNA，CRISPR RNA, crRNA)，利用荧光检测技术筛选特异crRNA，通过荧光计数读取CRISPR/Cas12a检测结果，同时对所建立方法的灵敏性和特异性进行评价。结果:建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法，其灵敏度为2.5拷贝/反应，且与鼠痘病毒、痘苗病毒无交叉反应，具有高特异性。结论:建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法，为高效、快速、特异性检测猴痘病毒感染提供了有力工具。

目的 调查成都市售菌菇类食品中唐菖蒲伯克霍尔德菌的污染情况,分析其病原特征,为食品安全风险监测提供支持.方法 参照GB 4789.29-2020,增加了可疑菌落微生物质谱鉴定,对121份菌菇类食品进行检测,并对分离到的菌株进行全基因组测序,分析其遗传特性及与米酵菌酸生物合成相关bon基因的携带情况.结果 121份样品唐菖蒲伯克霍尔德菌的阳性率为50.41％(61/121),其中银耳的阳性率达到67.14％(47/70).4份样品中分离的10株唐菖蒲伯克霍尔德菌携带bon基因簇;存在主要污染银耳的优势克隆群,但未携带bon基因簇.结论 银耳易被唐菖蒲伯克霍尔德菌污染,需加强对重点食品中该致病菌的风险监测,尤其是携带bon基因簇菌株的检测.

本文旨在探究梅(Prunus mume)短链脱氢酶/还原酶(short-chain dehydrogenase/reductase,SDR)基因家族的生物信息学特征以及在花开放阶段的表达模式.通过生物信息学方法,从梅全基因组中鉴定出159个PmSDR基因,并进行保守基序、染色体定位、共线性关系和顺式作用元件分析,结合梅不同开花时期、花器官的转录组数据以及荧光定量PCR技术探究了PMSDR基因家族的表达模式.结果表明,PinSDR基因家族可分为4种类型,同一亚家族成员在保守基序方面具有较高的相似性;PmSDR基因家族不均匀分布在8条染色体上,并且存在大量成簇分布;种间共线性分析发现,与杏(Prunus arme-niaca)相比,梅与桃(Prunus persica)SDR基因家族的同源性更高;该家族基因在启动子区域存在大量与光响应、植物生长发育、激素调节以及逆境响应有关的顺式作用元件.表达模式分析发现,PmSDR基因家族在不同开花时期和花器官的表达水平有较大差异,选择在开花时期表达量明显上调或在花器官中具有高表达量的PmSDR114C1、PmSDR114C16、PmS-DR108E3、PmSDR108E9、PmSDR108E16、PmSDR108E17 和 PmSDR108E19 进行荧光定量 PCR 验证,结果表明 PmS-DR114C1、PmSDR114C16 可能参与梅的花期调控,PmSDR1 08E3、PmSDR108E9、PmSDR108E16、PmSDR108E17 和 PmS-DR108E19可能参与梅的花香物质合成.本研究为探析PmSDR基因的功能提供了理论依据与参考,也为探讨梅开花阶段的分子机制提供了研究依据.