目的:研制人血管内皮生长因子（hVEGF）放射免疫测定（RIA）试剂盒和化学发光免疫测定（CLIA）试剂盒，探讨其在早期肺癌和结直肠癌诊断中的价值。方法:以2种试剂盒的技术指标为参考依据建立检测方法，确定磁微粒包被抗体的工艺方法及 125I和吖啶酯标记抗体的工艺方法，并评价2种试剂盒的分析灵敏度、精密度、回收率。通过检测临床癌症（早期肺癌和结直肠癌）患者和正常人血清样本中的hVEGF，评价2种试剂盒对早期肿瘤诊断的灵敏度和特异度。2组间的比较采用两独立样本 t检验。 结果:磁微粒与包被抗体的最佳比例为1 ml磁微粒∶1 mg抗体； 125I与标记抗体的最佳比例为55.5 MBq 125I∶0.1 mg抗体，吖啶酯与标记抗体的最佳比例为25 μg吖啶酯∶0.2 mg抗体。RIA和CLIA试剂盒的分析灵敏度分别为17.6、9.2 pg/ml。在精密度方面，CLIA试剂盒的批内变异性略高于RIA试剂盒，而批间变异性略低于RIA试剂盒。RIA和CLIA试剂盒的平均回收率分别为103.28%和101.85%，说明CLIA试剂盒检测的准确率更高。在临床样本检测方面，2种试剂盒对早期肺癌和结直肠癌的临床诊断灵敏度和特异度均可达90%以上。RIA试剂盒和CLIA试剂盒检测出正常人血清样本的特异度分别为98.11%（104/106）和99.06%（105/106）。癌症患者与正常人hVEGF测定值相比，差异均有统计学意义（ t=-16.695~-14.920，均 P<0.01）。 结论:2种试剂盒各项技术指标较好，其中CLIA试剂盒的分析灵敏度和特异度更高，在早期肺癌和结直肠癌的诊断中具有一定的临床价值。

目的 基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术,建立一种血清白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)的检测方法.方法 采用双抗体夹心法,分别用吖啶酯标记完整抗体和生物素标记酶切片段抗体,并与待测物IL-6形成夹心复合物,其中生物素再与链霉亲和素包被的磁性固相微粒特异反应发光,通过测量发光信号值进行定量分析;并对其标记抗体稀释缓冲液、标记抗体浓度、样本加样量等进行条件优化;对空白限(LOB)、检出限(LOD)、中间精密度、可报告范围、干扰实验、钩状(HOOK)效应等性能指标进行评价;选择145例血清样本,采用线性回归分析与罗氏电化学发光法进行方法学比对.结果 成功建立一种基于吖啶酯化学发光免疫定量分析技术检测血清IL-6的方法.该方法选择MES-BSA作为标记抗体稀释缓冲液,标记抗体浓度选择0.2 μg/ml,样本加样量选择50μl.该方法的LOB为0.2 pg/ml,LOD为0.5 pg/ml,可报告范围为0.5～30 000 pg/ml,中间精密度＜5.3％.在IL-6达到200 000 pg/ml浓度水平时,未出现HOOK效应现象.在三酰甘油(TG)30 000 μg/ml,血红蛋白(HGB)9 000 μg/ml,胆红素(TBIL)330 μg/ml,类风湿因子(RF)1 500 IU/ml浓度范围内,干扰物质对检测结果无影响.与电化学发光法测定IL-6比对,线性回归方程为Y=0.980 2X-3.487 9,r=0.997 7,两种方法试剂测定结果呈高度相关(P＜0.05).结论 建立了基于吖啶酯化学发光检测血清IL-6的方法,各项指标均符合临床应用要求,适宜在临床实验室推广应用.

为研究臭草(Ruta graveolens L.)地上部分的化学成分及其抗Epstein-Barr病毒(EBV)活性.本研究采用硅胶等柱色谱和制备液相色谱等手段对臭草地上部分的95％乙醇浸提物二氯甲烷萃取部位进行分离纯化,并根据理化性质和谱学数据对化合物结构进行鉴定,鉴定后化合物进行抗EBV活性测试.从臭草乙醇提取物二氯甲烷萃取部分离得到30个化合物,分别鉴定为山小柑碱(1)、2-羟基-3-异丙氧基-1,4-甲氧基-10-甲基吖啶酮(2)、芸香日酮(3)、1-羟基-3-甲氧基-N-甲基吖啶酮(4)、羟甲基吖啶酮环氧化物(5)、rutalinium(6)、(-)-日把里尼定(7)、ribalinium(8)、(+)-ribaline(9)、γ-fagarine(10)、香草木宁碱(11)、合帕洛平(12)、茵芋碱(13)、(-)-去乙酰基芸香苦素(14)、chalepensin(15)、(+)-芸香瑞亭(16)、花椒毒素(17)、补骨酯素(18)、佛手柑内酯(19)、7-preniloxicumarin(20)、异东莨菪素(21)、6-羟基香豆素(22)、东莨菪苷(23)、芸香灵(24)、芸香宁(25)、3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2-丙烯-醇(26)、moskachan D(27)、胡椒基丙酮(28)、芦丁(29)、1,3-disinapoyl-gentiobiose(30),其中化合物 2、7、9、12、20、22、23、26、27、28、30为首次从该植物中获得.将30个化合物均测试其体外抗EBV活性,结果显示在30 μmol/L浓度下,共有6个化合物抑制EB病毒裂解复制达到50％以上,其中化合物5、24,显示较好的抗EB病毒活性,IC5e分别为2.4 μmoVL与4.8 μmoVL,高于阳性对照组(右旋芸香苦素,IC50=7.0 μmol/L).

目的 建立一种脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价.方法 根据双抗夹心法原理,将磁珠-Lp-PLA2抗体1(MAb,Coating)与血清中的Lp-PLA2抗原以及吖啶酯-Lp-PLA2抗体2(MAb,Labeling)反应形成免疫复合物,磁场吸附清洗,加入预激发液和激发液后仪器检测反应过程中相对发光单位(RLU),通过标准曲线方程计算样本中Lp-PLA2浓度,并对试剂各项性能进行评估.结果 本方法空白限为0.5ng/mL,线性范围为5～1000ng/mL,回收率在85％～115％范围内,批内精密度为2.26％～3.80％,批间精密度为3.82％～4.63％,特异性和抗干扰能力符合要求,与热景Lp-PLA2检测试剂盒比对相关系数r=0.9874.结论 本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与现有试剂盒比对结果具有较好的一致性,可供广大研究者借鉴参考.

目的 建造高脂血症性急性胰腺炎实验动物模型,观察高脂血症对急性胰腺炎的胰腺微循环影响.方法 取健康仓鼠30只随机(随机数字法)分为2组:血脂正常组(20只)、高脂血症组(10只),分别予以普通和高脂饲料喂养,4周后由血脂正常组筛出10只血脂正常且肝胆胰无病变者,随机(随机数字法)均分为正常对照组(C组)和急性胰腺炎组(AP组),由高脂血症组筛出5只血甘油三酯升高3倍以上且肝胆胰无病变者,作为高脂血症性急性胰腺炎组(HLAP组).按照Schmidt法制作动物模型,C组仅适当翻动十二指肠与胰腺并进行穿刺操作,HLAP组和AP组行微量输液泵匀速、逆行向仓鼠的胆胰管内泵入3.5％牛磺胆酸钠,6h后于下腔静脉泵入吖啶橙(2 mL/kg),注射完毕后以激光共聚焦显微镜荧光成像系统动态观察活体动物模型胰腺微循环,检测胰腺微循环血管平均直径(microvaseular diameter,MVD)、功能性毛细血管密度(funetional capillary density,FCD)及测量微循环血流速度(microvessel flow velocity,MFV)、白细胞黏附.三组均取胰腺组织制成病理切片,进行胰腺病理评分.结果 与AP组、C组比较,HLAP组胰腺微循环功能指标MVD(μm)、FCD(个/mm2)、MFV(μm/s)显著降低(MVD:HLAP组2.40±0.26和AP组5.54±0.43、C组7.56±0.42;FCD:HLAP组4.20±0.84和AP组7.56±1.14、C组11.40±1.14;MFV:HLAP组58.80±9.63和AP组131.00±12.94、C组224.40±15.63;均P＜ 0.05),白细胞黏附(个/mm2)明显增加(HLAP组343.60±13.86和AP组114.00±8.03、C组18.80±2.28,P＜0.05),胰腺病理评分升高(HLAP组10.00±1.59和AP组6.60±1.14、C组1.00±0.71,P＜0.05).结论 高脂血症可加重急性胰腺炎实验动物的微循环系统损伤,促进微循环障碍.

目的 拟建立一种新型基于吖啶酯平台的乙型肝炎病毒表面抗原全自动管式化学发光定量检测试剂.方法 基于自主研发的全自动化学发光免疫检测系统,通过抗体配对筛选,体系调整等方法建立HBsAg全自动化学发光定量检测试剂,并与罗氏试剂进行定量相关性比较,使用不同亚型标本进行评价.结果 研发的HBsAg定量检测试剂定量范围为0～250 IU/ml,与罗氏试剂检测临床标本具有良好的一致性(r2=0.9794),对国家参考品中的灵敏度参考品检测结果均符合国家标准,试剂对不同亚型的检测性能良好,在0.05～250 IU/ml范围内具有很好的线性(r=0.9990),试剂对国家参考品中的准确度参考品检测结果符合国家标准,稀释400倍检测的可报告上限为100 000 IU/ml,批内精密度均小于10％,批间精密度小于15％.结论 该研发的试剂具有良好的检测性能,具有广阔的应用前景.

目的 建立细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1,简称CY21-1)含量的化学发光微粒子免疫检测方法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA).方法 原核表达制备重组CY21-1(rCY21-1),用其免疫BALB/c小鼠后,收集小鼠脾脏细胞,常规杂交瘤技术与Sp2/O进行融合,制备CY21-1单抗.间接ELISA法筛选可稳定分泌CY21-1抗体的杂交瘤细胞,分别标记微性磁珠(magnetic beads,MB)和吖啶酯(aeridinium ester,AE),筛选可特异检测CY21-1的单抗配对,建立CY21-1 CMIA,同时验证方法的线性及灵敏度,并与同类试剂盒进行比较.结果 经筛选获得了一组能特异检测CY21-1的单抗配对MB*26B5-3E4*AE,建立的CY21-1 CMIA对检测CY21-1校准品的线性范围为0.1～1 000 ng/mL,R2=0.992 3,检测灵敏度为0.076 ng/mL.该方法与美国雅培公司生产的Abbott CY21-1 CMIA诊断试剂盒平行检测250份临床血清标本的结果具有良好的相关性(R2=0.961 6).结论 成功建立了CY21-1 CMIA,且具有良好的线性及灵敏度,为我国肺癌的临床筛查和早期诊断奠定了基础.

目的 开发一种自动化、经济、定量、操作简便、样本易获得的人表皮生长因子受体2(HER2)的检测方法.方法 本研究采用体外诊断化学发光免疫分析法定量检测血清中HER2蛋白的含量,将HER2单克隆抗体作为一抗包被于羧基磁珠上,并将另一二抗标记于吖啶酯上,进行双抗体夹心检测.结果 本研究建立的HER2蛋白检测方法的检测范围为0～500ng/ml,精密度为CV<5％,分析灵敏度(LOD)为0.075ng/ml,功能灵敏度(LOQ)为0.093ng/ml,线性范围为2.135～780.427ng/ml,用HAMA阳性血清测试抗干扰实验,显示对本试剂盒无干扰,加速稳定性实验显示试剂可稳定存放1年.结论 与在售化学发光试剂相比,本文建立的HER2蛋白检测方法在各项分析性能表现优异.成功搭建了HER2蛋白检测的原型试剂.

目的 利用化学发光免疫分析快速法定量检测人血清中NT-proBNP.方法 将生物素和吖啶酯衍生物分别标记识别NT-proBNP抗原的2个抗体,当抗原与试剂混合后形成的双抗体夹心复合物被链霉亲和素磁珠抓捕分离,复合物在激发液的作用下发光,该相对发光强度(RLU)与样本中的NT-proBNP浓度呈正相关.结果 性能分析显示,这种检测方法的线性范围是8 pg/ml ～2 0000 pg/ml,线性相关系数(r)≥0.999,检测下限(LOB) ≤6 pg/ml,其批内精密度≤5％,批间精密度≤8％,添加回收率在88.3％ ～ 106.1％,稀释回收率在93.4％ ～ 106.8％.与罗氏ProBNPⅡ试剂盒比对,检测临床样本的浓度相关性为r2=0.979 7.结论 该试剂盒的优良性能为临床检测人血清中NT-proBNP含量提供了坚实的基础.

目的:探讨牛磺酸(taurine)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和三羟基异黄酮(genistein)3种抗肝纤维化药物联合使用对体外活化大鼠肝星状细胞(HSCs)自噬的影响及可能机制.方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立对照组、联合药物(taurine+EGCG+genistein,TEG)组、自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf-A1)组和联合药物+抑制剂(TEG+Baf-A1)组.采用CCK-8法分别检测各组HSCs的存活率,应用透射电镜观察HSCs内部自噬体超微结构变化,通过吖啶橙(AO)染色和荧光显微镜观察各组细胞内自噬溶酶体变化,Western blot分析自噬标志性蛋白LC3-II和beclin-1的表达.结果:与对照组相比,TEG组、Baf-A1组和TEG+Baf-A1组细胞的存活率明显降低(P<0.05);透射电镜观察到细胞内部出现双层或多层膜结构的自噬体,以及单层膜结构的自噬溶酶体.与对照组相比,AO染色结果显示TEG组和Baf-A1组红色荧光区域显著缩小,TEG组中LC3-II和beclin-1的表达量显著降低(P<0.05).结论:活化的HSCs发生自噬现象,联合药物TEG可阻断HSCs的自噬过程,其作用机制可能与抑制HSCs中自噬体的生成有关.