运用高效液相色谱(HPLC)法比较柴胡-白芍单味、药对配方颗粒与传统汤剂的主要有效成分变化,建立利血平拮抗急性抑郁模型探讨药对合煎与单煎合并的抗抑郁作用差异.采用COSMOSIL5C18-MS-Ⅱ柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相;体积流量1.0mL/min;柱温30℃;进样量10 μL;采用双波长(210、230 nm)检测.酶联免疫吸附剂实验及对相关组织进行HE、Nissl染色分析不同剂型对小鼠抑郁效果的影响.结果表明,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷和氧化芍药苷的含量在柴胡-白芍单味配方颗粒混溶中低于柴胡-白芍药对配方颗粒与传统汤剂;柴胡-白芍单味配方颗粒混溶组、柴胡-白芍药对配方颗粒组和传统汤剂组均能使小鼠脑内5-羟色胺、多巴胺水平明显提高(P＜0.05,P＜0.01);血清中白细胞介素-6、白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),抗炎因子白细胞介素-10显著升高(P＜0.05,P＜0.01);肝组织中超氧化物歧化酶不同程度地升高,丙二醛显著降低(P＜0.05,P＜0.01).HPLC检测方法重复性好,稳定可靠.通过抑制炎症和缓解氧化应激,柴胡-白芍药对配方颗粒与传统汤剂较柴胡-白芍单味配方颗粒混溶改善抑郁症状显著.

目的 建立UPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b1、b2.方法 使用Acquity UPLC BHE C18 色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相:水-乙腈,梯度洗脱;检测波长:254 nm;体积流量:0.3 mL/min;柱温:30℃;进样量3 μL.结果 柴胡皂苷b1、b2 线性范围分别为 0.006～0.374 mg、0.003～0.214 mg,平均回收率分别为 98.97%、99.35%,RSD值分别为 1.82%、1.16%.结论 所建立方法准确、稳定,重现性好,可用于小柴胡颗粒的质量控制和评价.

目的 探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法 大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只.除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周.全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P＜0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P＜0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P＜0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P＜0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P＞0.05).结论 柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-KB/NLRP3信号通路的表达有关.

目的 研究miR-199b-5p在新肾病1号方抗肾纤维化中的作用.方法 36只大鼠随机分为假手术组、模型组及新肾病1号方低、中、高剂量(9.69、19.38、38.76g/kg)组和氯沙坦(50mg/kg)组,每组6只.除假手术组外,其余各组采用左侧单侧输尿管梗阻方法建立大鼠肾纤维化模型,给予药物干预14d后,检测各组大鼠肾功能;苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察肾脏组织病理变化;对假手术组、模型组和新肾病1号方高剂量组大鼠肾脏组织进行miRNA测序,筛选差异表达miRNAs,qRT-PCR验证,并进行靶基因的基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,生物信息学分析 miRNAs 与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、肾纤维化的关联性.免疫荧光法和Western blotting检测肾组织EMT相关蛋白表达情况.结果 与模型组比较,新肾病1号方组大鼠血清肌酐(serum creatinine,SCr)和血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平均明显降低(P＜0.05、0.01),肾组织病理变化有所改善.miRNA测序分析发现,miR-199b-5p在模型组表达上调,而在新肾病1号方高剂量组表达下调,qRT-PCR验证了其mRNA相对表达量与测序结果基本一致;miR-199b-5p的靶基因中与EMT、肾纤维化相关功能的90个.与模型组比较,新肾病1号方组肾组织中EMT相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)表达下调(P＜0.05、0.001),E-钙黏蛋白(E-cadherin)和紧密连接蛋白-1(Zonulao ccludens-1,ZO-1)表达上调(P＜0.05).结论 新肾病1号方可能通过下调miR-199b-5p表达,抑制EMT,从而发挥抗肾纤维化的作用.

目的:对小花清风藤Sabia parviflora Wall.ex Roxb.的化学成分进行研究.方法:采用硅胶柱、Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶、制备HPLC等色谱方法,对小花清风藤中的化学成分进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据分析鉴定化合物结构.结果:从小花清风藤茎叶的醇提物中分离得到 15 个三萜类化合物,分别鉴定为:3β-羟基-Δ11,13(18)-齐墩果二烯(1)、3-氧-11α-羟基,Δ12-齐墩果烯(2)、3β-羟基-Δ9(11),12-齐墩果二烯(3)、3-氧-Δ11,13(18)-齐墩果二烯(4)、3α-羟基-齐墩果酸甲酯(5)、3-氧-Δ9(11),12-齐墩果二烯(6)、3α,21β-二羟基,Δ12-齐墩果烯(7)、2α,3α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(8)、马斯里酸(9)、积雪草酸(10)、2α-羟基乌苏酸(11)、23-羟基乌苏酸(12)、柴胡皂苷 b3(13)、柴胡皂苷c(14)、柴胡皂苷f(15).结论:除化合物 5 以外,其他化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物 7～15 为首次从该属植物中分离得到.

目的 研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 ①将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100～800 μmol·L-1孵育24h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100 μmol·L-1孵育24h)组,MTT法检测细胞存活率.②将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24h),模型组(CORT 400 μmol·L-1 孵育24h)和模型+SSb2组(SSb2 1.5625,3.125,6.25,12.5和25 μmol·L-1预处理3h,去上清,然后加入CORT 400 μmol·L-1及对应浓度SSb2共孵育24 h).MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率.③将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb2 12.5 μmol·L-1组,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的代谢组学技术检测PC12细胞代谢轮廓变化;比色法检测谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性.结果 ①与细胞对照组相比,当CORT浓度为400 μmol·L-1时,细胞存活率降低至(55±6)%(P<0.01);SSb2浓度>50 μmol·L-1时,对PC12细胞有显著的细胞毒性(P<0.01).②与细胞对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),LDH释放率显著降低(P<0.01).③与细胞对照组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞凋亡率显著降低(P<0.05).代谢组学结果表明,SSb2能显著回调谷氨酸、肌酸、N-乙酰天冬氨酸、L-酪氨酸、柠檬酸、L-异亮氨酸、乳酸、谷氨酰胺和胆碱9个差异代谢物.对SSb2调控的关键代谢物进一步富集分析表明,SSb2主要影响5条代谢通路,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,酪氨酸代谢和精氨酸生物合成.与细胞对照组相比,模型组谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞谷氨酸含量(P<0.01)和谷氨酰胺酶活性显著升高(P<0.05).结论 SSb2对CORT诱导的PC12细胞损伤具有神经保护作用,其机制与抑制细胞凋亡和调节代谢紊乱有关.

采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法,依据"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"建立北柴胡饮片和北柴胡配方颗粒的指纹图谱,并进行相似度评价,确定共有特征峰.采用SPSS 22.0和SIMCA14.1软件进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析,筛选影响饮片和配方颗粒质量的差异性成分.结果显示,10批北柴胡饮片有24个共有峰,相似度均不低于0.985;20批北柴胡配方颗粒有16个共有峰,相似度在0.858～0.998.共指认了 6个共有峰,分别为柴胡皂苷c(峰6)、柴胡皂苷f(峰7)、柴胡皂苷a(峰9)、柴胡皂苷d(峰18)、柴胡皂苷b2(峰28)、柴胡皂苷b1(峰29).聚类分析和主成分分析结果一致,北柴胡饮片和北柴胡配方颗粒各为一类,有16个峰的变量重要性投影(VIP)值大于1,可能是二者的差异性物质.建立的指纹图谱法简便可行、重复性好,可用于评价北柴胡饮片和北柴胡配方颗粒的质量.

目的 通过酶水解柴胡皂苷B1 获取中药活性成分前柴胡皂苷A,并构建关键技术.方法 以单因素试验考察水解酶、缓冲液pH值、酶/底物质量比、反应温度和反应时间等影响因素,并通过响应面实验设计对酶水解条件进行优化;此后,利用LC-MS、1 H-NMR、13 C-NMR确定产物的化学结构.结果 柴胡皂苷B1 的最佳水解酶为蜗牛酶,在0.20 mol/L HAc-NaAC缓冲液(pH 4.5)中,当酶与柴胡皂苷B1 的质量比为30 ∶ 1 时,于56℃下反应33h后,水解率高达 99.1%,产物经鉴定为前柴胡皂苷A.结论 本研究构建的酶水解关键技术获取前柴胡皂苷A更便捷,不产生柴胡皂苷元副产物,反应过程中不使用无机酸,清洁环保,可为大量制备前柴胡皂苷A以开展药理药效研究奠定基础.

目的 比较柴胡酒炙前后的总黄酮和皂苷类成分质量分数的变化.方法 运用紫外可见分光光度法(UV-Vis法)测定生柴胡和酒柴胡饮片中总黄酮的质量分数;运用高效液相色谱法(HPLC)测定生柴胡和酒柴胡饮片中柴胡皂苷a(SSa)、柴胡皂苷b1(SSb1)、柴胡皂苷b2(SSb2)和柴胡皂苷d(SSd)的质量分数;运用单因素方差分析判断2种柴胡中总黄酮和各皂苷类成分之间差异是否有统计学意义以及差异结果.结果 柴胡酒炙后,总黄酮的质量分数升高;炮制后SSa、SSd的质量分数降低,SSb1、SSb2质量分数大大增加.结论 酒炙法可增加柴胡中总黄酮、SSb1、SSb2的质量分数,减少SSa和SSd的质量分数.

目的 研究柴胡皂苷b2(SSb2)对肝癌细胞增殖的影响,并进一步探讨柴胡皂苷b2抑制肝细胞癌发生发展的分子机制.方法 将细胞分为空白对照组(NC)、SSb2 组、沉默信息调节因子 6(SIRT6)si-RNA 组(si-SIRT6)、si-SIRT6+SSb2组,NC组与SSb2组分别加入含阴性质粒的转染溶液,si-SIRT6组和si-SIRT6+SSb2组加入含si-SIRT6质粒的转染溶液,转染24 h后,SSb2组和si-SIRT6+SSb2组加入80 mg·L-1的SSb2,各组继续转染24 h.检测各组HepG2细胞中腺苷三磷酸(ATP)含量、细胞上清液中葡萄糖以及乳酸的含量,用蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SIRT6、缺氧诱导因子1α(HIF1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达水平变化.结果 NC组、SSb2组、si-SIRT6组和si-SIRT6+SSb2 组细胞的 ATP 含量分别为(36.81±2.42)、(26.22±2.09)、(74.16±2.65)和(33.95±2.00)μmol·gprot-1,葡萄糖摄取量分别为(1.41±0.07)、(0.49±0.05)、(1.86±0.10)和(1.06±0.12)mmol·L-1,乳酸生成量分别为(7.09±0.30)、(4.13±0.25)、(11.49±0.68)和(5.76±0.27)mmol·L-1,SIRT6 蛋白相对表达水平分别为 0.29±0.06、0.70±0.06、0.06±0.03和0.17±0.04,HIF1α蛋白相对表达水平分别为0.18±0.03、0.06±0.03、0.44±0.04和0.22±0.04,GLUT1蛋白相对表达水平分别为0.63±0.05、0.30±0.09、1.34±0.12 和 0.51±0.09.上述指标,SSb2 组与 NC比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);si-SIRT6组与NC比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01);si-SIRT6+SSb2组与SSb2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 SSb2在体外可以抑制肝癌细胞的增殖,其作用可能是通过调控SIRT6介导的糖代谢通路实现的.