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外泌体负载枸杞miR2911调控Wnt/β-catenin信号通路促进非梗阻性无精子症大鼠生精功能恢复
编辑人员丨5天前
目的:研究外泌体负载的枸杞miRNA(Lb-miR2911)药物通过跨界调控Wnt/β-catenin信号通路对非梗阻性无精子症(NOA)大鼠模型生精功能恢复的影响.方法:4 周龄雄性SD大鼠30 只,采用白消安腹腔注射方法构建NOA模型,造模5 周后将模型大鼠随机分为模型组(MC)、Lb-miR2911EXO治疗组(Lb-miR2911EXO)、外泌体空载治疗组(Sham),每组10 只.MC组NOA模型大鼠自然恢复,无特殊处理;Lb-miR2911EXO组NOA模型大鼠,睾丸生精小管注射外泌体包被Lb-miR2911 药物(0.1 mg/kg),1 次/周,共治疗 3 次;Sham组NOA模型大鼠,睾丸生精小管注射外泌体空载药物(0.1 mg/kg),1 次/周,共治疗3 次.另取10 只同龄正常健康SD大鼠作为正常对照组(NC).治疗后第2、6 周采用RNA FISH技术观察Lb-miR2911 药物在睾丸组织中的摄取及代谢变化;治疗后 12周采用转录组测序分析结合 Western 印迹、RT-PCR 方法检测各组大鼠睾丸组织中细胞增殖、精子发生及Wnt/β-catenin信号通路的基因表达;睾丸组织形态学及精子质量分析比较各组大鼠生精功能恢复情况;通过组织形态学分析结合血清TNF-α、IL-1β、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等指标检测评估Lb-miR2911 外泌体药物对大鼠组织器官毒性.结果:治疗12 周后睾丸组织形态学分析发现Lb-miR2911EXO组大鼠睾丸组织各层次生精细胞排列规则,管腔中可见大量成熟精子,与Sham组比较,Johnsen评分显著增加(P<0.05),睾丸重量、睾丸指数、精子浓度和精子活力显著增加(P<0.05);转录组测序分析结合Western 印迹、RT-PCR方法证实,与MC组相比,Lb-miR2911EXO组DACT3 基因表达下调(P<0.05),而DVL2、β-catenin表达上调,同时p-DVL2及β-catenin(nucleus)蛋白含量增加(P<0.05);细胞增殖相关基因CCND1、CCNE1、CCNE2 mRNA表达上调(P<0.05);精子发生相关基因 DMC1、CCR6、JAM2、KLC3 表达上调(P<0.05);组织器官毒性检测表明:治疗后Lb-miR2911EXO组大鼠肺部、肝脏、肾脏组织未见病理性变化,与NC组比较血清TNF-α、IL-1β、AST、ALT、肌酐或尿素氮等水平未见升高(P>0.05).结论:外泌体负载的Lb-miR2911 药物通过跨界调节DACT3/Wnt/β-Catenin信号通路促进了NOA大鼠生精功能恢复.
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编辑人员丨5天前
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微小RNA-140-5p下调Jagged1抑制肾透明细胞癌迁移、侵袭及血管生成
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-140-5p介导Jagged1对肾透明细胞癌(ccRCC)迁移、侵袭及血管生成能力的影响。方法:选取福建省漳州市医院泌尿外科2019年4月至2020年12月经肾癌根治术患者的肾透明细胞癌及癌旁组织标本17例,选取购自美国菌种保藏中心肾透明细胞癌细胞系(786-0)和肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2),荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-140-5p的表达。免疫组织化学检测ccRCC组织中Jagged1的表达。将786-0细胞分为miRNA阴性对照组(miR-NC组)、过表达miR-140-5p组(miR-140-5p组)、Jagged1阴性对照组(Jagged1-NC组)、敲减Jagged1组(si-Jagged1组)。使用划痕、transwell小室和血管生成实验,分别检测细胞迁移、侵袭和血管生成的改变。RT-qPCR检测miR-140-5p过表达后Jagged1 mRNA的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测Notch/Jagged1信号通路中Jagged 1蛋白的表达。计量资料比较采用 t检验,计数资料采用 χ2检验。 结果:ccRCC组织(0.318±0.144)中miR-140-5p的表达量显著低于正常肾组织(1.028±0.033),差异有统计学意义( t=-19.787, P<0.01);786-0肾癌细胞(0.295±0.064)中miR-140-5p的表达量显著低于HK-2正常肾细胞(1.009±0.157),差异有统计学意义( t=-8.366, P<0.01);在体外,miR-140-5p组的细胞迁移率(0.394±0.015)、侵袭细胞数(142.000±17.874)和血管管腔样结构的形成数(46.000±5.291)显著少于miR-NC组的细胞迁移率(0.548±0.020)、侵袭细胞数(267.000±26.357)和血管管腔样结构的形成数(74.000±8.000),差异有统计学意义( t=-10.362、-14.445、-5.056, P<0.01);与miR-140-5p相反,ccRCC组织中Jagged1的表达(92.30%)显着高于正常肾组织(36.67%),差异有统计学意义( χ2=5.356, P<0.05) ;si-Jagged1组的细胞迁移率(0.429±0.011)、侵袭细胞数(130.533±19.379)和血管管腔样结构的形成数(45.333±3.214,)都显著少于Jagged1-NC组的细胞迁移率(0.495±0.025)、侵袭细胞数(252.466±19.231)和血管管腔样结构的形成数(66.000±3.605),差异有统计学意义( t=-3.999、-17.297、-7.410, P<0.05);miR-140-5p组中Jagged1 mRNA的相对表达量(0.434±0.150)显著低于miR-NC组(1.026±0.265),差异有统计学意义( t=-3.425, P<0.05)。miR-140-5p组(0.336±0.159)中Jagged1蛋白的表达较miR-NC组(0.900±0.121)降低,差异有统计学意义( t=-4.901, P<0.01)。 结论:miR-140-5p可抑制ccRCC的进展,miR-140-5p可能下调Jagged1抑制ccRCC迁移、侵袭及血管生成。
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编辑人员丨5天前
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微小RNA工程化外泌体在糖尿病创面中的作用研究进展
编辑人员丨5天前
糖尿病创面是糖尿病患者常见的并发症之一,治疗较为困难。目前,糖尿病创面的治疗方法包括清创、功能性敷料覆盖、负压治疗、骨水泥填充、皮肤移植等。微小RNA(miRNA)工程化外泌体具有减轻炎症、刺激血管生成、促进胶原沉积和再上皮化等功能,在糖尿病创面修复中展现出巨大潜力,相关研究正在积极开展。该文对糖尿病创面的病理生理特征、miRNA与外泌体的特性、外泌体负载miRNA的工程化方法和miRNA工程化外泌体促进糖尿病创面愈合的机制进行综述,以期为miRNA工程化外泌体在糖尿病创面中的临床应用提供参考依据。
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编辑人员丨5天前
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尿外泌体与糖尿病肾病的研究进展
编辑人员丨5天前
糖尿病肾病(DKD)是终末期肾病的主要病因之一。尿外泌体可携带肾单位所有细胞来源的蛋白质、miRNA、RNAs,可调节下游靶细胞的生物学活动,在细胞通讯中发挥重要作用。最新研究表明,尿外泌体中富含的生物学信息可作为DKD非侵入性的生物标志物,并在DKD致病机制方面表现出潜在的研究价值,为DKD的诊治提供了新的方法。本文就尿外泌体在DKD中的研究进展和应用前景作一综述。
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编辑人员丨5天前
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微小RNA-200家族在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义
编辑人员丨5天前
目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-200家族在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达,并分析其表达与预后的关系。方法:纳入95例原发ccRCC组织,及其配对的癌旁正常肾组织,另外纳入19例确定为ccRCC远处转移的癌组织。所有组织标本均来自2018年1月至12月,于吉林大学中日联谊医院泌尿外科就诊的ccRCC患者。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分析miR-200家族的3个成员:miR-200b、miR-200c和miR-141在ccRCC组织、正常肾组织,以及远处转移灶中的表达,并在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中进行验证。应用X-tile算法计算miR-200b、miR-200c和miR-141的最佳临界值,并据此将患者分别分为miR-200b、miR-200c和miR-141高表达和低表达组。应用生物信息学方法分析其生物学功能。应用SPSS 19.0统计软件分析,组间比较采用方差分析。miR-200b、miR-200c和miR-141与无病生存期的关系应用COX多因素回归分析进行分析。结果:与正常肾组织比较,肿瘤组织中miR-200b、miR-200c和miR-141的表达(20.51±14.92、13.95±8.61、0.22±0.11)显著降低,差异有统计学意义( F=5.391、8.443、3.295, P值均<0.01),在转移灶中,miR-200b和miR-141的表达(12.51±6.79、0.11±0.61)进一步降低,差异有统计学意义( F=7.047、2.841, P值均<0.01);miR-200b、miR-200c和miR141与肿瘤大小( F=13.274、15.557、10.492, P<0.05)、TNM分期( F=11.399、8.292、9.879, P<0.05)以及肿瘤复发有相关( F=5.836、6.277、8.519, P<0.05);miR-200b、miR-200c和miR-141的阳性表达是影响ccRCC患者无病生存期的独立危险因素(miR-200b, HR=0.41,95% CI=0.29~0.73, P<0.05;miR-200c, HR=0.46,95% CI=0.22~0.87, P<0.05;miR-141, HR=0.42,95% CI=0.21~0.81, P<0.05);三者共同参与了肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)通路、磷脂酰肌醇蛋白聚糖通路(GLYPICAN)通路、血管内皮生长因子(VEGF)通路、GLYPICAN-1网络、质膜雌激素受体(PMER)通路和上皮-间充质转化(EMT)通路。 结论:miR-200b、miR-200c和miR-141三者共同参与了多种肿瘤信号传导通路,可作为ccRCC预后的标志物。
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编辑人员丨5天前
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基于全转录组测序分析核糖核酸氧化影响胰岛β细胞的分子机制
编辑人员丨5天前
目的:探索高糖诱导核糖核酸氧化增加对胰岛β细胞功能和活性的影响及分子机制。方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤INS-1细胞,高糖干预后同位素稀释超高效液相串联质谱(ID LC MS/MS)评估核酸氧化。利用8-氧代鸟苷-5'-三磷酸酯(8-oxoGTP)体外模拟INS-1细胞RNA氧化增加,CCK-8评估细胞增殖,流式细胞术评估细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)评估胰岛素(INS)、胰-十二指肠同源盒1(PDX1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Casp3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶6(Casp6)基因信使RNA(mRNA)表达,全转录组测序分析RNA氧化影响INS-1细胞的分子机制。结果:高糖致INS-1细胞RNA氧化增加。RNA氧化增加抑制INS-1细胞增殖,降低INS和PDX1基因mRNA水平,促进凋亡相关casp3和casp6基因mRNA合成。全转录组测序分析发现,RNA氧化增加导致INS-1细胞内mRNA、长链非编码RNA(lncRNA)、微RNA(miRNA)和环状RNA(circRNA)差异表达,显著下调Mafa、Pdx1、Pax6和Mnx1转录因子,上调rno-miR-124-3p,rno-miR-133a-3p,rno-miR-3120,rno-miR-212-3p,rno-miR-7a-2-3p,促使相关lncRNAs差异表达,从而抑制胰岛素合成和分泌及β细胞增殖。结论:RNA氧化增加下调β细胞关键转录因子mRNAs水平,促使相关非编码RNA(ncRNA)特别是lncRNAs差异表达,影响β细胞胰岛素合成和分泌,抑制细胞增殖,是2型糖尿病(T2DM)β细胞功能障碍和活性降低的重要原因。
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编辑人员丨5天前
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达格列净对2型糖尿病早期糖尿病肾病患者尿外泌体微RNA的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨达格列净对2型糖尿病(T2DM)早期糖尿病肾病(DKD)患者尿外泌体微RNA(miRNA)的影响。方法:选取2018年9月至2019年9月于徐州医科大学附属淮安医院内分泌科住院的T2DM早期DKD患者60例。将纳入的患者按照尿微量白蛋白与尿肌酐比值(UACR)进行分组,其中30 mg/g
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编辑人员丨5天前
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遗传学因素对2型糖尿病第一时相胰岛素分泌的影响
编辑人员丨5天前
第一时相胰岛素分泌下降或缺失是2型糖尿病β细胞功能障碍的病理生理学特点,基因变异及表观遗传学改变影响第一时相胰岛素分泌。β细胞膜上ATP敏感钾通道(K ATP+)、L型钙通道及胰岛素胞吐基因变异降低第一时相胰岛素分泌。K ATP+通道调节蛋白基因变异一方面通过降低K ATP+亚基磺酰脲类受体1(SUR1)或内向整流钾通道(Kir6.2)水平,另一方面使K ATP+关闭障碍降低第一时相胰岛素分泌;β细胞膜L型钙通道调节蛋白基因变异通过降低L型钙通道活性或数量使第一时相胰岛素分泌下降;胞吐相关基因突变通过降低质膜停靠的胰岛素颗粒数量,减少囊泡融合及释放,进而降低第一时相胰岛素分泌。此外,DNA甲基化改变、组蛋白乙酰化修饰及miRNA表达异常等表观遗传学改变通过影响胰岛素胞吐蛋白表达减少第一时相胰岛素分泌。
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编辑人员丨5天前
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miR-141靶向FZD4调节Wnt/β-catenin信号通路促进糖尿病肾病的进展
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-141在糖尿病肾病进展中的作用及其潜在机制。方法:通过脂质体转染法分别将 miR-141、miR-141 mimic、miR-141 sponge转入人肾小球系膜细胞中,高糖培养构建体外模拟糖尿病肾病模型。利用流式分析和ELISA法检测miR-141对细胞凋亡和炎症反应的影响。TargetScan数据库预测 miR-141的下游靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证两者的结合作用。过表达靶基因FZD4,检测FZD4对miR-141在高糖培养的肾小球系膜细胞中发挥的具体作用。利用Western印迹法检测下游Wnt/β-catenin信号通路及下游靶基因的变化。结果:miR-141的上调促进了细胞凋亡以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达( P<0.05);miR-141的下调抑制了细胞凋亡以及TNF-α、IL-6的产生( P<0.05)。miR-141负调控FZD4的表达,FZD4的过表达逆转了miR-141对高糖培养肾小球系膜细胞凋亡和炎症因子分泌的促进作用( P<0.05)。敲低miR-141显著促进了Wnt/β-catenin的表达,抑制FZD4则减弱了Wnt/β-catenin的表达( P<0.05)。siβ-catenin可以消除miR-141的干扰及对照高糖培养肾小球系膜细胞凋亡比例和炎症因子分泌的差异( P<0.05)。 结论:miR-141通过靶向FZD4调控Wnt/β-catenin信号通路,促进糖尿病肾病的进展。
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编辑人员丨5天前
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Linc01278对前列腺癌细胞生物学行为的影响及机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)Linc01278对前列腺癌细胞增殖、侵袭迁移、肿瘤表型的影响及分子机制。方法:收集2018年12月至2019年12月商丘市第一人民医院泌尿外科确诊的46例前列腺癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织中Linc01278及miR-145的表达含量。培养人前列腺癌细胞PC-3,采用细胞转染技术将PC-3细胞分为:空白组、对照组、过表达组及恢复组。空白组未予以任何处理,对照组转染空白对照载体及miRNA阴性对照,过表达组转染Linc01278过表达载体及miRNA阴性对照,恢复组转染Linc01278过表达载体及miR-145模拟物(mimics)。双荧光素酶报告基因实验分析Linc01278与miR-145的结合作用。Transwell实验检测各组细胞侵袭迁移能力;CCK-8法检测各组细胞增殖能力。Western blot检测各组细胞中Oct4与Sox2的表达含量;qPCR检测各组细胞中Oct4、Sox2及miR-145的表达含量。结果:相比癌旁组织,Linc01278在前列腺癌组织中显著高表达(0.012±0.002 vs 0.022±0.002)( P=0.0072),miR-145则显著低表达(0.117±0.011 vs 0.081±0.007)( P=0.0005),两者表达呈负相关( P=0.0012)。Targetscan分析发现Linc01278转录本804-825位置与miR-145存在碱基互补配对。双荧光素酶报告基因结果显示miR-145 mimics可显著下调Linc01278的荧光素酶活性( P<0.01)。相比空白组及对照组,过表达组侵袭及迁移细胞、相对增殖能力及Oct4与Sox2 mRNA及蛋白表达均显著增高,miR-145表达显著降低( P<0.05);而相比过表达组,恢复组侵袭及迁移细胞、相对增殖能力、Oct4与Sox2 mRNA及蛋白表达均显著降低,miR-145表达显著增高( P<0.01)。 结论:Linc01278可通过特异性吸附miR-145,从而促进前列腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。
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编辑人员丨5天前
