目的:探讨尿nephrin对危重新生儿发生急性肾损伤(AKI)的早期预测价值。方法:选择2016年7月至10月苏州大学附属儿童医院新生儿重症监护室(NICU)收治的患儿为研究对象，根据NICU住院期间是否发生AKI，分为AKI组和非AKI组。检测患儿入NICU第1个24 h尿nephrin水平，并于入NICU 24 h内行新生儿急性生理学评分(SNAP)。以多元线性回归分析评估尿nephrin与各变量的关系。以多因素 Logistic回归分析评估在校正混杂因素后尿nephrin与AKI的关系，采用受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)评估尿nephrin对新生儿AKI的早期预测价值。 结果:共纳入156例新生儿，16例(10.2%)在NICU住院期间发生AKI。AKI组尿nephrin、尿白蛋白及SNAP评分的中位数分别为0.27 μg/mg uCr、0.48 g/g uCr、9分，而非AKI组尿nephrin、尿白蛋白及SNAP评分的中位数分别为0.16 μg/mg uCr、0.16 g/g uCr、7分。AKI组尿nephrin( Z＝-3.201， P＝0.001)、尿白蛋白水平( Z＝-2.652， P＝0.008)及SNAP( Z＝-2.611， P＝0.009)显著高于非AKI组。多元线性回归分析显示，新生儿尿nephrin水平与尿白蛋白显著相关( B＝0.488， SE＝0.117， P<0.001)。多因素 Logistic回归分析显示，在校正胎龄、出生体质量、性别、SNAP、机械通气、呼吸暂停后，尿nephrin与AKI显著相关( P＝0.018)，其预测新生儿AKI的AUC值为0.746(95% CI：0.606～0.886， P＝0.001)。 结论:尿nephrin作为肾小球损伤的生物标志物与AKI的发生显著相关，对危重新生儿AKI的发生有早期预测价值。

目的:探讨巨噬细胞Bruton酪氨酸激酶（Btk）基因特异性敲除对糖尿病小鼠肾脏损害的作用及机制。方法:选用巨噬细胞Btk基因特异性敲除（Btk -/-）小鼠和C57BL/6N小鼠链脲菌素（STZ，50 mg/kg）造模成功后随机分为正常组、糖尿病组、Btk -/-组和Btk -/-糖尿病组。12周后测定小鼠一般指标，观察肾组织病理学改变，免疫荧光检测肾组织巨噬细胞标志物CD68表达，免疫组化检测足细胞标志物WT1和Nephrin的表达，Western印迹检测细胞外基质纤维连接蛋白（FN）、IV型胶原（IV-Col）及转化生长因子β1（TGF-β1），巨噬细胞激活标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、磷酸化（p）-Btk，炎性因子白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路p-p38MAPK、p-JNK、p-ERK以及核因κB（NF-κB）通路p-p65、p-IκB蛋白水平变化；实时荧光定量PCR检测炎性因子IL-1β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA表达。 结果:与糖尿病组相比，Btk -/-糖尿病组尿白蛋白明显减少，肾组织损伤明显减轻，肾脏巨噬细胞CD68表达明显减少，足细胞标志物WT1及Nephrin表达明显增加，细胞外基质FN、IV-Col及TGF-β1表达明显减少，炎性因子IL-1β、TNF-α及MCP-1表达明显降低，p-JNK、p-ERK、p-p38MAPK及p-p65、p-IκB表达明显下调（均 P<0.05）。 结论:巨噬细胞Btk特异性敲除可能通过MAPK、NF-κB通路降低炎性因子的表达从而对糖尿病小鼠肾脏起到保护作用。

目的:探讨大黄素对早期糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法:选取健康雄性SD大鼠40只，按数字表法随机分为对照组10只和实验组30只。对照组大鼠实验过程中采用普通饲料喂养。实验组30只大鼠采用高糖、高脂饮食喂养4周后，一次性腹腔注射链脲佐菌素（40 mg/kg）的方法，制备DN模型，取造模成功的大鼠随机分为DN组和大黄素治疗组（DN+大黄素组）。造模成功后，DN组继续高糖、高脂饮食；DN+大黄素组给予高糖、高脂饮食，联合大黄素（20 mg/kg）灌胃，每天1次，连续8周。各组大鼠在实验14周末观测以下指标：（1）收集24 h尿液，测定24 h尿蛋白量；（2）完成尿液收集后称体质量并记录；（3）处死后取腹主动脉血检测肾肌酐 、尿素氮 、血糖；（4）取左侧肾脏，苏木精-伊红（HE）染色、过碘酸希夫染色（PAS）观察肾脏病理改变，免疫组织化学染色观察Nephrin、Desmin蛋白的表达情况；（5）取右侧肾脏肾皮质部位组织，电镜下观察足细胞及基底膜变化情况。 结果:实验组大鼠30只，DN大鼠模型造模成功24只，实验过程中DN组及DN+大黄素组大鼠各死亡2只。（1）14周末对照组、DN组、DN+大黄素组大鼠体质量分别为（350.1±14.16）、（265.2±7.62）、（312.1±11.77）g，差异有统计学意义（ F=136.50， P<0.001）。（2）对照组肾肌酐 、尿素氮 、血糖、24 h尿蛋白分别为（28.88±4.36）μmol/L、（8.76±0.50）mmol/L、（9.81±0.86）mmol/L、（3.60±0.79）mg；DN组分别为（92.30±7.30）μmol/L、（29.41±6.67）mmol/L、（25.10±4.10）mmol/L、（35.23±4.07）mg；DN+大黄素组分别为（52.10±5.80）μmol/L、（14.93±1.03）mmol/L、（16.51±1.14）mmol/L、（13.35±1.89）mg。与对照组比较，DN组、DN+大黄素组肾肌酐、尿素氮、血糖、24 h尿蛋白量均升高；与DN组比较，DN+大黄素组各项指标均降低：差异均有统计学意义（ P值均<0.01）。（3）HE染色观察肾组织形态学：对照组肾小球及肾小管结构未见异常；DN组肾小球硬化，肾小囊狭窄，部分肾小管上皮细胞空泡变性；DN+大黄素组肾小球硬化及肾小囊狭窄均有改善。（4）PAS染色观察肾小球毛细血管袢、系膜基质变化情况：对照组肾小球毛细血管袢结构清晰可见，系膜基质无异常；DN组肾小球毛细血管袢结构模糊，系膜基质增多；DN+大黄素组肾小球毛细血管袢结构较模糊，系膜基质较多。（5）免疫组织化学检测Nephrin及Desmin蛋白表达情况：与对照组比较，DN组、DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值均降低，Desmin蛋白光密度值均增加；与DN组比较，DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值增加，Desmin蛋白光密度值降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.01）。（6）透射电镜观察足细胞和基底膜变化情况：对照组足细胞轻度水肿，足突均匀、等宽排列，未见融合，基底膜完整，厚薄均一，3层结构明显；DN组足细胞呈中度水肿，足突明显融合、变宽，基底膜厚薄均一，3层结构明显；DN+大黄素组足细胞呈轻度水肿，足突融合、变宽情况减轻，基底膜厚薄均一。 结论:大黄素能显著改善早期DN大鼠的体质量、肾脏病理结构及功能，其机制可能与抑制足细胞发生EMT、促进肾病蛋白Nephrin的表达和减少足细胞EMT骨架蛋白Desmin表达有关。

目的:探讨艾塞那肽对糖尿病肾病小鼠足细胞的作用。方法:通过给予C57BL/6J小鼠高脂饮食并注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型，按随机数字表法将其分为糖尿病肾病对照组(DN组， n＝8)、艾塞那肽干预组(DN＋Ex组， n＝8)。同时将普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC组， n＝8)。干预结束后，测定血糖、肾功能和尿微量白蛋白/肌酐比值，采用过碘酸希夫染色(PAS)观察小鼠肾小球病理学改变，实时定量PCR分析肾小球组织中促纤维化分子Ⅳ型胶原蛋白(Collagen Ⅳ)、转化生长因子-β(TGF-β)和纤维连接蛋白(Fibronectin)基因转录水平，免疫荧光染色及电镜观察足细胞损伤及凋亡情况，Western印迹法检测肾小球组织中裂孔膜肾病蛋白(Nephrin)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)表达水平。 结果:与DN组相比，DN＋Ex组小鼠尿微量白蛋白/肌酐比值显著降低( P<0.01)。PAS染色及分析发现，艾塞那肽干预治疗改善了糖尿病肾病小鼠的肾小球系膜基质增生和肾小球肥大( P<0.05)。实时定量PCR显示，与DN组小鼠相比，DN＋Ex组小鼠的肾小球组织中Collagen Ⅳ、TGF-β和Fibronectin基因表达下调( P<0.01)。免疫荧光染色和电镜显示，艾塞那肽干预治疗改善了糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤及凋亡。Western印迹法发现，艾塞那肽干预后糖尿病小鼠肾小球组织中的Nephrin水平升高( P<0.01)、Cleaved caspase-3水平下降( P<0.01)、p-Akt水平升高( P<0.01)。 结论:艾塞那肽能够改善糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤及凋亡，减少蛋白尿，从而延缓糖尿病肾病的进展。这种保护作用可能与激活肾小球中磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信号通路有关。

目的:探讨白藜芦醇通过上调1型糖尿病小鼠肾脏自噬水平减轻足细胞损伤的机制。方法:选取健康雄性无特定病原体级昆明小鼠28只，以8只健康昆明小鼠作为正常对照组（NC组），剩余20只小鼠给予链脲佐菌素建立1型糖尿病小鼠模型，将造模成功的18只小鼠随机分为糖尿病组（DM组， n=9）和白藜芦醇干预组（Res组， n=9）。12周末检测24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平，采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹法检测沉默信号调节因子1（SIRT1）、叉头状转录因子O1（FoxO1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、自噬接头蛋白（P62）、裂孔膜蛋白肾病蛋白（nephrin）及足突蛋白（podocin）的表达水平及磷酸化FoxO1（p-FoxO1）/FoxO1。免疫组织化学法观察足细胞nephrin、podocin的表达，应用HE染色及电镜的方法观察肾小球形态及超微结构的变化。多组间比较采用方差分析，组内比较采用LSD- t法。 结果:与NC组相比，DM组肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白升高（ t=-39.57、-28.17、-57.31，均 P<0.05），SIRT1、LC3Ⅱ、nephrin及podocin表达减少，P62表达增多（均 P<0.05），p-FoxO1/FoxO1升高（0.71±0.03比0.32±0.01， t=-38.81， P<0.05），光镜及电镜显示肾小球、基底膜及足细胞结构损伤。Res组与DM组相比，肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白降低（ t=30.89、16.39、49.64，均 P<0.05），SIRT1、LC3Ⅱ、nephrin及podocin表达增高，P62表达减少（均 P<0.05），p-FoxO1/FoxO1降低（0.42±0.01比0.71±0.03， t=27.47， P<0.05），光、电镜显示以上损伤减轻。 结论:白藜芦醇通过激活SIRT1/FoxO1通路提高肾脏自噬水平，对糖尿病小鼠肾脏足细胞起保护作用。

目的:探讨microRNA-26a-5p（miR-26a-5p）对糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease，DKD）足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:（1）体内实验：4周龄db/db小鼠按数字表法被分为db/db组、db/db+agomir-NC组、db/db+miR-26a-5p agomir组，每组10只，设同周龄db/m小鼠10只作为正常对照组。饲养至10周龄时观察各组小鼠肾组织病理改变，检测肾脏肥大指数（kidney weight/body weight，KW/BW）、空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）和尿白蛋白肌酐比（urinary albumin to creatinine ratio，ACR）等指标；采用荧光原位杂交法观察miR-26a-5p的定位，实时荧光定量PCR法测定肾组织miR-26a-5p水平，免疫组化及Western印迹法测定瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（transient receptor potential cation channel-6，TRPC6）和Nephrin表达。（2）体外实验：小鼠足细胞（MPC5）被分为正常糖组、高渗组、高糖组、高糖+miR-26a-5p mimic组和高糖+mimic-NC组共5组，测定各组足细胞miR-26a-5p及TRPC6和Nephrin蛋白的表达水平，通过荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p和TRPC6 mRNA的靶向结合关系。结果:（1）体内实验：与db/m小鼠相比，db/db小鼠肾组织光镜下见肾小球体积增大，电镜下见基底膜增厚，足突融合率增加，ACR、FBG和血脂升高（均 P<0.01），miR-26a-5p及Nephrin表达减少（均 P<0.05），而TRPC6表达增多（ P<0.05）；与db/db+agomir-NC组相比，db/db+miR-26a-5p agomir组小鼠肾脏病理改变减轻，肾组织TRPC6表达和ACR降低（均 P<0.05），Nephrin表达增多（ P<0.05）。（2）体外实验：与正常糖组比较，高糖组足细胞miR-26a-5p表达减少（ P<0.01），Nephrin表达减少而TRPC6表达增多（均 P<0.05）；与高糖+mimic-NC组比较，高糖+miR-26a-5p mimic组足细胞TRPC6表达减少（ P<0.05），Nephrin表达增加（ P<0.05）；荧光素酶实验提示miR-26a-5p靶向调节TRPC6表达。 结论:DKD足细胞中miR-26a-5p表达减少，miR-26a-5p可以通过抑制TRPC6表达减轻DKD足细胞损伤。

目的:探讨miRNA-192靶向调控Wilms肿瘤蛋白1(WT1)在高糖诱导足细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法:以人肾小球足细胞为研究对象，将细胞分为4组：空白对照组、高糖组、阴性对照组、miRNA-192抑制组。采用Western印迹检测各组足细胞表面标志蛋白肾病蛋白(nephrin)、WT1、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平；qRT-PCR检测各组细胞miRNA-192、WT1、TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平；采用双荧光素酶靶标实验验证miRNA-192与WT1基因的靶向关系。结果:与空白对照组相比，高糖组和阴性对照组nephrin的蛋白表达水平显著降低，差异有统计学意义( F＝444.404， P<0.05)；miRNA-192相对表达量升高而WT1蛋白及mRNA表达水平均降低( F＝184.216、243.543、107.898， P均<0.05)；双荧光素酶报告基因实验分析结果显示，WT1是miRNA-192的靶基因；与空白对照组相比，高糖组和阴性对照组TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高( FTGF-β1蛋白＝69.014， P<0.05； Fα-SMA蛋白＝87.644， P<0.05； FTGF-β1 mRNA＝147.714， Fα-SMA mRNA＝247.584， P<0.05)。与阴性对照组相比，miRNA-192抑制组nephrin的蛋白表达水平升高( t＝16.519， P<0.05)，miRNA-192相对表达量降低、WT1蛋白及mRNA表达水平升高( tmiRNA-192＝10.533， tWT1＝17.088、8.186， P均<0.05)；TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA蛋白表达水平均降低( tTGF-β1蛋白＝6.114， P<0.05； tα-SMA蛋白＝7.941， P<0.05； tTGF-β1 mRNA＝8.239， tα-SMA mRNA＝8.481， P均<0.05)。 结论:miRNA-192靶向调控WT1促进糖尿病肾病的发展，其作用机制可能与足细胞EMT有关；抑制miRNA-192的表达可减轻高糖诱导的足细胞EMT。

目的:观察黄芪甲苷（astragaloside IV，AS-IV）联合糖皮质激素干预治疗嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside，PAN）肾病大鼠的疗效，并探讨其相关机制。方法:40只150~180 g无特定病原体级健康雄性Wistar大鼠被随机分为对照组、模型组（PAN组）、黄芪甲苷干预组（PAN+AS-IV组）、甲泼尼龙（MP）干预组（PAN+MP组）和AS-IV+MP干预组（PAN+AS-IV+MP组）。采用单次尾静脉注射50 mg/kg PAN的方法建立PAN肾病模型。药物干预组于造模同时分别给予40 mg·kg -1·d -1 AS-IV灌胃和15 mg·kg -1·d -1 MP腹腔注射，连续治疗10 d，实验第11天收集各组大鼠血液、24 h尿液和肾组织标本。用全自动生化仪检测尿蛋白量、尿肌酐、血清白蛋白（Alb）水平；Western印迹法检测足细胞标志蛋白nephrin、Rho家族蛋白RhoA、Rac/Cdc42的相对表达量；免疫荧光法检测各组大鼠肾组织nephrin、synaptopodin蛋白的表达。 结果:与对照组比较，PAN组大鼠尿蛋白/肌酐比值（uPCR）显著升高，Alb水平显著降低，足细胞标志蛋白nephrin相对表达量明显下调，RhoA、Rac/Cdc42蛋白相对表达量显著上调（均 P<0.01）。与PAN组比较，PAN+AS-IV组和PAN+AS-IV+MP组血清Alb水平显著升高（均 P<0.01），PAN+MP组（ P<0.05）和PAN+AS-IV+MP组（ P<0.01）uPCR显著降低。Western印迹结果显示，与PAN组比较，各药物干预组（PAN+AS-IV组、PAN+MP组和PAN+AS-IV+MP组）肾组织nephrin相对表达量显著升高，RhoA、Rac/Cdc42相对表达量显著降低（均 P<0.01）。免疫荧光结果显示，PAN组足细胞标志蛋白nephrin、synaptopodin表达较对照组明显减少，各药物干预组肾组织nephrin、synaptopodin表达较PAN组均升高，其中PAN+AS-IV+MP组改善最显著。 结论:AS-IV及糖皮质激素均可改善PAN诱导的肾足细胞损伤，且两者联合使用有协同增强的保护作用，可能与抑制Rho家族信号的激活有关。

目的:研究骨化三醇联合奥美沙坦酯治疗早期2型糖尿病肾病(T2DN)的效果及其对肾脏足细胞损伤的机制。方法:回顾性分析2019年1月至2022年1月本院收治的86例早期T2DN患者的临床资料，根据不同治疗方法分为观察组和对照组，每组各43例。对照组单用奥美沙坦酯治疗，观察组联用奥美沙坦酯与骨化三醇治疗；比较两组治疗前、后的血糖指标水平、肾功能指标水平、血压、24 h尿蛋白定量(24hUP)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)水平、足细胞损伤指标以及治疗后总有效率、不良反应发生率。结果:治疗前，两组患者的糖化血红蛋白(HbA1c)、餐后2h血糖(2hPG)、空腹血糖(FPG)、肾小球滤过率(GFR)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、24hUP、UACR、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平及足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)、膜蛋白(podocin)排泄量比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)；治疗后，两组患者的HbA1c、2hPG、FPG、BUN、Scr、SBP、DBP、24hUP、UACR、α-SMA水平与足细胞裂孔膜蛋白、膜蛋白排泄量较治疗前下降，GFR水平较治疗前升高，差异均有统计学意义( P<0.05)；治疗后，观察组的HbA1c、2hPG、FPG、BUN、Scr、SBP、DBP、24hUP、UACR、α-SMA水平与足细胞裂孔膜蛋白、膜蛋白排泄量较对照组更低，GFR水平与总有效率较对照组更高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。两组的不良反应发生率比较，差异无统计学意义(9.30% vs.4.65%， P>0.05)。 结论:骨化三醇联合奥美沙坦酯治疗早期T2DN的效果显著，可减轻患者肾足细胞损伤，改善其血糖、血压、尿蛋白及肾功能，减少不良反应。

目的:探讨体外高糖环境和糖尿病肾病小鼠模型足细胞昼夜节律的变化，以及褪黑素改善糖尿病肾病足细胞损伤的作用机制。方法:体外培养原代足细胞并将其分为对照组、高糖（30 mmol/L）组和高糖（30 mmol/L）+褪黑素（0.1 mmol/L或0.5 mmol/L）组。地塞米松（100 nmol/L）作用足细胞2 h，记为授时因子时间0点，每4 h收获细胞，持续24 h。6～8周龄体重20 g左右雄性C57BL/6J小鼠被随机（区组随机分组）分为对照组、糖尿病肾病（高脂饮食+尾静脉注射120 mg/kg链脲菌素）组和糖尿病肾病（高脂饮食+尾静脉注射120 mg/kg链脲菌素）+褪黑素（20 mg/kg灌胃）治疗组（褪黑素组）。采用实时荧光定量PCR法检测足细胞生物钟基因的mRNA表达量。Western印迹法检测生物钟基因蛋白Clock 、Bmal1，足细胞标志蛋白Nephrin、Synaptopodin、WT1、Desmin，以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达量；免疫荧光染色法检测小鼠肾组织WT1蛋白表达；免疫组化法检测小鼠肾组织P62和Cleaved-caspase-3蛋白的表达水平；电镜下观察小鼠肾组织肾小球病理改变。 结果:（1）地塞米松重置足细胞生物钟基因的表达和昼夜节律振荡，与对照组比较，高糖组 Clock和 Ck1e mRNA表达的昼夜节律振荡丢失，高糖+褪黑素组 Clock和 Ck1e mRNA表达的昼夜节律振荡部分恢复（均 P<0.05）。（2）与对照组相比，高糖组Nephrin、Synaptopodin和WT1蛋白表达均较低，Desmin蛋白表达较高；与高糖组相比，高糖+0.5 mmol/L褪黑素组Nephrin、Synaptopodin和WT1蛋白表达均较高，Desmin蛋白表达较低（均 P<0.05）。（3）体内实验结果显示，与糖尿病肾病组比较，褪黑素组小鼠尿白蛋白/肌酐比值较低，肾小球Nephrin和WT1蛋白表达均较高，足突宽度和肾小球基底膜厚度均较低（均 P<0.05）。与对照组比较，糖尿病肾病组小鼠足细胞Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达均较低，P62蛋白表达较高（均 P<0.05）；与糖尿病肾病组比较，褪黑素组小鼠肾小球Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达均较高，P62蛋白表达较低（均 P<0.05）。 结论:褪黑素可通过部分恢复高糖环境下足细胞生物钟基因的昼夜节律振荡，改善足细胞自噬水平，减轻高糖引起的足细胞损伤。