氧化应激(OS)是指机体遭受各种有害刺激时产生过多的活性氧自由基而无法及时清除,导致氧化系统和抗氧化系统平衡失调,引起组织或细胞功能紊乱和损伤的一种状态.OS与男性不育症(MI)关系密切,OS通过影响精子发生,损伤精子膜、脱氧核糖核酸(DNA)、线粒体,降低精子运动能力,加速细胞凋等途径使精子质量下降,导致MI.研究发现,单味中药的有效成分多糖类化合物(黄芪多糖、党参多糖、枸杞多糖、黄精多糖、山茱萸多糖、当归多糖、女贞子多糖、石斛多糖),黄酮类化合物(菟丝子总黄酮、槲皮素、紫云英苷、羊藿苷、金丝桃苷),皂苷类化合物(人参皂苷、蒺藜皂苷、薯蓣皂苷元),苯丙素类化合物(五味子甲素、姜黄素、白藜芦醇),环烯醚萜苷类化合物(桃叶珊瑚苷),氮苷类化合物(红景天苷),低聚糖类化合物(巴戟甲素),苯乙醇苷类化合物(肉苁蓉苯乙醇苷)多肽类化合物(牡蛎肽)具有抗氧化作用,可提升雄性动物MI模型的生殖功能.

目的 考察炮制对加味拱辰浓缩丸化学成分的影响.方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)法对生品组(山萸肉+当归)、炮制品组(酒萸肉+酒当归)、酒当归组(酒当归+山萸肉)、酒萸肉组(酒萸肉+当归)样品进行定性鉴别,主成分分析、正交偏最小二乘判别分析筛选差异成分,HPLC法测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、没食子酸、阿魏酸、马钱苷酸、绿原酸、藁本内酯、5-羟甲基糠醛的含量.结果 共鉴定出 97 种成分,包括有机酸、环烯醚萜、苯肽、皂苷、核苷、氨基酸,生品组、炮制品组、酒当归组、酒萸肉组中分别鉴定出 90、88、89、86 种成分.与生品组和酒当归组比较,酒萸肉组和炮制品组中有机酸总含量升高,环烯醚萜苷总含量接近;酒萸肉组中藁本内酯含量最高.结论 酒萸肉的加入可增加加味拱辰浓缩丸组方配伍合理性,酒当归的加入也具有一定协同增效作用.

目的 山茱萸Fructus Corni及其炮制品(酒制山茱萸和盐制山茱萸)临床上广泛应用,对其进行系统化学成分分析,以期阐释山茱萸及其不同炮制品间差异性成分.方法 结合全球天然产物交互分子网络平台(global natural products social molecular networking,GNPS)技术,采用超高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对山茱萸化学成分进行全成分分析;采用主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)等方法分析山茱萸及其不同炮制品主要差异成分信息.结果 通过与对照品比对、数据库匹配及GNPS分子网络分析,从山茱萸中共鉴定出117个化学成分:44个环烯醚萜类成分、22个鞣质类成分、2个三萜类成分、19个黄酮及其苷类成分、21个有机酸类成分,9个其他类成分;其中12个首次从山茱萸中报道(含9个潜在新成分).PCA(R2X=0.888,Q2=0.647)和 PLS-DA(R2X=0.858,R2Y=0.92,Q2=0.763)对山茱萸及其炮制品进行分析,共筛出 32个化学标记物.结论 对山茱萸水提物中化学成分进行较为全面分析,为其药效物质基础及质量控制研究奠定基础.同时较全面分析了山茱萸及其不同炮制品间的差异性成分,也为山茱萸不同炮制品的临床合理应用提供技术指导.

脑梗死和心肌梗死是严重威胁人类健康的重大疾病,具有相似的危险因素、病理机制和康复难题.其中脑梗是全球死亡和残疾的首位原因,约占全球5%的伤残调整年和10%的死亡率,我国每年新发心肌梗死超过250万人,死亡人数超过100万人.尽管及时溶栓药物治疗、经皮冠状动脉介入治疗等治疗方法可以挽救部分脑梗、心肌梗死(心梗)患者生命,但是对于严重的脑梗后遗症和陈旧性心肌损伤,目前仍缺乏有效的治疗方法.干细胞具有自我更新和分化潜能,以及强大的营养和分泌功能,为受损脑组织和心肌组织再生修复提供可能.但干细胞移植治疗由于干细胞体内容易扩散,很难在损伤部位定植存活,影响治疗效果.通过药物手段激活内源性神经再生和心肌再生具有很大优势,将成为今后治疗脑梗和心梗的重要策略.莫诺苷是我们从中药山茱萸中提取的环烯醚萜苷类单体化合物.在大鼠脑缺血再灌注模型上,我们发现莫诺苷能显著促进卒中后神经干细胞增殖和分化,促进内皮祖细胞增殖和血管芽生,进而促进内源性神经发生、血管新生过程,维持血脑屏障完整性并促进微循环网络重构,最终改善缺血侧皮层神经元功能,修复受损神经功能.在大鼠心梗模型上,我们发现莫诺苷能够促进急性心梗后的心肌细胞增殖、血管新生,改善心脏纤维化和心肌肥大,发挥心脏保护作用.表明莫诺苷可能具有促进脑梗和心梗后内源性干细胞再生、迁移到受损部位弥补坏死的脑组织或心肌细胞、以及促进微循环重构的能力.我们对莫诺苷调控干细胞增殖的机制和靶点进行探索,发现Eph信号通路参与莫诺苷对脑梗和心梗后再生修复的作用.以上研究为将莫诺苷开发成为再生修复治疗心脑血管疾病有效药物奠定基础,为解决临床康复治疗难题、改善脑梗和心梗预后带来希望.

目的 研究山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对D-GalN联合TNF-α造成的肝细胞损伤模型的保护作用.方法 提取并分离、制备CIG;体外培养人源性肝细胞L-02,建立D-GalN/TNF-α致L-02细胞损伤模型,以总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞内钙离子浓度为指标,观察CIG对损伤肝细胞的保护作用;Western blot检测p-PERK、p-eIF-2α、caspase-3蛋白的表达,进行机制研究.结果 44 mg·L-1 D-GalN联合100μg·L-1 TNF-α可作为细胞损伤模型的剂量.CIG高、中、低剂量预保护组可明显提高损伤细胞的活性,明显提高损伤细胞的SOD活性、T-AOC能力,与模型组比较差异具有显著性(P<0.05),降低MDA活性,但低浓度组对MDA活性的降低不明显;Western blot结果显示,CIG不同浓度组可以明显降低内质网应激关联蛋白p-PERK、p-eIF-2α、凋亡关联蛋白caspase-3表达.结论山茱萸环烯醚萜苷对D-GalN/TNF-α造成的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与增强细胞的抗氧化能力,降低内质网应激造成的损伤,降低凋亡相关蛋白的表达有关.

通过网络检索、分类与汇总的方法对国内外文献中报道的山茱萸环烯醚萜苷类化学成分进行综述,并对其中含量最高的马钱苷与莫诺苷的药理作用及药物动力学特点进行总结,其药理作用表现为抑制神经退行性病变(抑制Ca“失衡、抗氧化应激的损伤、神经保护作用、抑制细胞凋亡、抗炎)、抗血栓、抑制黑素、治疗糖尿病等方面.

目的 优选山茱萸总环烯醚萜苷的提取、纯化工艺.方法 以总苷含量为指标,选择料液比、乙醇浓度和提取温度为考察因素,采用L9(34)正交试验来优选提取工艺;选择洗脱剂浓度及用量为考察因素,采用单因素试验考察SP825型大孔吸附树脂的纯化工艺.结果 山茱萸总环烯醚萜最佳提取工艺为料液比1∶25、乙醇浓度10％、提取温度95℃.纯化工艺为10％乙醇洗脱10 BV.结论 优选的山茱萸总环烯醚萜苷提取工艺稳定可行,SP825型大孔吸附树脂可富集山茱萸总环烯醚萜苷.

目的 观察山茱萸环烯醚萜苷对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力和脑组织病理变化的影响,探讨其相关机制.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组和山茱萸环烯醚萜苷低、中、高剂量组.采用永久性双侧颈总动脉结扎(2VO)手术造模,术后6 h开始灌胃给药,每日1次,共3个月.Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力,物体识别实验评价大鼠识别记忆能力.免疫组化染色检测脑组织存活神经元和胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达.结果 永久性2VO术后3个月,模型组大鼠逃避潜伏期延长,识别指数降低,海马和大脑皮层NeuN阳性神经元存活数减少,ChAT表达降低;与模型组比较,山茱萸环烯醚萜苷各剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,识别指数升高,海马和大脑皮层NeuN阳性神经元存活数增多,海马ChAT表达升高.结论 山茱萸环烯醚萜苷通过保护神经元和促进ChAT表达从而改善VD大鼠的认知功能障碍.

目的:测定不同产地19批山茱萸中5种环烯醚萜苷类成分的含量.方法:采用高效液相色谱(HPLC)-一测多评(QAMS)法.色谱柱为Agilent XDB-C18,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,进样量为15μL,检测波长为240 nm.以山茱萸中的马钱苷为内参物,建立其与山茱萸中另外4种环烯醚萜苷类成分即莫诺苷、当药苷、山茱萸苷和山茱萸裂苷之间的相对校正因子并进行适用性评价后计算4种成分的含量;另采用HPLC-外标法测定19批药材中上述5种成分的含量,比较两种方法测定结果的差异,验证QAMS法的准确性.结果:在适用性评价中,不同试验条件下4种成分的相对校正因子的RSD均小于2％;两种测定方法下,4种成分的含量比较差异均无统计学意义(P均大于0.05).结论:本研究建立的HPLC-QAMS法可用于山茱萸中5种环烯醚萜苷类成分的含量测定,且方法准确、可靠、快速,成本更低.

目的:从溶出层面,对山茱萸-地黄配伍后山茱萸中活性成分马钱苷、莫诺苷变化进行研究,探讨中药配伍优势.方法:分别测定山茱萸,山茱萸-地黄配伍后在胃肠溶液中的溶出度,采用HPLC法,考察配伍后山茱萸中马钱苷、莫诺苷含量变化.结果:与单味山茱萸比较,配伍后山茱萸中马钱苷、莫诺苷含量提升明显.结论:配伍地黄后,山茱萸活性成分煎出溶出量提高,马钱苷、莫诺苷与地黄成分间存在相互作用.