目的 基于网络药理学与分子对接技术探讨广藿香抗肝癌的作用靶点及信号通路,阐明其可能的作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库检索广藿香的化学成分、作用靶点,运用Uniprot数据库对靶点名称进行规范,利用GeneCards数据库及OMIM数据库收集肝癌作用靶点,使用Venny 2.1 网站将广藿香作用靶点与肝癌靶点取交集,通过STRING平台构建蛋白质相互作用(PPI)网络图,采用DAVID网站进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.通过Cytoscape 3.8.2 软件用于构建"药物-活性成分-靶点-疾病"网络,筛选出核心靶点,并将活性成分与排名前 5 位的核心靶点进行分子对接.结果 筛选出 10个广藿香主要活性成分及 165个活性成分作用靶点,123 个交集靶点.核心靶点为蛋白激酶B(Akt)、肿瘤蛋白P53(TP53)、白细胞介素-6(IL-6)、转录因子AP-1(JUN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(CASP3).GO分析表明广藿香对肝癌的治疗作用主要涉及RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、转录的正调控和DNA模板化等 283 条生物过程,蛋白质结合、相同蛋白质结合和RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端区序列特异性DNA结合等 57 个分子功能,核和胞质溶胶等 26 个细胞组分;KEGG富集分析得到 95 条信号通路,主要包括癌症通路、乙型肝炎、人类T淋巴细胞病毒Ⅰ(HTLV-I)感染、肿瘤蛋白、磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/Akt等信号通路.分子对接结果显示,广藿香有效成分能够与核心靶点有效结合.结论 广藿香可通过作用于 Akt1、TP53、IL-6、JUN、CASP3 等靶点,调控乙型肝炎、HTLV-I感染、PI3K/Akt等信号通路发挥肝癌治疗作用.

目的:建立高良姜-广藿香配伍溶液的质量标准.方法:针对高良姜-广藿香配伍溶液,高良姜素、广藿香酮2种指标性成分的薄层鉴别方法分别为:薄层板为硅胶G薄层板和高效硅胶G薄层板,展开剂为石油醚-乙酸乙酯(5∶3)、(5∶1);高良姜素、广藿香酮2种指标性成分高效液相色谱含量检测方法为:色谱柱为C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)、流动相为甲醇(A)-0.2%磷酸(B)、检测波长:310 nm、梯度洗脱.结果:对于高良姜-广藿香配伍溶液中高良姜素、广藿香酮2种指标性成分,薄层鉴别主斑点清晰、阴性对照无干扰;2种指标性成分的浓度在10.00～1 000.00 μg/mL、10.00～640.00 μg/mL范围内与峰面积线性关系系数分别为R2=0.999 0、R2=0.999 9;精密度RSD分别为 0.63%、0.56%,稳定性RSD分别为 1.82%、0.24%,重复性RSD分别为 1.30%、0.89%;平均回收率分别为 103.19%、100.87%(RSD为别为 0.93%、0.4%,n=9);该2种指标性成分的含量应分别不低于233.71 μg/mL、61.48 μg/mL.结论:建立的方法可用于高良姜-广藿香配伍溶液的质量控制,该方法精密度、准确度、稳定性及重复性均符合要求.

目的 研究香附Cyperi Rhizoma的化学成分及其抗炎活性.方法 利用硅胶、Sephadex LH-20 和制备型正相HPLC对香附 95%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.以脂多糖诱导的小鼠小胶质细胞BV-2 炎症模型评价其抗炎活性.结果 从香附中分离得到15个化合物,鉴定为:24-methylenecycloartenone(1)、cyperenal(2)、patchoulenone(3)、4,5,6,7,8,8a-六氢-3,4,8,8-四甲基-1H-3a,7-亚甲基甘菊环-4-醇甲酸酯(4)、4-烯-广藿香醇(5)、cyperenol(6)、cyperolactone(7)、(-)-caryophyllene oxide(8)、humulene epoxideⅡ(9)、humulene diepoxide A(10)、α-tocopherol(11)、litseachromolaevane A(12)、hyperhubein G(13)、nootkatone(14)和mustakone(15).化合物4和11可显著抑制NO的释放,抑制率分别为(49.17±0.01)%和(51.91±0.05)%.结论 本文首次使用制备型正相HPLC技术对香附石油醚层进行系统分离,化合物 2、6、9～11 和 13为首次从莎草科植物中分离得到,化合物12为首次从莎草属植物中分离得到,化合物4、5和7为首次从香附中分离得到.化合物4 和11有较强的体外抗炎活性.

目的 建立香砂养胃丸气相色谱指纹图谱及多成分含量测定的方法.方法 采用气相色谱法建立香砂养胃丸指纹图谱并进行峰归属,同时测定柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、α-香附酮的含量.结果 56 批香砂养胃丸样品的指纹图谱相似度 0.33～0.99,共匹配出共有峰 28 个,指认出化合物 14 个.柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、α-香附酮在测定范围内(14.30～286.08、24.52～490.44、16.14～322.88、9.40～187.95、15.39～307.83、25.78～515.60、19.95～398.90、24.87～497.30 μg·mL-1)呈良好呈线性关系;平均加样回收率分别为 101.20%、97.90%、93.97%、94.23%、102.94%、100.54%、99.16%、98.31%;RSD 分别为 2.41%、1.48%、1.65%、2.00%、1.93%、2.30%、2.07%、2.38%;8 种成分的浓度分别为 0.2～959.1、0.3～420.4、1.0～542.6、0.0～64.5、0.0～364.2、0.0～339.6、0.0～130.7、0.0～82.0 μg·g-1.结论 所建立的气相色谱指纹图谱及多成分含量测定方法可用于香砂养胃丸的质量控制和评价.

目的 建立散寒化湿颗粒(Sanhan Huashi Granules,SHG)的HPLC特征图谱,并对全部特征峰进行化学成分指认和药材来源归属,为其整体质量评价提供科学依据.方法 采用Waters Atlantis T3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;体积流量为1.0mL/min;柱温为30℃;检测波长为250nm,建立SHG的HPLC特征图谱.采用UHPLC-QTOFMS、NMR、对照品比对及定向分离技术对10个特征峰进行了准确的化学成分指认并归属处方药味来源,并对20批制剂进行一致性评价.结果 建立了 SHG的HPLC特征图谱,10个特征峰得到明确化学成分指认,分别为腺嘌呤(1号峰)、尿苷(2号峰)、鸟苷(3号峰)、肌苷(4号峰)、5-羟甲基糠醛(5号峰)、木兰苷A(6号峰)、佛手酚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷峰(7号峰)、紫花前胡苷(8号峰)、6'-O-(反式阿魏酰基)-紫花前胡昔(9号峰)、茴香酸对羟基苯乙酯(10号峰),并归属了特征峰处方药味来源,分别为1号峰归属于麻黄、苦杏仁、羌活、广藿香、苍术、白术、焦六神曲、焦麦芽、地龙、徐长卿、葶苈子,2号峰归属于厚朴、羌活、广藿香、佩兰、苍术、白术、地龙、徐长卿、葶苈子,3号峰归属于羌活、广藿香、地龙、徐长卿、葶苈子,4号峰归属于地龙,5号峰归属于焦三仙(焦山楂、焦麦芽、焦六神曲),6号峰归属于厚朴,7～10号峰归属于羌活.20批制剂均符合特征图谱的规定,批间一致性良好.结论 所建立的SHG的HPLC特征图谱方法简便,稳定性、重复性好,初步描绘了 SHG的整体化学成分特征,为进一步提升其质量标准奠定了基础,同时也可为其他经典名方质量标准研究提供参考.

基于UPLC-Q-TOF-MS技术结合UNIFI软件和自建数据库对广藿香中非挥发性成分进行整体表征和快速鉴定.广藿香 50%甲醇提取液采用正、负离子MSE 的Continuum扫描模式采集数据,通过已有数据库和系统文献检索构建广藿香化合物库,利用UNIFI软件提取化合物信息并鉴定其结构,基于加合分子离子、精确相对分子质量、特征碎片离子、色谱峰强度并结合对照品的质谱裂解途径和色谱保留行为对软件鉴定结果进行判别分析并对未鉴定化合物进行结构分析.正、负离子模式下共推测鉴定出 120 个化合物,包括黄酮类、苯丙素类、酚酸类、萜类、脂肪酸类、生物碱类、苯乙醇苷类等,其中 16 个经对照品准确鉴定,53 个化合物可能为首次从广藿香中发现.该研究首次系统表征鉴定了广藿香中非挥发性化学成分,研究结果为广藿香药效物质基础研究、质量控制体系建立及产品开发等提供了一定的科学依据.

目的 建立手足清栓的质量标准.方法 观察手足清栓的性状,检查制剂的重量差异和融变时限;采用薄层色谱法(TLC)对手足清栓中的黄芩、炒栀子、青蒿和广藿香油进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对黄芩苷和栀子苷进行含量测定:色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,以甲醇-0.2％磷酸水溶液进行梯度洗脱,检测波长为280 nm(黄芩苷)和238 nm(栀子苷).结果 手足清栓为红棕色子弹形栓剂.制剂的重量差异小,融变时限符合要求.TLC图谱中呈现出黄芩、炒栀子、广藿香油、青蒿的特征性斑点.黄芩苷、栀子苷分别在4.088～408.8 μg·mL-1(r=0.9996)和1.599～159.9 μg·mL-1(r=0.9998)与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为99.8％(RSD=1.6％)和99.0％(RSD=1.1％).结论 本方法重复性好,可操作性强,可用于手足清栓的质量控制.

目的: 研究广藿香不同茬口土壤对其幼苗生长的农艺性状及其植株挥发油和百秋李醇含量的影响,为揭示广藿香连作障碍成因及其缓解连作障碍、提高药材品质提供科学依据.方法: 以正茬、迎茬、重茬土壤为培养基质,在田间移栽广藿香组培苗,测定不同茬口土壤酚酸含量与土壤有机质、全氮、pH 等理化性质,以及广藿香幼苗农艺性状及挥发油和百秋李醇含量.结果: 重茬和迎茬土壤酚酸含量较正茬土壤显著升高,土壤有机质、全氮含量较正茬土显著下降,且重、迎茬土壤之间的上述指标差异显著.与正茬相比,在重茬土壤中生长的广藿香幼苗的各农艺性状显著下降,丙二醛(MDA) 含量升高,挥发油、百秋李醇含量显著减少; 在迎茬土壤中生长的广藿香存活率下降明显,其他各农艺性状较正茬土差异较小,挥发油和百秋李醇的含量小幅度升高.结论: 酚酸类化感物质在土壤中的积累,土壤理化性质的恶化可能是引起广藿香连作障碍的重要原因之一.

目的:从广藿香总RNA中克隆广藿香醇合成酶基因(Pc-PTS1),并对其进行生物信息学分析.方法:利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得广藿香倍半萜合成酶基因Pc-PTS1的cDNA全长序列,并利用生物信息学软件对该序列进行相似性和同源性分析,预测其编码蛋白的结构和功能.结果:广藿香倍半萜合成酶基因Pc-PTS1的开放阅读框(ORF)全长1 713 bp,编码570个氨基酸,含有DDXXD保守序列,并与其他倍半萜合成酶基因具有较高相似性.结论:Pc-PTS1的克隆及其生物信息学分析为其他倍半萜类合成酶基因的发现和研究提供参考,从分子生物学角度阐释其生物学功能,也为进一步研究其生物合成调控机制奠定基础.

目的 探讨广藿香提取物对子宫内膜癌细胞相关耐药基因表达及紫杉醇耐药性的影响.方法 选取对数生长期Ishikawa细胞株,给予8 nmol/L浓度的2,3,7,8-四氯苯二噁英稀释液诱导后,将其分为A组、B组、C组,分别加入0.1 mg/ml的紫杉醇、0.1 mg/ml的紫杉醇和0.1 mg/ml的广藿香提取物、0.1 mg/ml的紫杉醇和1.0 mg/ml的广藿香提取物,比较3组细胞的细胞色素P4501B1(CYP1B1)、多药耐药(MDR-1)及多耐药相关蛋白(MRP)-1 mRNA及蛋白相对表达情况以及细胞生长抑制率.结果 A组、B组、C组细胞的CYP1B1、MDR-1、MRP-1 mRNA以及蛋白相对表达量依次降低(P<0.05).A组、B组、C组细胞的生长抑制率亦依次升高(P<0.05).结论 广藿香提取物可以有效下调CYP1B1、MDR-1以及MRP-1 mRNA及其蛋白的表达量,从而抑制子宫内膜癌细胞对紫杉醇的耐药性,提高子宫内膜癌细胞的生长抑制率.