目的:探讨骨髓来源树突状细胞(BMDCs)中微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性Th17细胞的调控。 方法:分离野生型C57BL/6小鼠股骨和胫骨，冲洗骨髓腔得到骨髓细胞，利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4定向诱导分化为BMDCs。诱导培养第5天，将未成熟的BMDCs分为miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组，分别转染miR-338-3p拟似物和拟似物阴性对照。转染后24 h，加入100 ng/ml脂多糖刺激BMDCs成熟。采用实时荧光定量PCR检测BMDCs中miR-338-3p及IL-6、IL-23、IL-1β mRNA表达。采用IRBP 1-20、弗氏不完全佐剂(IFA)及结核分枝杆菌H37Ra主动免疫小鼠诱导EAU模型，免疫后第13天，分离EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞，分别将miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组BMDCs与T细胞在含有IRBP 1-20的培养基中共培养，Th17细胞条件诱导，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测共培养上清液中IL-17质量浓度；实时荧光定量PCR检测共培养细胞中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17 mRNA相对表达量；流式细胞仪检测共培养细胞中IL-17 +细胞比率。此外，为进一步验证BMDCs中miR-338-3p对Th17细胞的调控作用，分别将miR-338-3p抑制剂或抑制剂阴性对照转染的BMDCs与EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞共培养，ELISA法检测共培养上清液中IL-17质量浓度。 结果:miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中miR-338-3p相对表达量较拟似物阴性对照组明显升高，差异有统计学意义( t＝6.861， P＝0.002)。miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中RORγt、IL-17 mRNA相对表达量分别为1.34±0.16和1.33±0.16，明显高于阴性对照组的1.00±0.01和1.00±0.01，差异均有统计学意义( t＝3.632， P＝0.022； t＝3.681， P＝0.021)；ELISA检测结果显示，miR-338-3p拟似物转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(5 941.00±452.40)pg/ml，明显高于拟似物阴性对照组的(4 299.00±348.30)pg/ml，差异有统计学意义( t＝4.979， P＝0.008)，miR-338-3p抑制剂转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(3 092.00±200.90)pg/ml，明显低于抑制剂阴性对照组的(4 063.00±131.50)pg/ml，差异有统计学意义( t＝7.005， P＝0.002)；流式细胞仪检测结果显示，miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中IL-17 +细胞比例为(8.03±1.35)%，明显高于拟似物阴性对照组的(4.52±0.73)%，差异有统计学意义( t＝3.968， P＝0.017)。miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中IL-6、IL-23和IL-1β mRNA相对表达量分别为2.23±0.21、2.21±0.56和2.32±0.43，明显高于拟似物阴性对照组的1.00±0.06、1.00±0.07和1.01±0.15，差异均有统计学意义( t＝10.290， P＝0.001； t＝3.747， P＝0.020； t＝5.280， P＝0.006)。 结论:miR-338-3p过表达可以增强BMDCs中Th17细胞极化相关因子IL-6、IL-23和IL-1β的表达，促进IRBP 1-20特异性Th17细胞活化。

目的:探讨circBANP对结直肠癌细胞和裸鼠皮下移植瘤放射敏感性的影响及潜在分子机制。方法:选取2018年1月至2019年1月于河南省人民医院手术切除的20例结直肠癌患者的癌及癌旁正常黏膜组织，建立放射抵抗结直肠癌细胞LoVo/R，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circBANP和miR-338-3p的表达，克隆形成实验检测细胞的放射敏感性，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力，Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3和p62的表达，免疫荧光法检测细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)的荧光强度。通过Circular RNA Interactome网站预测circBANP的下游微小RNA(miRNA)，采用双荧光素酶报告基因实验进一步验证。建立LoVo/R细胞的裸鼠移植瘤模型，观察circBANP对放射后移植瘤生长的影响。结果:结直肠癌组织中circBANP和miR-338-3p的表达水平分别为3.21+0.29和0.47+0.04，较癌旁组织(分别为1.00+0.07和1.00+0.05)显著升高(均 P<0.05)。成功建立了放射抵抗结直肠癌细胞LoVo/R，其circBANP表达水平为3.21±0.34，高于LoVo细胞(1.00±0.07， P<0.05)，miR-338-3p表达水平为0.33±0.04,低于LoVo细胞(1.00±0.08， P<0.05)。4 Gy照射后，与沉默对照组比较，沉默circBANP组LoVo/R细胞活力降低[分别为(34±4)%和(62±6)%， P<0.05]，细胞存活分数亦降低(分别为0.07±0.02和0.27±0.04， P<0.05)，放射增敏比为1.843。放射诱导后，LoVo/R细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ表达增加，p62表达降低，细胞发生自噬。自噬抑制剂氯喹可逆转放射对LoVo/R细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ表达的诱导和p62表达的抑制作用，促进放射对LoVo/R细胞活力和存活的抑制，其放射增敏比为1.780。4 Gy照射后，与沉默对照组比较，沉默circBANP组LoVo/R细胞中LC3相对荧光强度降低(分别为0.11±0.01和1.00±0.12， P<0.05)，LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平降低(分别为1.25±0.13和3.84±0.39， P<0.05)，p62表达增加(分别为2.76±0.29和1.00±0.08， P<0.05)。经Circular RNA Interactome网站预测、双荧光素酶报告基因实验证实，miR-338-3p是circBANP的靶基因。抑制miR-338-3p后，沉默circBANP+anti-miR-338-3p+4 Gy组LoVo/R细胞的LC3相对荧光强度增高(分别为7.32±0.72和1.00±0.09， P<0.05)，LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平增高(分别为4.13±0.43和2.31±0.23， P<0.05)，p62表达水平降低(分别为0.34±0.03和1.00±0.11， P<0.05)，放射增敏比为0.596。裸鼠皮下移植瘤实验显示，沉默circBANP组接种后第13、16、19、22、25、28和31天的肿瘤体积和肿瘤重量均低于沉默对照组(均 P<0.05)，沉默circBANP+anti-miR-338-3p组接种后第13、16、19、22、25、28和31天的肿瘤体积和肿瘤重量高于circBANP+anti-miR-NC组(均 P<0.05)。 结论:circBANP可通过调控miR-338-3p表达调控结直肠癌细胞的放射敏感性，影响裸鼠移植瘤的生长，circBANP可能是增强结直肠癌放射敏感性的潜在靶点。

目的:观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平，并探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组，另选取同期本院体检健康者40例作为对照组，RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平；采用 χ2检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系；Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性；受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。 结果:与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较，OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低( F＝6.604， P<0.05)；与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较，癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低( t＝3.319， P<0.05)；观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25， t＝5.318， P<0.05)，血清VEGF表达水平[(22.79±4.79) pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平[(16.71±3.44) pg/ml， t＝6.521， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377： χ2＝6.172、8.780、13.864， P<0.05；VEGF： χ2＝6.839、5.402、6.114， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关( r＝-0.641， P<0.05)；血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95% CI：0.684~0.933)，灵敏度为69.50%，特异性为88.20%；血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95% CI：0.775~0.977)，灵敏度为89.65%，特异性为76.50%；miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95% CI：0.829~0.994)，灵敏度为95.70%，特异性为88.21%。 结论:miR-377在EC患者血清外泌体中呈低表达，miR-377与VEG联合检测可有效提高EC诊断率。

目的:探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对脉络膜微血管内皮细胞增生和凋亡的影响及其调控机制。方法:体外培养人脉络膜微血管内皮细胞，将培养的细胞分为血管内皮生长因子(VEGF)组和正常对照组，正常对照组细胞常规培养，VEGF组细胞应用VEGF处理24 h；将VEGF组培养的细胞分为4个亚组，分别将阴性对照(miR-NC)、miR-338-3p拟似物、miR-338-3p拟似物＋pcDNA、miR-338-3p拟似物＋pcDNA-TCF4转染至脉络膜微血管内皮细胞后用VEGF处理24 h。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p和TCF4相对表达量；采用MTT法检测细胞增生率以评估细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡率；行双荧光素酶报告实验验证miR-338-3p与TCF4的靶向关系；采用Western blot法检测细胞中增生标记蛋白细胞增生核抗原-67(Ki-67)、增生细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(bax)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)蛋白相对表达量。结果:与正常对照组比较，VEGF组细胞中miR-338-3p mRNA表达水平显著降低，TCF4 mRNA表达水平显著升高，细胞增生率显著升高，细胞凋亡率显著降低，细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高，bax蛋白水平显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与VEGF＋miR-NC组比较，VEGF＋miR-338-3p组细胞增生率显著降低，细胞凋亡率显著升高，细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著降低，bax蛋白表达水平显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；双荧光素酶报告实验证实miR-338-3p可靶向结合TCF4；与VEGF＋miR-338-3p＋pcDNA组比较，VEGF＋miR-338-3p＋pcDNA-TCF4组细胞增生率显著升高[(56.48±13.20)% vs.(96.24±16.24)%]，细胞凋亡率显著降低[(30.59±3.57)% vs.(12.36±1.29)%]，细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高(0.41±0.11 vs. 0.96±0.19；0.44±0.10 vs. 0.97±0.20；0.55±0.12 vs. 0.98±0.15)，bax蛋白表达水平显著降低(0.87±0.13 vs. 0.42±0.11)，差异均有统计学意义( t＝5.700、14.408、7.516、7.111、6.715、7.927，均 P<0.01)。 结论:miR-338-3p过表达可负向调控TCF4在细胞中的表达量，从而抑制脉络膜微血管内皮细胞的增生及诱导细胞凋亡。

目的 探讨血清微小RNA(miR)-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用.方法 选取2020年11月至2022年11月在沧州市中心医院接受治疗的腺病毒肺炎患儿130例作为观察组,根据患儿疾病的严重程度分为轻症肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=40),选取同期在沧州市中心医院检查的130例健康儿童为对照组,比较观察组和对照组、不同病情严重程度患儿血清miR-338-3p和miR-495-3p水平.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-338-3p和miR-495-3p对重症腺病毒肺炎的诊断价值.采用多因素Logistic回归分析重症腺病毒肺炎的影响因素.结果 观察组患儿血清miR-338-3p水平比对照组低,miR-495-3p水平比对照组高(P＜0.05).轻症组和重症组电解质紊乱、循环系统并发症发生率及miR-338-3p水平、miR-495-3p水平、序贯器官衰竭评分和Murray肺损伤评分比较,差异有统计学意义(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-338-3p、miR-495-3p辅助诊断重症腺病毒肺炎的曲线下面积(AUC)分别是 0.745(95％CI 0.662～0.828)、0.774(95％CI 0.685～0.863),二者联合诊断的 AUC 为 0.884(95％CI 0.821～0.946),均优于各项指标单独检测(Z=2.593、1.963,P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,miR-495-3p是影响重症腺病毒肺炎发生的危险因素,miR-338-3p为保护因素(P＜0.05).结论 重症腺病毒肺炎患儿血清miR-338-3p水平降低,miR-495-3p水平升高,且二者联合检测对重症腺病毒肺炎有一定的诊断价值,可作为评估重症腺病毒肺炎病情严重程度的血清指标.

目的:研究肝纤维化模型小鼠肝组织中环状RNA(circRNA)表达谱变化.方法:制备经典的CCl4小鼠肝纤维化模型,设立正常对照组,采用高通量circRNA芯片技术比较2组小鼠肝组织circRNA表达谱变化,根据表达差异倍数较高和样本间一致性较好的原则筛选出目标circRNA,RT-qPCR验证其在肝组织中的表达,借助生物信息学软件预测可能受其调控的微小RNA(miRNA).结果:HE染色和Masson染色显示,模型组小鼠肝组织炎症和纤维化明显,模型复制成功.与正常组和模型组肝组织差异表达的circRNA共有69个(表达差异2倍以上,P<0.05),其中模型组上调4倍以上的有1个,下调4倍以上的有5个,RT-qPCR实验证实5个circRNA变化趋势与芯片结果一致,其中4个差异有统计学意义(P<0.05),生物信息学分析结合文献检索显示,mmu_circ_42398、mmu_circ_42397可能通过结合miR-338-3p,而mmu_circ_34116可能通过结合miR-141-5p,参与肝纤维化发病机制.结论:circRNA与肝纤维化发生发展过程存在一定关联,circRNA可能参与了肝纤维化的发病机制.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-338在肺腺癌细胞株及肺腺癌组织中的表达,及其抑制肺癌转移的机制.方法 使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺腺癌细胞株A549、115例肺腺癌组织、癌旁正常肺组织中miR-338的表达.构建miR-338过表达肺癌细胞株,探讨miR-338在肺癌细胞增殖、侵袭、转移中的功能.检测miR-338过表达肺癌细胞株中整合素β3的表达,研究miR-338抑制肺癌转移的靶向作用机制.结果 (1)肺腺癌细胞株与肺腺癌组织中miR-338表达下调(1.00比0.15 ±0.01,P=0.035;0.00比-2.99±3.69,P=0.001).miR-338表达与肿瘤栓子、肿瘤复发、TNM分期相关(P =0.005、0.004、0.025).低表达组的5年总生存率显著低于高表达组(中位生存时间44个月比53个月,P =0.001).(2)上调miR-338的表达可以抑制肺癌细胞增殖、迁移[平均细胞计数(347±41)个比(190±8)个,P=0.029]及侵袭[平均细胞计数(197±12)个比(68±14)个,P=0.008].裸鼠异种移植肿瘤模型实验表明,miR-338高表达能有效抑制移植瘤生长[平均肿瘤克隆数(20±7)个比(4±2)个,P =0.004].(3) miR-338过表达肺腺癌细胞株中的整合素β3表达较对照细胞明显降低(1.00比0.35±0.04,P =0.001).双荧光素酶活性测定显示,miR-338过表达组的荧光素酶活性降低(1.00比0.75 ±0.08,P =0.030).结论 (1)miR-338对肺癌细胞的增殖、侵袭及转移起抑制作用;(2)miR-338作用于靶基因整合素β3 mRNA 3'端非编码区(3'UTR)区对其进行转录后负调控.整合素β3是一种新的miR-338肺癌靶基因.

目的 探讨血清HOTAIRM1在星型细胞瘤诊断和预后预测的价值,以及HOTAIRM1的靶基因和靶基因功能.方法 选择2013年1月就诊于汉川市人民医院神经外科的3例星型细胞瘤患者,并与3例健康对照者进行比较.对两组的血清样本进行IncRNA芯片分析,筛选差异表达lncRNA.挑选HOTAIRM1,另取2013年1月至2014年1月就诊于汉川市人民医院神经外科的80例星型细胞瘤患者和25例健康对照者的血清标本用qRT-PCR进行验证.评估HOTAIRM1对星型细胞瘤的诊断效能及其表达水平与预后的关系.运用Multi Experiment Matrix(MEM)在线数据库进行HOTAIRM1的靶基因预测,选取排名前50的靶基因进行GO分析和信号通路分析.结果 对3例星型细胞瘤患者和3例健康对照者的血清lncRNA表达谱比较分析,共筛选出338个差异lncRNA,筛选出HOTAIRM1进一步分析.与健康对照者相比,星型细胞瘤患者的血清HOTAIRM1呈低表达(logFC=-1.77,P=0.008).qRT-PCR验证结果示,星型细胞瘤患者的血清HOTAIRM1表达水平(8.5±0.9)明显低于健康对照者(13.8±3.4)(P=0.000).ROC曲线分析示血清HOTAIRM1预测星型细胞瘤的曲线下面积为0.730(95％ CI:0.624-0.836).患者的性别、年龄、KPS评分与血清HOTAIRM1的表达水平无明显关系(均P＞0.05),较高WHO分级患者的HOTAIRMl表达水平明显低于较低WHO分级患者(P＜0.001).HOTAIRM1低表达组的3年总生存率低于HOTAIRM1高表达组,差异有统计学意义(P =0.006).生物信息学分析示,HOTAIRM1的靶基因主要富集于微小RNA的生物合成(microRNA biogenesis)和RNA调节(regulatory RNA pathways)等信号通路.结论 血清HOTAIRM1可作为星型细胞瘤诊断和预后预测的潜在血清标记物;并有助于为今后进一步临床研究和抗星型细胞瘤治疗靶点设计提供参考.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-338-3p与肝癌发展中的作用机制.方法 收集经手术切除并病理证实的39例原发性肝癌组织标本及对应的21例癌旁组织标本,细胞培养肝癌细胞,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织及细胞中的miR-338-3p的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成试验测定miR-338-3p对肝癌细胞生长的影响.采用生物信息学分析和荧光素酶报告基因检测检测miR-338-3p的靶点.结果 肝癌细胞和组织中miR-338-3p的表达均降低(1.37±0.05、0.95±0.03、1.15±0.09比3.38±0.11,t=5.235,P=0.019;0.89±0.08比2.03±0.05,t=3.535,P=0.008),miR-338-3p在肝癌细胞中的表达增强抑制了克隆的形成和细胞增殖.此外,miR-338-3p靶向调节鞘氨醇激酶2(SpHK2),SpHK2沉默对肝癌细胞中miR-338-3p的过表达具有相同的影响.SpHK2在3'非翻译区的过表达显著增强了miR-338-3p在肝癌细胞中的生长抑制作用.结论 miR-338-3p可以通过靶向调教SpHK2来影响肝癌的发展.

目的 大数据挖掘影响肺腺癌总生存的分子机制.方法 分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中肺腺癌RNA测序数据,将肺腺癌样本中上调的mRNA分别在10套GEO基因芯片数据中进行生存分析.应用生物信息分析方法探索微小染色体维持蛋白4(MCM4)基因上游相关的微小RNA(miRNA)以及长链非编码RNA(ln-cRNA).结果 MCM4 mRNA高表达,在10套独立数据中均可致肺腺癌总生存下降(x2=4.16～10.70,P＜0.05).与MCM4呈显著线性负相关的miRNA为miR-338-3p(r=-0.379,P＜0.01),与MCM4呈显著线性正相关的lncRNA为ENSG00000228801.5 (r=0.438,P＜0.001)、ENSG00000234129.3 (r=0.461,P＜0.001)、ENSG00000259758.1(r=0.431,P＜0.001),并且利用miRanda及DIANA tool数据库证明了调控的可信性.结论 ENSG00000228801.5→miR-338-3 p→MCM4、ENSG00000234129.3→miR-338-3p→MCM4、ENSG00000259758.1→miR-338-3p→MCM4通路与肺腺癌病人的总生存相关.