目的:研究LINC00665对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:选取2013年6月至2018年6月于济南市第三人民医院病理检查确诊为肝癌且经手术切除126例患者的肝癌组织及癌旁组织(距离肝癌组织边缘>2 cm)，其中男86例，女40例，年龄25.0～72.0(48.2±9.9)岁。qRT-PCR检测126例肝癌组织和癌旁组织中LINC00665的表达，CCK8法测定肝癌HCC9204细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，双荧光素酶报告系统验证LINC00665与miR-379-5p的调控关系。结果:与癌旁组织相比，肝癌组织组中的LINC00665表达量升高[(1.00±0.10)比(1.82±0.18)]，差异具有统计学意义( P<0.05)。LINC00665含量降低后[(1.01±0.10)比(0.53±0.05)]，HCC9204细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达量降低[(0.74±0.07)比(0.13±0.01)；(0.81±0.08)比(0.35±0.03)；(0.69±0.07)比(0.22±0.02)]，p21、Bax和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达升高[(0.20±0.02)比(0.66±0.06)；(0.26±0.03)比(0.78±0.08)；(0.17±0.02)比(0.72±0.07)]，细胞存活率降低[(100.13±10.14)%比(46.22±4.73)%]，细胞凋亡率上升[(8.42±0.91)%比(23.34±2.37)%]，迁移和侵袭细胞数均下降[(109±11)个比(53±5)个；(101±10)个比(47±5)个]，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。过表达miR-379-5p组共转染野生型WT-LINC00665报告载体的细胞中萤火虫荧光素酶相对活性显著降低[(1.03±0.10)比(0.24±0.02)]，转染突变型MUT-LINC00665的细胞中荧光素酶相对活性差异不具有统计学意义( P>0.05)；LINC00665过表达组(pcDNA3.1-LINC00665)的miR-379-5p含量下降[(1.01±0.10)比(0.37±0.04)]；LINC00665抑制组(si-LINC00665)的miR-379-5p含量上升[(0.98±0.10)比(1.66±0.17)]，差异均具有统计学意义( P<0.05)；降低LINC00665含量同时降低miR-379-5p含量，细胞存活率升高[(46.53±4.72)%比(82.26±8.34)%]，细胞凋亡率降低[(23.51±2.44)%比(12.07±1.21)]，迁移细胞数和侵袭细胞数均升高[(54±6)个比(92±9)个；(48±5)个比(88±9)个]，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:在肝细胞癌HCC9204中，LINC00665靶向调控miR-379-5p的表达，进而调控肝癌细胞HCC9204增殖、迁移、侵袭和凋亡，是肝癌的潜在分子靶点。

目的:探讨circEIF4G2对婴幼儿血管瘤内皮细胞(HemECs)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:收集2015年8月至2019至11月于山西医科大学第二医院行手术治疗的27例婴幼儿血管瘤患者的瘤组织和瘤旁正常皮肤组织，HemECs购自上海钦诚生物科技有限公司，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测组织和细胞中circEIF4G2和微小RNA-379-5p(miR-379-5p)表达。将HemECs分为si-NC、si-circEIF4G2、miR-379-5p、miR-NC、si-circEIF4G2+anti-miR-379-5p、si-circEIF4G2+anti-miR-NC组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖，Transwell检测各组细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证circEIF4G2和miR-379-5p调控关系。两组间比较采用独立样本 t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两组间比较采用LSD- t检验。 结果:婴幼儿血管瘤组织中circEIF4G2表达高于正常皮肤组织(3.76±0.42比1.00±0.13， t＝ 32.619， P<0.05)，而miR-379-5p表达低于正常皮肤组织(0.46±0.07比1.00±0.12， t＝20.197， P<0.05)。HemECs中circEIF4G2表达高于正常血管内皮细胞(2.61±0.20比1.00±0.07， t＝22.794， P<0.05)，而miR-379-5p表达低于正常血管内皮细胞(0.41±0.03比1.00±0.09， t＝18.657， P<0.05)。si-circEIF4G2、si-NC组HemECs的吸光度( A)值分别为0.57±0.04、1.01±0.07，迁移数分别为(82.00±3.17)、(191.00±8.26)个，侵袭数分别为(61.00±3.11)、(132.00±7.73)个，si-circEIF4G2组各检测指标均低于si-NC组( t＝16.187、36.960、25.564， P均<0.05)。miR-379-5p组和miR-NC组HemECs的 A值分别为0.61±0.05、1.11±0.09，迁移数分别为(94.00±5.10)、(187.00±6.10)个，侵袭数分别为(71.00±4.27)、(138.00±8.10)个，miR-379-5p组各检测指标均低于miR-NC组( t＝13.768、35.089、21.951， P均<0.05)。circEIF4G2靶向结合并负调控miR-379-5p表达。si-circEIF4G2+anti-miR-379-5p组和si-circEIF4G2+anti-miR-NC组HemECs的 A值分别为1.04±0.09、0.58±0.05，迁移数分别为(184.00±10.02)、(86.00±4.10)个，侵袭数分别为(143.00±8.06)、(65.00±2.16)个，si-circEIF4G2+anti-miR-379-5p组各检测指标均高于si-circEIF4G2+anti-miR-NC组( t＝13.462、27.156、28.043， P均<0.05)。 结论:circEIF4G2在血管瘤组织和HemECs中呈高表达，下调其表达可能通过靶向负调控miR-379-5p抑制HemECs增殖、迁移和侵袭，其可能成为婴幼儿血管瘤治疗的分子靶点。

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的 分析血浆微小RNA-379(miR-379)、微小RNA-195(miR-195)、生长停滞特异性蛋白6(Gas6)水平早期检测在急性心肌梗死(AMI)患者中的应用价值.方法 选取2021年5至2022年7月于首都医科大学附属北京世纪坛医院心内科住院治疗的265例患者,分为AMI组(n=127)和非AMI组(n=138),选取同期120名健康体检者设为对照组.比较三组入组时的血浆miR-379、miR-195表达量及Gas6水平;采用Pearson相关系数分析AMI患者入组时的血浆Gas6水平与miR-379、miR-195表达量的关系;采用受试者工作曲线(ROC)分析入组时的血浆Gas6水平及miR-379、miR-195表达量对早期AMI的诊断价值.结果 三组入组时的血浆miR-379、miR-195、Gas6水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血浆miR-379水平比较:AMI组<非AMI组<对照组,miR-195、Gas6水平比较:AMI组>非AMI组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05).Pearson相关系数分析显示,Gas6与miR-379水平呈负相关(P<0.05),与miR-195水平呈正相关(P<0.05).ROC结果显示,血浆miR-379、miR-195、Gas6水平单独诊断早期AMI具有一定局限性(AUC=0.808、0.718、0.752),三者联合诊断的效能更佳(AUC=0.879).结论 血浆miR-379、miR-195、Gas6水平在AMI患者中异常表达,三指标可作为AMI早期疾病诊断的参考指标.

目的：探讨玉屏风散对支气管哮喘（哮喘）小鼠5种与 Th 细胞相关的微小 RNA（miRNA）表达调节的影响。方法40只 Balb ／c 小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘模型组、玉屏风散治疗组和地塞米松治疗组，每组10只。用卵清蛋白（OVA）诱导激发系统性呼吸道炎性反应模型，分别予玉屏风散和地塞米松治疗。ELISA 法测定肺组织匀浆中白细胞介素（IL）-13和 IL-17水平以及肺组织 HE 染色观察病理变化。取小鼠脾组织，采用实时定量 PCR 法检测各组 miR-146a、miR-146b、miR-210、miR-126和 miR-21 a 的表达变化。结果玉屏风散治疗组 IL-13水平[（6．382±1．690）μg／L]和 IL-17水平[（24．212±1．250）μg／L]低于哮喘模型组[（20．154±7．960）μg／L、（50．312±5．770）μg／L]，差异均有统计学意义（t ＝3．785，P ＝0．005；t ＝9．891， P ＝0．000）。地塞米松治疗组 IL-13水平[（9．366±3．460）μg／L]和 IL-17水平[（29．132±4．960）μg／L]也低于哮喘模型组，差异均有统计学意义（t ＝2．779，P ＝0．024；t ＝6.225，P ＝0．000）。玉屏风散治疗组 miR-210表达（2．052±0．871）高于哮喘模型组（4．034±1．379）（3．95倍，t ＝2．718，P ＝0．026）。玉屏风散和地塞米松治疗组 miR-126表达（分别为4．920±0．924、3．862±1．510）均高于哮喘模型组（6．024±0．447），差异具有统计学意义（分别为2．15倍，t ＝2．405，P ＝0．043和4．48倍，t ＝－3．069，P ＝0．015）。结论Th2和 Th17细胞均参与哮喘的发病机制，且能被玉屏风散所抑制。玉屏风散通过对 miR-210和 miR-126表达的影响，调节 Th 细胞而治疗哮喘。

目的 探讨微小RNA-222(miR-222)对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因( PTEN)的靶向调控作用及胰腺癌细胞SW1990侵袭迁移的影响.方法 体外常规培养SW1990细胞并分为实验组、阴性对照组和空白对照组.实验组转染miR-222抑制物,阴性对照组转染阴性对照序列,而空白对照组不行任何转染.采用实时定量PCR( QPCR)、活细胞计数CCK-8、划痕实验和Transwell实验测定miR-222水平、增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数目,QPCR和Western blotting检测PTEN、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的水平;构建PTEN基因3’端非翻译区(3’UTR)野生型和突变型质粒并采用双荧光素酶报告基因系统验证miR-222与PTEN的靶向关系.结果 实验组的miR-222水平为0. 316±0. 046,低于阴性对照组的1. 129±0. 213和空白对照组的1. 147±0. 274(P＜0. 05).与空白对照组和阴性对照组相比,实验组SW1990细胞转染48、72 h的增殖活力下降(P＜0. 05);实验组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(21. 36±2. 79)%和(182. 62±14. 85)个,低于阴性对照组的(65. 82±5. 71)%和(379. 84±20. 52)个及空白对照组的(67. 19±6. 03)%和(384. 01±19. 20)个(P＜0. 05);与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的MMP-9和MMP-2水平降低,而PTEN水平升高( P＜0. 05).与转染突变型PTEN 3’ UTR的质粒相比,miR-222模拟物能降低转染PTEN 3’UTR野生型质粒细胞的荧光素酶活性( P＜0. 05),但对突变型无影响( P＞0. 05).结论 在SW1990细胞中下调miR-222水平可抑制其增殖和迁移侵袭能力并降低MMP-2、MMP-9表达,可能通过靶向PTEN来发挥促癌作用,在胰腺癌的靶向治疗中有一定价值.

目的:探讨胃癌差异表达微小RNA(miRNA)及其相关基因的单核苷酸多态性(SNPs)与胃癌预后的相关性,为进一步寻找胃癌预后的生物标志物提供线索.方法:应用SNP芯片联合生物信息学分析对福建省胃癌高发区仙游县96例胃腺癌患者与96例健康对照人群基因组中miRNA及其相关基因的SNPs位点进行筛检,应用飞行时间质谱生物芯片(Sequenom MassARRAY)在344例胃癌患者中对筛检出来的SNPs位点进行检测.开展现场流行病学调查,通过面对面的访谈及问卷调查取得患者的病情、治疗方法、患病后1年的生活饮食习惯,分析其预后情况.结果:共筛检出11个miRNA及其相关基因的SNPs位点,包括5个miRNA自身SNPs、5个miRNA靶序列SNPs以及1个miRNA生物合成通路基因相关SNPs.单因素分析显示miR-1297 rs9536676、MSH2 rs17502941位点的多态性与胃癌预后有关联性,其余的多态性位点均与胃癌预后无明显相关性.多因素分析显示是否手术、TNM分期、rs17502941 AA/AG基因型均是影响胃癌预后的独立危险因素.按年龄TNM分期联合分层得出,miR-1297 rs9536676、miRNA-519b rs10413288、miR-379 rs7143252、FAS基因rs1468063、EGFR基因rs10277413位点均与胃癌患者的生存分布有关联.联合作用分析结果显示患者同时携带rs9536676 AA/AG和rs17502941 GG、rs9536676 AA/AG和rs10413288 AA、rs17502941 GG和rs10413288 AA基因型可能会增加预后不良的风险(P<0.05).结论:胃癌差异表达miRNA及其相关基因的SNPs与胃癌病人预后密切相关,可能作为判断胃癌预后的生物标志物.

目的:探讨微小RNA-379-5p(miR-379-5p)通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制.方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5 p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况.miR-con(miR-con组)、miR-379-5 p mimics(miR-379-5 p组)分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5 p mim-ics与pcDNA(miR-379-5p+pcDNA组)、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL(miR-379-5p+pcDNA-CTSL组)分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力.双荧光素酶报告实验验证miR-379-5 p与CTSL之间的靶向关系.Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达.结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织(P<0.05);与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05),而促进Cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5 p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用.结论:miR-379-5 p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡.

目的 研究进展期非小细胞肺癌(NSCLC)化疗获益相关标志物的临床应用价值.方法 选取2017年1月至2018年3月衡水市人民医院接受化疗的200例进展期NSCLC患者作为研究对象,均行顺铂或洛铂+吉西他滨、顺铂或洛铂+培美曲塞化疗方案化疗,化疗2个周期后根据疗效分为有效组(n=132)和无效组(n=68),比较两组临床资料、化疗前、化疗1个周期后、2个周期后血清微小RNA(miRNA)-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价化疗2个周期后各指标评估疗效的价值,所有患者均随访3年,统计预后情况(死亡、存活),比较不同预后患者化疗2个周期后血清miR-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p水平,分析各指标与进展期NSCLC预后的关联性.结果 无效组TNM分期Ⅳ期患者占比(41.18％)、分化程度为中、低分化患者占比(85.29％)、有淋巴结转移患者占比(36.76％)均高于有效组(P<0.05);无效组化疗前、化疗1个周期后、2个周期后血清miR-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p水平均低于有效组(P<0.05);化疗2个周期后血清miR-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p水平评估化疗效果为无效的曲线下面积(AUC)均>0.8,各指标联合评估的AUC最大,为0.938;进展期NSCLC患者3年生存率为28.50％,死亡患者化疗2个周期后血清miR-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p水平均低于存活患者(P<0.05);化疗2个周期后血清miR-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p与NSCLC患者预后显著相关(P<0.05).结论 血清miR-137-3p、miR-1255b-5p、miR-379-5p水平是与进展期NSCLC患者化疗获益相关的标志物,在评估化疗疗效方面具有较高应用价值,且与患者预后显著相关.

目的:研究在体外常规储存1、3和5d血小板微小RNA(miRNA)的表达谱,探讨miRNA在血小板储存期的变化.方法:留取来自无偿献血捐献者单采血小板20份,摇匀后等量混合,贮存于(22±2)℃恒温血小板振荡保存箱中.分别在d1、3和5取样(分别命名为C_1、C_3和C_5),应用DNA纳米球(DNB)测序技术对血小板miRNA组进行测序,采用每千百万碱基的转录本(TPM)算法标准化miRNA的表达水平,组间miRNA表达差异＞2倍(P＜0.001)认为表达差异具有统计学意义.采用实时荧光定量PCR方法验证miRNA的表达.结果:通过DNB测序,分别获得C_1、C_3和C5组688、730和679个表达的血小板miRNA,聚类分析表明其表达谱发生明显变化.在C_1、C_3和C5组中前20个高表达miRNA的表达量约占各组miRNA总表达量的4/5,各组前5位的miRNA均为miR-21-5p、miR-26a-5p、miR-199a-3p、miR-126-3p和let-7f-5p.C_1、C_3和C5组血小板高表达的55个miRNA(＞1000 TPM)组间表达模式高度相似,其差异无统计学意义(P＞0.05).通过对高表达miRNA(＞1000 TPM)在各组中的差异表达分析发现,与C_1组相比,C_3组共有6个miRNA显著差异表达,其中表达上调的是miR-146a-5p、miR-379-5p和miR-486-5p,表达下调的是miR-652-3p、miR-142-5p和miR-7-5p;C_5组共有4个miRNA显著差异表达,表达上调的是miR-146a-5p和let-7b-5p,表达下调的是miR-30d-5p和miR-142-5p.对表达量为1-1000 TPM之间miRNA差异表达分析发现,与C_1组相比,C_3组有133个显著差异表达的miRNA,其中表达上调是99个,表达下调是34个;C_5组中有77个显著差异表达的miRNA,其中表达上调是31个,表达下调是46个.检测的6个差异表达miRNA的荧光定量PCR结果与测序结果基本一致.结论:通过对储存1、3和5d血小板miRNA组进行测序,发现随着血小板体外储存时间的延长,miRNA表达谱发生明显改变.