目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-455靶向调控泛素连接酶Cullin3(CUL3)活化核转录因子-κB(NF-κB)在炎性神经痛中的作用及其机制。方法:培养施万细胞(SCs)，过表达miR-455、CUL3和反义miR-455以及慢病毒CUL3-短发卡RNA(shRNA)质粒沉默CUL3表达。运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-455、CUL3和NF-κB的RNA水平表达变化，运用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析CUL3、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β蛋白水平表达变化。组间比较采用 t检验，多组比较采用单因素方差分析。 结果:过表达miR-455组CUL3蛋白表达低于对照组(6.25±1.54比32.56±5.18， F＝59.694， P<0.01)，而NF-κB(62.75±8.69比12.75±1.59， F＝57.505， P<0.01)、TNF-α(186.55±17.84比52.14±6.23， F＝66.576， P<0.01)和IL-1β(16.46±4.76比4.86±1.28， F＝10.799， P<0.05)蛋白表达高于对照组。反义miR-455组CUL3蛋白表达高于反义miRC组(87.49±8.26比28.16±5.12， t＝32.598， P<0.01)，而反义miR-455组NF-κB(6.63±0.75比19.22±2.84， t＝8.929， P<0.05)、TNF-α(26.23±2.14比63.17±7.76， t＝7.739， P<0.05)和IL-1β(2.77±0.56比7.15±1.03， t＝11.926， P<0.01)蛋白表达低于反义miRC组。同时，shCUL3组NF-κB(65.28±7.71比12.75±1.59， F＝57.505， P<0.01)、TNF-α(172.95±19.57比52.14±6.23， F＝66.576， P<0.01)和IL-1β(15.33±3.14比4.86±1.28， F＝10.799， P<0.05)的蛋白表达高于对照组。而CUL3过表达组NF-κB(5.27±0.83比16.21±1.58， t＝11.937， P<0.01)、TNF-α(19.72±2.04比55.04±4.38， t＝14.4， P<0.01)和IL-1β(2.25±0.49比6.79±0.81， t＝13.065， P<0.01)蛋白表达低于空转对照组。 结论:miR-455靶向调控CUL3从而促进了NF-κB蛋白的表达，在炎症性神经痛发病过程中发挥重要作用。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SNHG16通过微小RNA(miR)-455-3p/Nocth2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其机制。方法:选取2017年6月到2021年6月新乡市中心医院收治的51例鼻咽癌及其癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA SNHG16和miR-455-3p表达水平。采用慢病毒建立lncRNA SNHG16敲降稳定细胞系SNHG16 KD组和对照组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力和体内成瘤能力。采用流式细胞术分析两组细胞凋亡水平；采用流式细胞术分析细胞周期变化；采用生物信息学和生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA SNHG16靶基因。组间数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织lncRNA SNHG16表达水平(0.89±0.09)明显低于鼻咽癌组织lncRNA SNHG16表达水平(2.11±0.22)，差异有统计学意义( t＝36.260， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值(1.93±0.06)明显高于SNHG16 KD组(1.27±0.06)，差异有统计学意义( t＝18.350， P<0.05)。对照组细胞在裸鼠体内成瘤体积[(904.94±39.53) mm 3]明显高于SNHG16 KD组细胞成瘤体积[(742.82±97.80) mm 3]，差异有统计学意义( t＝4.860， P<0.05)。对照组细胞成瘤重量[(4.70±0.46) g]明显高于SNHG16 KD组细胞[(2.22±0.18) g]，差异有统计学意义( t＝15.960， P<0.05)。对照组细胞凋亡比例[(4.07±1.34)%]明显低于SNHG16 KD组细胞[(26.79±5.16)%]，差异有统计学意义( t＝10.430， P<0.05)。对照组细胞G 0/G 1期比例[(31.56±3.27)%]明显高于SNHG16 KD组细胞[(45.96±1.72)%]，差异有统计学意义( t＝9.5201， P<0.05)。lncRNA SNHG16是miR-455-3p的海绵。对照组细胞miR-455-3p表达水平(1.19±0.10)明显低于SNHG16 KD组细胞(2.15±0.15)，差异有统计学意义( t＝13.040， P<0.05)。对照组细胞Notch2表达水平(0.93±0.05)明显高于SNHG16 KD组细胞(0.44±0.06)，差异有统计学意义( t＝13.040， P<0.05)。 结论:lncRNA SNHG16海绵吸附miR-455-3p，进而调控Nocth2表达水平，调节鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期。

目的 检测分析非小细胞肺癌(NSCLC)病人血清微小RNA(miR)-455和miR-383的表达水平,并探讨其临床诊断价值.方法 选取我院2020年3月～2023年1月收治的98例NSCLC病人为NSCLC组,同期收治的98例肺部良性疾病病人为肺良性病变组,同期98例体检健康志愿者为健康组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血清miR-455和miR-383的表达水平.Pearson分析NSCLC病人血清miR-455表达水平与miR-383水平的相关性;多元Logistic回归分析及ROC曲线分析NSCLC发生的影响因素及诊断价值.结果 健康组、肺良性病变组、NSCLC组血清miR-455、miR-383表达水平依次降低.Pearson分析显示,NSCLC病人血清miR-455表达水平与miR-383水平呈正相关(r=0.582,P＜0.05).Logistic分析发现,miR-455、miR-383低表达是影响NSCLC发生的危险因素(P＜0.05).ROC曲线分析显示,miR-455和miR-383联合诊断NSCLC的AUC显著大于miR-455单独诊断的AUC(Z=3.604,P=0.000)及miR-383单独诊断的AUC(Z=2.594,P=0.010).结论 NSCLC病人血清miR-455、miR-383相对表达水平明显下调,二者联合检测对NSCLC具有较高的诊断价值.

背景:m6A修饰与股骨头坏死的发生发展相关,但在激素性股骨头坏死中的作用尚不清楚.目的:基于GEO数据库,采用生物信息学方法分析激素性股骨头坏死中表达差异的m6A基因及互作miRNAs,探寻其潜在发病机制.方法:在GEO数据库中检索并下载与激素性股骨头坏死相关的mRNA表达谱数据集(GSE123568),通过R软件对数据集进行差异基因筛选及GO功能、KEGG通路富集分析.识别差异基因中的m6A差异表达基因(m6A-DEGs)并对其进行GO功能与KEGG通路富集分析,比较m6A-DEGs的表达量并分析它们之间的相关性.最后通过Cytoscape构建m6A-DEGs的PPI互作网络及筛选核心基因.使用TargetScan,miRTarBase和miRBD数据库预测m6A-DEGs相关的潜在miRNAs,同时使用ChIPBase及hTFtarget数据库预测7个核心基因潜在转录因子,然后分别构建m6A-miRNA与转录因子m6A调控网络.最后使用数据集GSE74089验证7个核心m6A-DEGs的表达水平.结果与结论:①从数据集中共筛选出2 460个差异表达的基因,其中1 455个上调,1 005个下调.②从数据集中筛选出了14个m6A-DEGs,包括3个下调和11个上调基因,m6A-DEGs在激素性股骨头坏死中的表达具有显著差异(P<0.05),Spearman分析表明它们之间具有一定相关性.③m6A-DEGs的GO和KEGG富集分析主要集中在骨髓细胞分化与发育、免疫受体与细胞因子受体活性、破骨细胞分化、AMPK与白细胞介素17信号通路.④m6A-DEGs前7个核心基因包括YTHDF3,YTHDF1,YTHDF2,ALKBH5,METTL3,HNRNPA2B1及HNRNPC,它们在miRTarBase,miRDB和TargetScan数据库中共有44个miRNA重叠,在ChIPBase及hTFtarget数据库中共有79个重叠转录因子.⑤在GSE74089数据集中有6个核心m6A-DEGs的表达水平与GSE123568数据集一致.⑥结果证实,根据生物信息学方法筛选的7个m6A-DEGs可能通过调控多个miRNA、转录因子和AMPK及白细胞介素17信号通路表达,进而影响激素性股骨头坏死中骨髓细胞分化发育与破骨细胞分化,为进一步深入研究激素性股骨头坏死的发病机制和靶向治疗提供了数据支持和研究方向.

目的 探究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)在大鼠矽肺模型淋巴管增生中的调控作用,并探讨miR-455-3p靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响.方法 将大鼠随机分为矽肺模型组和正常对照组,矽肺模型组气管内滴注二氧化硅(SiO2)悬浊液,对照组滴注等量0.9％氯化钠溶液,采用HE、Masson、免疫组织化学染色观察肺组织病理改变及淋巴管增生情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织内 miR-455-3p、VEGF-C 表达水平;将 miR-455-3p 抑制剂(In-hibitors)及其阴性对照(NC)转染至 HLECs 中,RT-qPCR 和Western blot检测细胞内miR-455-3p、VEGF-C表达水平,划痕实验检测HLECs迁移能力,基质胶管形成实验检测管状结构形成能力,双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p和VEGF-C的靶向关系.结果 与正常对照组比较,大鼠矽肺模型组肺间质内大量炎性细胞聚集,胶原逐渐沉积,且肺内淋巴管增生,肺组织内miR-455-3p表达水平低于对照组,VEGF-C表达水平高于对照组;HLECs转染后,与NC组比较,Inhibitors组细胞内miR-455-3p表达水平降低,VEGF-C水平升高,细胞迁移能力及管状结构形成能力增强(P＜0.05);双荧光素酶报告基因证实VEGF-C为miR-455-3p的靶基因.结论 miR-455-3p可通过靶向调控VEGF-C表达从而影响HLECs的管状结构形成能力,调节淋巴管增生.

结直肠癌(CRC)是常见的恶性肿瘤,占全球恶性肿瘤死亡原因的第3位[1].本研究旨在观察微小RNA(miRNAs,miR)-455-5p对结直肠癌细胞生物学特性的影响.一、材料与方法搜集40例在宁波市第一医院肛肠科接受手术的40例结直肠癌患者标本,分为肠癌组和正常组.实时定量基因扩增荧光检测(QPCR)组织中miR-455-5p表达量,脂质体转染3株结直肠癌细胞(SW480、HT-29、HTC-116),用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、流式细胞仪、划痕实验检测生物学特性;应用预测软件筛选靶基因,并用蛋白质印迹法(Western blot)进行验证.本实验通过单位伦理学批准(2016-R017),应用SPSS 18.0软件统计分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.

目的 筛选在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者和非冠心病(non-CAD)患者心外膜脂肪组织(EAT)中差异性表达的microRNAs(DE-miRNAs),探讨其中miR-455b-3p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4(KLF4)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞因子趋化蛋白Ⅰ(MCP-1)分泌及对脂肪细胞分化的影响.方法 收集冠心病(CAD) 34例和非冠心病(non-CAD) 16例EAT和血液标本,分别为实验组(CAD组)和对照组(Non-CAD组),采用miRNA芯片技术筛选出EAT中DE-miRNAs,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测标本中miR-455b-3p的表达水平.分别将miR-455b-3p的mimics、miR-455 b-3p的inhibitors和NC转染入前体3T3-L1细胞及已诱导成熟的3T3-L1细胞,分为上调组、下调组和NC组.采用qRT-PCR法检测转染24 h后细胞中APN、KLF4、IL-6、MCP-1 mRNA及脂肪细胞分化标志物过氧化物酶体增殖物激活受体-γ (PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4) mRNA的相对表达水平.结果 与实验组比较,对照组EAT标本中共筛选出29个DE-miRNAs(P＜0.05;差异倍数＞2,差异有统计学意义),其中下调10个,上调19个.miR-455b-3p是与ADIPOQ 3'-UTR有互补结合位点或密切相关的1条DE-miRNA.qRT-PCR验证结果显示,与对照组比较,miR-455b-3p在实验组中的表达均升高.与NC组比较,转染miR-455 b-3p的mimics后,上调组成熟3T3-L1脂肪细胞中APN、KLF4 mRNA表达减少,IL-6、MCP-1 mRNA表达增多;脂肪细胞分化标志物PPARγ、C/EBPα、FABP4 mRNA表达升高;转染miR-455b-3p inhibitor后,下调组APN、KLF4 mRNA表达水平升高,IL-6、MCP-1 mRNA表达减少.结论 在CAD组患者EAT中存在差异性表达的miRNAs,其中miR-455b-3p高表达,miR455b-3p影响脂肪细胞因子APN、KLF4、IL-6以及MCP-1的表达,并且促进脂肪细胞分化成熟,从而影响冠心病的发生发展.

目的 筛选与乳腺癌淋巴结转移相关miRNA,探讨其在Her-2阳性乳腺癌增殖和侵袭中的作用.方法 在24例不同淋巴结转移程度的Her-2阳性乳腺癌患者的冷冻组织样本中,对从TCGA数据库中筛选出5种可能与乳腺癌淋巴结转移相关的5种miRNA进行qRT-PCR检测,比较其在不同淋巴结转移程度的肿瘤组织与癌旁组织的相对表达水平,并分析其与淋巴结转移数目、病理分期、存活率、生存时间的相关性.最后再选出两种与Her-2阳性乳腺癌淋巴结转移最相关的miRNA,进行CCK8实验和Transwell实验,检测它们对MDA-MB-453细胞增殖和侵袭的影响.结果 选出5种可能与乳腺癌淋巴结转移相关的miRNA为miR-143、miR-455、miR-196a、miR-9和miR-92a,其中仅有miR-455表达与乳腺癌患者总生存显著正相关(P<0.05).>3颗淋巴结转移组的总生存时间和存活率明显短于无淋巴结转移组(P<0.01).MiR-143-3p、miR-455-5p、miR-196a-5p、miR-9-5p的相对表达水平与Her-2阳性乳腺癌患者淋巴结转移程度相关,miR-455-5p、miR-9-5p的相对表达水平与患者病理分期相关,miR-455-5p、miR-92a-3pmiR-92a-3p存活率相关(P<0.05,P<0.01或P<0.001).细胞学实验研究显示上调miR-455显著抑制MDA-MB-453细胞的增殖和侵袭,而下调miR-143表达则显著抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭.结论 MiR-455、miR-92a可能为抑癌因子,miR-196a、miR-9可能为促癌因子,下调miR-455和上调miR-143能够促进Her-2阳性乳腺癌细胞的增殖和侵袭.

目的 鉴定喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中自噬相关微小RNA(microRNA,miRNA),探讨其在肿瘤发展中的作用.方法 数据库下载自噬相关基因及各个LSCC样本的miRNA表达谱,用limma包筛选差异表达的miRNA,并构建miRNA与自噬相关基因之间的共表达网络,从而筛选出自噬相关miRNA.Cox回归分析用于评估自噬相关miRNA在LSCC中的预后价值,建立基于自噬相关miRNA的风险指数模型以预测LSCC的预后.结果 最终鉴定了6个关键自噬相关miRNA分别为hsa-miR-100-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-3607-5p、hsa-miR-454-3p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-99a-5p,均与LSCC的预后显着相关.富集分析表明所有的关键自噬相关miRNA在mTOR信号传导途径中均显著富集,利用多元Cox回归计算每个样品的风险指数,风险指数较低的患者具有更好的生存结果.结论 关键自噬相关miRNA可以做为LSCC潜在的治疗靶标,基于自噬相关miRNA新构建的风险指数模型可以预测LSCC的预后.

目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)靶向微小RNA-455(miR-455)调控磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对小鼠脑梗死缺氧神经干细胞(NSCs)损伤模型细胞增殖、凋亡、分化及氧化应激水平的影响.方法 构建大脑中动脉闭塞(MCAO)小鼠模型,取18只SPF大鼠随机分为假手术组、MCAO组,每组9只.原代分离与培养NSCs,建立NSCs缺氧损伤模型.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测母系表达基因3(MEG3)、miR-455的表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;使用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量.用双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-455的靶向关系.蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)、磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、PI3K、Akt蛋白表达量.结果 与假手术组比较,MCAO组MEG3表达水平明显升高(P<0.05),miR-455表达水平明显降低(P<0.05);与对照组比较,模型组MEG3、p21、Bax表达水平明显升高(P<0.05),miR-455、CyclinD1、Bcl-2、GFAP、β-tubulin-Ⅲ表达水平明显降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活性明显降低(P<0.05),48 h、72 h细胞增殖活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及MDA活性明显升高(P<0.05);抑制MEG3表达后,细胞活力明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2、GFAP、β-tubulin-Ⅲ表达及SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),p21、Bax表达水平明显降低(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实MEG3与miR-455存在靶向关系.结论 LncRNA MEG3靶向miR-455及抑制PI3K/Akt信号通路激活进而抑制缺氧诱导的NSCs增殖、分化,诱导细胞凋亡及促进氧化应激.