目的 探讨慢性心功能不全患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)微小RNA(microRNAs,miRNAs)差异表达与患者脑血管疾病的关系.方法 这是一项对2019年1月至2022年4月期间从西安交通大学第一附属医院出院的274例失代偿性心力衰竭患者的观察性研究.对患者进行随访,直到2023年1月,观察患者缺血性脑血管事件情况.miRNA微阵列用于分析基线循环miRNAs水平.通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证差异表达的miRNAs.采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析候选miRNAs对缺血性脑血管事件的预测价值.结果 在随访期间[422(184～939)d],有24例患者发生缺血性脑血管事件.与未发生缺血性脑血管事件的患者相比,发生缺血性脑血管事件的患者服用抗凝剂、维生素K拮抗剂的患者比例显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).在两组基线PBMCs样本中分析了2 549个miRNA的表达,并鉴定了20个差异表达的miRNAs(定义为FC>1.3和P<0.05).qRT-PCR验证结果显示,与非缺血性脑血管事件患者相比,发生缺血性脑血管事件患者的PBMCs样本中hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-2861表达水平显著上调,hsa-miR-483-5p表达水平显著下调,差异有统计学意义(P<0.05).ROC分析表明,hsa-miR-1273g-3p[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.745]预测心力衰竭患者缺血性脑血管事件的灵敏度和特异度分别为81%、56%,hsa-miR-2861(AUC=0.614)的灵敏度和特异度分别为76%、62%,hsa-miR-483-5p(AUC=0.821)的灵敏度和特异度分别为76%、80%.3种候选miR-NAs联合的预测价值优于单独一种miRNA,其AUC、灵敏度和特异度分别为0.941、90%、98%.结论 PBMCs中hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-2861表达水平上调和hsa-miR-483-5p表达水平下调可能与心力衰竭患者缺血性脑卒中风险增加有关.

目的:鉴定非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者和健康对照组人血清外泌体微小RNAs（microRNAs）差异表达谱，探索miRNAs在NAFLD发病、诊断及治疗中的价值。方法:各取4例人口学特征、个人史相近的S2~3级NAFLD患者和健康对照者进行血清外泌体miRNAs高通量测序，对差异表达最显著的4条miRNAs按S1组、S2~3组、对照（Control）组每组各20例行qRT-PCR验证，并进行靶基因预测，对靶基因进行GO和KEGG富集分析。正态分布的计量资料使用 t检验或方差分析，等级资料和非正态分布资料使用秩和检验，计数资料使用Pearson χ2检验或Fisher精确检验。 结果:初步鉴定出差异有统计学意义（ P < 0.05）且差异表达在2倍以上的血清外泌体miRNAs共19条，hsa-miR-122-5p、hsa-miR-146b-5p、hsa-miR-197-3P的相对表达关系为：S2~3组>S1组>Control组，hsa-miR-483-3p的相对表达关系为：NAFLD组（S1或S2~3）>Control组。GO分析显示靶基因在分子功能、细胞组分、生物过程均有广泛的注释，靶基因显著富集的通路共84条，从20条与NAFLD最密切的通路中筛选出与至少10条通路都相关的靶基因共5个，即PIK3R2、AKT2、AKT3、MAPK1、NFKB1。 结论:初步分析了NAFLD患者和健康对照组血清外泌体miRNAs差异表达谱，研究了4条miRNAs对于判断肝脂肪变性程度的价值，预测了数以千计的靶基因及其参与的复杂信号通路，为寻找无创诊断NAFLD的生物标志物和特异性治疗的新靶点提供了新的参考。

目的:观察长链非编码RNA（lncRNA）SCAMP1-AS1在食管癌组织中的表达，探讨SCAMP1-AS1对食管癌细胞增殖和迁移的影响及可能的分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测鄂东医疗集团黄石市中心医院2017年3月至2020年8月手术切除的37例食管癌组织及癌旁组织、4种食管癌细胞（EC9706、TE-13、KYSE30、Eca109）及正常食管上皮细胞HET-1A中SCAMP1-AS1的表达水平。选择表达最低的细胞，以阴性对照慢病毒（LV-NC）感染为对照组，以携带SCAMP1-AS1序列的重组慢病毒（LV-SCAMP1-AS1）感染作为实验组。RT-qPCR检测感染后食管癌细胞中SCAMP1-AS1的表达。细胞计数试剂盒8（CCK-8）和Transwell小室法分别检测食管癌细胞的增殖能力和迁移能力。生物信息学方法预测SCAMP1-AS1的靶基因，双荧光素酶报告实验验证SCAMP1-AS1与靶基因的相互作用。RT-qPCR检测靶基因的表达，Western blotting检测细胞增殖和迁移表型蛋白的表达。结果:食管癌组织中SCAMP1-AS1的相对表达水平明显低于癌旁组织（1.26 ± 0.48比8.03 ± 1.17），差异有统计学意义（P<0.01）。食管癌细胞EC9706、TE-13、KYSE30、Eca109中SCAMP1-AS1的相对表达水平均低于正常食管上皮细胞（0.54 ± 0.05、0.14 ± 0.02、0.46 ± 0.07、0.77 ± 0.05比1.00 ± 0.06），差异有统计学意义（P<0.05），TE-13细胞中SCAMP1-AS1的表达最低（P<0.01）。与对照组比较，实验组TE-13细胞中SCAMP1-AS1的表达上调（P<0.01），细胞的增殖能力降低（P<0.01），细胞的迁移能力降低（P<0.01）。miR-483-5p是SCAMP1-AS1的直接作用靶点（P<0.01）。与对照组比较，实验组TE-13细胞中miR-483-5p的表达下调（P<0.01），细胞增殖和迁移表型蛋白表达降低。结论:lncRNA SCAMP1-AS1在食管癌中表达下调，SCAMP1-AS1可通过靶向调控miR-483-5p的表达抑制食管癌TE-13细胞的增殖能力和迁移能力，SCAMP1-AS1有望成为食管癌潜在的分子治疗靶点。

目的:高通量测序分析日本血吸虫童虫的微小RNA（microRNA，miRNA），鉴定已知miRNA的表达水平，预测分析miRNA靶基因及其生物学功能。方法:体外制备日本血吸虫童虫，提取童虫的总RNA构建文库进行Illumina高通量测序。采用DEGseq R语言包，结合perl脚本进行miRNA表达量的差异分析；分别利用miRanda、Blast软件和KEGG数据库对差异miRNA进行靶基因及其生物学功能预测。结果:构建文库中，日本血吸虫童虫表达的miRNAs与最新miRBase数据库比对结果显示，共有38 483条匹配序列，鉴定到已知miRNA 60个；其中，sja-miR-125b表达量最高，其次为sja-miR-61、sja-miR-71a、sja-miR-36-3p和sja-miR-10-5p，上述5种miRNA表达量占总miRNA的91%（3 263/3 585）。共预测到靶基因7 176个，基因功能集中在核苷酸转移酶活性、细胞氮复合代谢、分子功能、生物学过程、生物合成、等离子体膜及蛋白质成熟；功能富集分析显示，高表达的miRNA主要参与致病过程、生物进展及多条代谢途径通路。结论:日本血吸虫童虫显著表达的miRNA参与了血吸虫分化、生长发育和致病过程中的代谢途径调节，为研究血吸虫发育调控机制及新药物开发奠定了基础。

目的 研究芒果苷对良性前列腺增生(BPH)腺体纤维化的改善作用和调节微小RNA(miRNA)-483-3p的作用机制.方法 雄性小鼠随机分为5 组:正常对照组、BPH模型对照组、非那雄胺组、芒果苷组和芒果苷+miRNA-483-3p拮抗剂组.通过摘除睾丸和皮下注射丙酸睾酮建立BPH模型.30d后通过前列腺组织切片行masson和天狼猩红染色,以及检测组织中羟脯氨酸含量评价胶原沉积,实时荧光定量PCR检测前列腺转化生长因子-β1(TGF-β1)、丝裂原活化蛋白激酶2(MK2)和丝裂原活化蛋白激酶6(MKK6)的mRNA水平以及miRNA-483-3p的水平,Western blotting检测前列腺TGF-β1、MK2、磷酸化MK2(p-MK2)、MKK6 和磷酸化MKK6(p-MKK6)的蛋白水平,并采用荧光素酶报告评估miR-NA-483-3p与MK2 的靶向结合能力.结果 与正常对照组比较,BPH模型对照组小鼠的前列腺胶原沉积明显,且 TGF-β1、MK2 和MKK6 的mRNA水平,以及TGF-β1、p-MK2 和p-MKK6 的蛋白水平均显著性升高(P＜0.01),而miRNA-483-3p水平显著性下降(P＜0.01).与BPH模型对照组比较,芒果苷组能够上调前列腺miRNA-483-3p的水平,降低TGF-β1、MK2 和MKK6 的mRNA水平,以及TGF-β1、p-MK2 和p-MKK6 的蛋白水平,减轻胶原沉积.与芒果苷组比较,联合使用芒果苷和miRNA-483-3p拮抗组显著性降低miRNA-483-3p水平,升高TGF-β1、MK2 和MKK6 的mRNA水平,以及 TGF-β1、p-MK2 和p-MKK6 的蛋白水平(P＜0.01).荧光素酶报告显示miRNA-483-3p能够靶向结合MK2.结论 芒果苷能够通过调节miRNA-483-3p,抑制MK2 减轻前列腺纤维化.

目的 分析新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)中血清微小RNA(miRNAs)的表达变化,评估其对NRDS的诊断价值.方法 选取福建医科大学附属第二医院新生儿重症监护室(NICU)住院80例NRDS新生儿(NRDS组)为对象,采用随机数字表法选取同期住院104例普通早产儿为对照组.2组选取质检合格总样本各12例,采用illuminaHiseq测序平台完成高通量测序,检测出NRDS组相对于正常组的表达差异miRNAs,筛选出组间差异表达超过9倍的miRNAs为候选miRNAs.选取NRDS组68例,对照组92例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测2组样本中候选miRNAs表达水平差异与芯片结果是否一致.绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其诊断效能.使用线性相关分析评估表达差异miRNAs与NRDS患儿呼吸机使用天数及住院天数相关关系.结果 illuminaHiseq测序平台结果显示总计有119种差异表达的miRNA,共筛选出 6 种 miRNAs 作为候选标志物,分别是 miR-30a-5p、miR-206、miR-370-3p、miR-122-5p、miR-483-5p 和 miR-193a-5p,miR-30a-5p、miR-206、miR-122-5p 和 miR-483-5p 相对于对照组表达下降(P＜0.01).ROC曲线结果表明,血清miR-122-5p对诊断NRDS患儿的曲线下面积(AUC)为0.853,敏感度为88.2％,特异度为91.3％;血清miR-206对诊断NRDS患儿的AUC为0.798,敏感度为70.6％,特异度为89.6％;血清miR-30a-5p对诊断NRDS患儿的AUC为0.922,敏感度为87.6％,特异度为85.2％;血清miR-483-5p对诊断NRDS患儿的AUC为0.885,敏感度为76.5％,特异度为82.6％.相关关系结果表明,发现上述表达差异miRNAs对患儿呼吸机使用时间以及住院天数无相关.结论 NRDS患儿血清中miR-30a-5p、miR-206、miR-122-5p和miR-483-5p表达相对普通早产儿具有差异性,可能是NRDS的潜在诊断标志物.

目的 筛选卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者卵泡液外泌体差异表达微小核糖核酸(micro RNA,miRNA),探索其与DOR相关的潜在分子机制.方法 收集 2021 年 12 月～2022 年 3 月于柳州市人民医院生殖医学科辅助生殖助孕 18 例患者的卵泡液为研究样本,根据卵巢功能评估结果分为卵巢功能正常(Normal)组和卵巢功能减退(DOR)组.miRNA PCR阵列芯片法检测两组卵泡液外泌体miRNA的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证芯片结果,最后通过生物信息学分析差异表达miRNA的靶基因及其富集的相关生物学功能和分子通路.结果 DOR组筛选出 5 条差异表达miRNA:let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达下调,miR-483-3p表达上调;qRT-PCR验证结果显示与Normal组比较,DOR组let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达降低,miR-483-3p的表达升高,差异具有统计学意义(t=3.147,4.405,3.95,3.147,-3.198,均P＜0.05);差异表达miRNA的靶基因主要富集于p53 信号通路和FoxO信号通路,靶基因CDKN1A,RRM2,CCND1,SESN3,MDM4,BCL2L11,SMAD4,IGF1 及IGF1R参与p53 信号通路和FoxO信号通路,靶基因METTL3,METTL6 及METTL8 参与RNA m6A甲基化.结论 DOR患者卵泡液外泌体中的差异表达miRNA参与p53 和FoxO信号通路及RNA m6A甲基化的调控,是DOR发生机制和诊疗的潜在标靶.

目的 由酒精性肝硬化(alcoholic liver cirrhosis,ALC)引发原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)的发展和形成极其复杂,这给PLC的诊断和治疗带来了的难题.本研究采用环状RNA(circular RNA,circRNA)微阵列芯片技术筛选酒精性肝硬化相关PLC患者外周血中差异表达的circRNA,为酒精性肝硬化相关PLC的诊断和治疗提供研究基础.方法 选择2014-12-01-2015-08-31中国人民解放军第一八一医院确诊为酒精性肝硬化引发PLC的4例患者(PLC组)和4例健康志愿者(对照组)作为研究对象,采用circRNA芯片检测PLC组和健康对照组外周血的circRNA表达谱,同时进行组间差异分析,筛选出组间差异表达的circRNA.并对circRNA吸附相关的微小RNA(microRNA,miRNA)进行预测.结果 与健康对照组比较,PLC患者外周血中差异表达的circRNA共有302个(fold change绝对值≥2.0),其中表达上调的有182个(fold change≥2.0),下调的有120个(fold change≤-2.0),12个circRNA对与肝癌相关的miR-483-3p、miR-483-Sp、miR-203和miR-29b/c可能有miRNA海绵作用(microRNA sponge).结论 酒精性肝硬化相关PLC患者外周血与正常外周血之间存在差异表达的circRNA,这些差异表达以及和miRNA有结合位点的circRNA可能成为一种诊断和治疗PLC的候选生物标志物.

目的 探讨外周血单核细胞微小RNA-483-3p(miR-483-3p)联合D-二聚体对下肢深静脉血栓(DVT)的诊断价值.方法 选择2016年9月至2017年6月安徽医科大学第二附属医院确诊的DVT患者30例为血栓组,选取同期住院非DVT患者30例为对照组.分别通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Sysmex CS5100全自动凝血分析仪检测两组外周血单个核细胞miR-483-3p表达量及血浆中D-二聚体含量.采用受试者工作特征曲线(ROC)统计分析miR-483-3p和血浆D-二聚体分别对DVT诊断的特异性、敏感性和准确率,以及两者联合对DVT诊断的效能.结果 与对照组比较,血栓组患者单个核细胞miR-483-3p表达和血浆D-二聚体值升高,差异有统计学意义(P<0.05).两者对DVT诊断的敏感度和特异度显示,miR-483-3p联合D-二聚体诊断DVT敏感度为96.63％、特异度为90.00％,AUC为0.9382.结论 外周血单个核细胞miR-483-3p联合血浆D-二聚体检测可作为诊断下肢深静脉血栓的参考指标.

目的:检测白塞氏病(BD)患者和正常人群血浆中微小核糖核酸(microRNA,miRNA)的差异表达谱,探讨miRNA在BD发病中的作用,寻找与BD相关的血浆生物标记物.方法:收集15例活动期BD患者和15例正常人的抗凝静脉血,离心获得血浆,提取总RNA,经miRNA标记、miRNA阵列杂交、miRNA阵列扫描和分析获得BD患者异常表达的miRNA谱.通过miRTarBase(靶基因数据库)检索差异性表达的miRNA已经过验证的靶基因,并选取与免疫学相关的差异性表达的miRNA进行Real time-PCR验证.结果:活动期BD患者血浆中hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-483-3p较正常人表达上调,hsa-miR-301a-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-454-3p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-199a-5p较正常人表达下调.结论:miRNA的差异性在BD的发生发展过程发挥重要作用,异常表达的miRNA可能通过Notch1和SMAD4信号通路促进BD发病.