目的:探究18α甘草次酸(18α-GA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用，为18α-GA的临床应用提供理论依据和实验基础。方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组：DSS模型组，阳性药对照组，18α-GA高、中、低剂量组，每组8只，5组小鼠均采用3% DSS溶液连续喂养7 d建立急性UC动物模型，同时各组分别每天腹腔注射100 mg/kg生理盐水、100 mg/kg柳氮磺吡啶、40 mg/kg 18α-GA、20 mg/kg 18α-GA、10 mg/kg 18α-GA。每天测量并记录小鼠的体重，评估小鼠疾病活动指数(DAI)。第8天处死小鼠，取小鼠结肠测量其长度；切片观察结肠黏膜并进行病理学评分；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路相关蛋白表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定结肠组织中IL-1β含量。结果:与DSS模型组比较，18α-GA高、中剂量组第7天时的体重减轻幅度明显更小(均 P<0.05)；结肠长度更长(均 P<0.05)，结肠黏膜病理学评分明显更低(均 P<0.05)；结肠组织中GSDMD、cleaved-caspase1及IL-1β的表达显著更低(均 P<0.05)；18α-GA高剂量组DAI评分更低( P<0.05)；结肠组织中NLRP3表达更低( P<0.05)。 结论:18α-GA可通过抑制NLRP3炎症小体通路的激活，改善DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎。

目的:探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)及瞬时受体电位阳离子通道8型(TRPM8)蛋白在急性结肠炎小鼠肠道中的表达、相互作用及对炎症和内脏感觉的影响。方法:本实验采用30只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为3组，分别为对照组、模型组、干预组，每组10只。模型组与干预组小鼠使用质量浓度为30 g/L的DSS共7 d构建结肠炎模型，同时干预组每天予以0.3%WS-12溶液灌肠，连续7 d试剂处理。每天同一时间观察记录小鼠生命活力、毛发及体重变化、粪便性状，测量粪便隐血情况，进行疾病活动指数(DAI)评分，并根据病理切片计算组织病理评分；腹壁反射撤退试验检测各组肠道敏感性；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织炎性因子：白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、缓激肽(BK)活性表达水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测结肠组织紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin)，TRPV1、TRPM8、降钙素基因相关肽α亚单位(CGRP-Gαq)蛋白表达水平。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测结肠组织炎性因子IL-1β、IL-6 mRNA及内脏敏感蛋白TRPV1、TRPM8及Gαq蛋白mRNA表达水平；免疫组织化学法检测结肠组织炎性细胞CD4 +T淋巴细胞水平。两组间比较采用 t检验。 结果:(1)WS-12可以改变肠道TRPV1、TRPM8及Gαq蛋白表达量：模型组小鼠肠道TRPV1蛋白表达水平高于对照组(2.58±0.25比1.00±0， t＝12.130， P<0.01)、模型组Gαq蛋白表达水平明显高于对照组(2.33±0.51比1.00±0， t＝6.984， P<0.01)。模型组TRPM8蛋白表达低于对照组(0.70±0.10比1.00±0， t＝8.001， P<0.01)，而经WS-12干预后，干预组TRPV1蛋白表达水平低于模型组(1.49±0.21比2.58±0.25， t＝11.580， P<0.01)、干预组Gαq蛋白蛋白表达水平低于模型组(1.34±0.14比2.33±0.51， t＝5.021， P<0.01)，而干预组TRPM8蛋白表达高于模型组(1.60±0.32比0.70±0.10， t＝6.914， P<0.01)。(2)WS-12可减轻肠道炎症程度：模型组小鼠结肠长度较对照组变短[(4.01±0.72) cm比(7.47±0.55) cm， t＝11.960， P<0.01]、模型组DAI评分高于对照组[(3.70±0.48)分比(0.20±0.42)分， t＝17.26， P<0.01]，模型组苏木精-伊红(HE)组织病理评分高于对照组[(7.10±0.74)分比(0.20±0.42)分， t＝25.680， P<0.01]，组织间CD4 +T淋巴细胞表达水平升高，浸润明显。而经WS-12干预后，干预组结肠长度变长[(5.95±0.85) cm比(4.01±0.72) cm， t＝6.734， P<0.01]，干预组DAI评分低于模型组[(2.10±0.74)分比(3.70±0.48)分， t＝5.737， P<0.01]及干预组HE组织病理评分低于模型组[(4.80±0.79)分比(7.10±0.74)分， t＝6.734， P<0.01]，CD4 +T淋巴细胞表达量降低( P均<0.01)。模型组小鼠肠道IL-1β、IL-6、TNF-α、BK表达水平明显高于对照组[IL-1β：(107.70±7.86) ng/ml比(23.59±2.26) ng/ml， t＝30.190；IL-6：(62.49±6.61) pg/ml比(5.26±1.13) pg/ml， t＝27.190；TNF-α：(184.40±11.19) pg/ml比(33.45±6.37) pg/ml， t＝37.060；BK：(65.69±7.53) pg/ml比(12.84±4.12) pg/ml， t＝19.470， P均<0.01]，WS-12干预组上述指标低于模型组[IL-1β：(42.84±10.45) ng/ml比(107.70±7.86) ng/ml， t＝14.230；IL-6：(14.18±5.91) pg/ml比(62.49±6.61) pg/ml， t＝17.190；TNF-α：(92.71±3.39) pg/ml比(184.40±11.19) pg/ml， t＝8.569；BK：(16.46±3.96) pg/ml比(65.69±7.53) pg/ml， t＝18.31， P均<0.01]。(3)WS-12可改善肠道上皮通透性：模型组小鼠肠道ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显低于对照组(0.58±0.18比1.00±0， t＝10.180；0.64±0.19比1.00±0， t＝6.466， P<0.01)。而经WS-12干预后，干预组ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显高于模型组(0.88±0.11比0.58±0.18， t＝6.674；0.82±0.12比0.64±0.19， t＝3.314， P均<0.01)。(4)WS-12干预后可改善肠道敏感性：模型组小鼠在不同压力(20、40、60、80 mmHg)直肠扩张下AWR评分均明显高于对照组[(0.8±0.4)分比(0.1±0.3)分， t＝4.200；(1.8±0.4)分比(0.5±0.5)分， t＝6.091；(2.7±0.5)分比(1.7±0.4)分， t＝4.629；(3.8±0.4)分比(2.8±0.6)分， t＝4.160， P均<0.01]，予WS-12干预后，小鼠肠道敏感性明显降低，其AWR评分虽然高于对照组，但在不同压力下均较模型组有不同程度的降低[(0.4±0.3)分比(0.8±0.4)分， t＝1.897；(1.1±0.3)分比(1.8±0.4)分， t＝4.200；(1.9±0.3)分比(2.7±0.5)分， t＝4.382；(2.9±0.3)分比(3.8±0.4)分， t＝5.400， P均<0.01]。 结论:TRPV1和TRPM8之间可能存在平衡机制维持肠道正常功能。WS-12可以通过激活TRPM8通道对小鼠急性结肠炎起一定的治疗作用。

目的:探索巨噬细胞M2型丙酮酸激酶(PKM2)缺失对溃疡性结肠炎(UC)黏膜修复的影响及其调控机制.方法:通过多组学数据库(PXD001608、GSE193677和GSE214695)分析UC患者黏膜组织代谢变化及糖酵解限速酶的表达、细胞定位和临床意义.使用巨噬细胞PKM2敲除转基因(PKM2ΔMAC)小鼠构建葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性UC模型,分析巨噬细胞PKM2敲除对小鼠体重变化及疾病活动度指数(DAI)评分的影响,采用HE染色检测结肠组织病理损伤情况及隐窝增生情况,RT-qPCR检测黏膜屏障主要标志物的mRNA表达水平.体外诱导小鼠骨髓源巨噬细胞极化,流式细胞术检测PKM2敲除对巨噬细胞M1/M2极化相关标志物表达水平的影响,RNA转录组测序分析基因表达谱的变化,并采用RT-qPCR进一步验证.结果:多组学数据库提示UC患者肠道组织中糖酵解增强,其中糖酵解限速酶PKM表达增高,并与疾病严重程度呈正相关.且PKM家族中的PKM2(而非PKM1)在肠炎小鼠巨噬细胞中表达增加.与对照小鼠相比,PKM2ΔMAC小鼠体重下降、腹泻、便血及结直肠长度缩短等情况显著缓解,DAI评分降低;此外,黏膜破坏及组织损伤程度减轻,伴随结肠隐窝数量及黏膜屏障主要标志物Ocln、F11r和Tjp-1的mRNA表达水平显著升高.流式细胞术显示,与对照小鼠骨髓源巨噬细胞相比,LPS刺激降低了PKM2ΔMAC小鼠中促炎型F4/80+CD45+CD86+巨噬细胞水平,而IL-4刺激则增加了促修复型F4/80+CD45+CD206+巨噬细胞水平.RNA转录组测序结果提示,PKM2ΔMAC小鼠巨噬细胞发生显著的基因差异性表达,且在白细胞迁移、组织重塑及细胞因子互作等生物过程中富集.PKM2ΔMAC小鼠巨噬细胞促修复因子Il18、Cxcl1、Ptgs2、Wnt6等表达上调,并进一步在PKM2稳定敲除的THP-1细胞株中得以验证.结论:糖酵解限速酶PKM2缺失通过调控巨噬细胞向修复表型转变促进UC黏膜修复.

目的 构建了一种针对炎症微环境的结肠靶向-酶敏感纳米给药系统以解决雷公藤红素的递送难题.方法 合成透明质酸-金刚烷甲酸(hyaluronic acid-adamantanecarboxylic acid,HA-AD)聚合物,通过1 H-NMR进行结构确认.采用透析法制备装载雷公藤红素(celastrol,Cel)的纳米粒(Cel/NPs),以包封率为指标,通过单因素考察和Box-Behnken设计-响应面法试验优化改善处方,并测定纳米粒的粒径分布、ζ电位、形态、稳定性、酶敏感性、药物包封率和载药量;采用透析袋法考察纳米粒的体外释放行为;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分析NCM460细胞对药物的摄取情况;建立急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型,对比研究free Cel和Cel/NPs的体内抗UC作用.结果 最佳制备工艺为Cel 2.04 mg、环糊精 27.19 mg、HA-AD 7.96 mg、DMSO3.0mL、纯水(reverses osmosis,RO)10 mL、搅拌时间 2h.所得纳米粒为光滑圆整球形,平均粒径为(152.37±1.42)nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)为 0.262±0.009,ζ电位为(-32.1±0.8)mV,Cel包封率和载药量分别为(94.18±2.36)％、(5.17±0.13)％,递药体系具有较好的储存稳定性和胃肠道稳定性,但在结肠微环境α-淀粉酶的刺激下,可使环糊精迅速解体,从而瓦解Cel/NPs,快速释放Cel;Cel/NPs增加了 NCM460细胞对药物的摄取.体内抗UC结果显示Cel/NPs可以显著改善UC,降低小鼠疾病活动指数评分,恢复小鼠结肠组织状态,增加结肠长度,降低脾脏质量,恢复结肠黏膜上皮完整性.结论 所制备Cel/NPs有利于雷公藤红素抗UC靶向递送,显著改善UC,为结肠病变部位药物靶向递送提供新思路.

目的 基于NF-κB信号通路探讨阔叶十大功劳对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠炎症反应的影响.方法 小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和阔叶十大功劳低、中、高剂量组.除正常组外,其余各组均自由饮用2.5％葡聚糖硫酸钠(DSS)建立UC小鼠模型,每天记录小鼠体质量变化与DAI评分.给药结束后,记录结肠长度,HE染色观察结肠组织病理形态,ELISA法检测结肠组织TNF-α、IL-10、IL-1β和IL-6水平,Western blot法检测结肠组织ZO-1、Occludin、Claudin-1和NF-κB蛋白表达.结果 与模型组比较,阔叶十大功劳组小鼠体质量、结肠长度增加(P＜0.05,P＜0.01),DAI和结肠组织病理评分降低(P＜0.05,P＜0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平和胞核NF-κB 蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-10 水平和 ZO-1、Occludin、Claudin-1、胞浆 NF-κB 蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 阔叶十大功劳可改善由DSS诱发的UC小鼠结肠组织炎症反应,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关.

目的 探讨信e号传导淋巴细胞活化分子家族 2(signaltransduction lymphocyte activation molecule family 2,SLAMF2/CD48)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道免疫细胞中的表达及意义.方法 选择6～8周龄的C57BL/6J雄性小鼠5只,分离其结肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)及固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocytes,LPLs),提取细胞总 RNA,RT-PCR、RT-qPCR和流式细胞术检测不同细胞中CD48的表达情况.将10只6～8周龄的C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和UC组,每组5只.UC组小鼠以含2.5％DSS的饮用水喂养5 d诱导急性UC模型,对照组小鼠以正常饮用水喂养;采用流式细胞术检测小鼠结肠上皮细胞中EPCAM+上皮细胞及CD45+免疫细胞中CD48的表达及两组小鼠结肠LPLs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞和CD11b+Ly6G+中性粒细胞、CD11b+F4/80+巨噬细胞及CD11c+MHC Ⅱ+树突状细胞中CD48的表达情况.结果 CD48在C57BL/6J雄性小鼠结肠LPLs中的表达高于IECs(P＜0.001).在结肠IECs内,CD45+免疫细胞中CD48的表达高于EPCAM+上皮细胞.与对照组相比,UC组CD11b+F4/80+巨噬细胞中CD48的表达降低(P=0.0065).结论 CD48在结肠免疫细胞中的表达高于上皮细胞,说明CD48可能通过免疫细胞而不是上皮细胞参与UC的发生发展过程.进一步研究发现,DSS诱导UC模型后,CD48在巨噬细胞中的表达下降,提示其可能通过巨噬细胞在急性UC的发生发展中发挥了一定作用.

目的 探究Toll样受体4(TLR4)信号与溃疡性结肠炎(UC)发生、发展的关系.方法 收集UC患者结直肠活检组织样本(n=63),根据Matts组织病理学分级标准分为 1～5 级,利用免疫组织化学染色检测TLR4表达情况.利用FreeStyle 293表达系统制备TLR4-Ig融合蛋白.体外培养健康者来源的外周血单个核细胞(PBMC),在培养基中添加 100 μg/mL脂多糖诱导炎症模型,并加入 100 μg/mL TLR4-Ig阻断TLR4,检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、干扰素γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的分泌水平.以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性结肠炎模型,分别采用 20 mg/kg TLR4-Ig、40 mg/kg TLR4-Ig、抗生素+40 mg/kg TLR4-Ig进行干预,取小鼠结肠组织测量结肠长度并进行组织病理学评估.结果 UC患者结肠组织Matts分级越高TLR4 高表达的样本比例越高(P＜0.001).TLR4-Ig融合蛋白能够以高亲和力结合TLR4 配体,阻断TLR4 信号介导的PBMC活化和炎症因子分泌.TLR4-Ig融合蛋白对TLR4 信号的阻断加重了DSS诱导的小鼠急性结肠炎,而抗生素处理则对TLR4 信号阻断造成的小鼠急性结肠炎加重有缓解作用.结论 TLR4信号与肠道菌群的信号交流是UC发生早期的重要保护机制,TLR4信号的缺失不利于缓解急性炎症和修复肠黏膜.

目的 评价红花籽粕(红花Carthamus tinctorius的种子经过压榨提取红花籽油后的副产品)对小鼠的急性毒性及抗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)作用.方法 C57BL/6小鼠ig不同剂量的红花籽粕,7d后计算脏器指数,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝、脾、肾组织病理变化,测定血清中肝功能、肾功能及血脂水平,以评价红花籽粕的急性毒性.建立葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的UC小鼠模型,每天记录小鼠体质量,测定疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、结肠长度以及脏器指数,采用HE染色和阿利新蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色评价结肠组织病理学变化,采用qRT-PCR和Western blotting检测结肠组织中炎症和黏膜屏障相关因子表达.结果 急性毒性实验中,与对照组比较,红花籽粕组小鼠脏器指数、血液生化指标没有显著差异,脏器病理切片也未见异常.红花籽粕对DSS诱导的UC小鼠具有较好的保护作用,可以显著改善体质量减轻、DAI评分升高、结肠长度缩短等临床症状(P＜0.01),减轻结肠组织病理损伤,抑制肠道炎症细胞的浸润,保护杯状细胞,提高紧密连接蛋白和黏蛋白的表达(P＜0.05、0.01、0.001),改善肠道屏障完整性.结论 红花籽粕具有较高的安全性,且对DSS诱导的UC小鼠具有显著的治疗作用.

目的:探讨健脾化滞方对急性溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的治疗作用,并基于小鼠血清及结肠组织炎症因子表达水平探讨其作用机制.方法:将76只健康雄性C57小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉秦组及健脾化滞方低、中、高剂量组.通过饮用3％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液建立急性UC小鼠模型,健脾化滞方低、中、高剂量组小鼠分别灌胃给予145.8、291.5、583.0g/L健脾化滞方溶液,美沙拉秦组小鼠灌胃给予10g/L美沙拉秦溶液.观察各组小鼠症状,进行疾病活动指数(DAI)评分,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理变化,并采用速率法和终点法检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、直接胆红素(DBil)、总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆汁酸(TBA)、肌酐(Cre)、尿酸(UA)、尿素氮(BUN)水平,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定小鼠血清与结肠组织中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10的水平.结果:健脾化滞方可有效改善急性UC小鼠便血、腹泻等临床症状,改善其体质量的下降及小鼠结肠长度的缩减,并能降低小鼠DAI评分(P＜0.05),减轻结肠组织病理炎症损伤程度,降低血清和结肠组织中促炎性细胞因子IL-6、TNF-α的表达水平(P＜0.05,P＜0.01),提高抗炎因子IL-10的表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:健脾化滞方对急性UC小鼠有较好的治疗作用,其作用机制可能为修复UC小鼠结肠黏膜局部损伤,调节血清及结肠组织炎症因子水平.

目的:观察电针"肠病方"对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜屏障和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响,探讨电针"肠病方"治疗UC的作用机制.方法:将32只SPF级健康雄性SD大鼠随机分成空白组、模型组、西药组和电针组,每组8只.除空白组外,大鼠饮用5%DSS溶液7 d制备UC模型.造模后,西药组予美沙拉嗪混悬液(200 mg/kg)灌胃;电针组予针刺双侧"天枢""上巨虚"和"中脘"穴,同侧"天枢"与"上巨虚"连接电子针疗仪电极,予疏密波,频率10 Hz/50 Hz,每次干预20 min.两组均每日1次,干预3 d.每天观察各组大鼠一般情况.干预后,计算大鼠疾病活动指数(DAI)评分;HE染色法观察大鼠结肠组织形态;ELISA法检测血清促炎性细胞因子[白细胞介素(IL)-18、IL-1β]含量;Western blot法检测大鼠结肠组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达;免疫荧光法检测结肠组织闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)阳性表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,体质量增长缓慢,结肠长度缩短(P＜0.01),DAI评分与脾脏指数升高(P＜0.01),血清IL-18、IL-1β含量与结肠组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达升高(P＜0.01),结肠组织ZO-1、Occludin阳性表达减少(P＜0.01).与模型组比较,电针组与西药组大鼠的一般状况改善,体质量增长加快,结肠长度增加(P＜0.05),DAI评分与脾脏指数降低(P＜0.05),血清IL-18、IL-1β含量与结肠组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达降低(P＜0.05),结肠组织ZO-1、Occludin阳性表达增加(P＜0.05).西药组和电针组以上指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与空白组比较,模型组结肠黏膜形态破坏,腺体排列紊乱,隐窝萎缩,有明显的炎性细胞浸润;与模型组比较,西药组和电针组大鼠结肠黏膜形态相对完好,腺体与隐窝结构得到了恢复与改善,炎性细胞浸润减少.结论:电针"肠病方"对DSS诱导的急性UC具有显著的改善作用,可能是通过调节NLRP3炎性小体和肠黏膜屏障相关蛋白的表达,从而减轻溃疡性结肠炎的症状.