目的:从先天肾虚影响颅骨培养成骨细胞Cx43、BGP表达情况入手,研究其影响骨早期发育的机制,并论证补肾填精法的作用.方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚.将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂.取各组新生仔鼠颅盖骨制取培养成骨细胞,观察细胞生长形态、ALP活性测定、RT-PCR检测第7、14、21天Cx43和BGPmRNA表达情况、免疫荧光染色检测第21天Cx43蛋白表达.结果:模型组仔鼠成骨细胞培养第5、7天ALP活性降低;第14、21天Cx43、BGPmRNA表达减少;第21天免疫荧光检测Cx43蛋白表达减少.上述指标与另两组比较差异显著(P＜0.05).结论:先天肾虚导致仔鼠颅骨成骨细胞分化成熟过程中Cx43、BGP表达减少,这是其影响骨早期发育的重要机制之一.左归丸补肾填精治疗可提高Cx43、BGP表达,保证成骨细胞正常功能,促进骨发育.

目的:考察21日龄恐伤肾仔鼠情志与海马区左旋多巴(L-DOPA)、多巴胺(DA)及3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)的相关性.方法:通过旁观电击法建立恐伤肾孕鼠模型,通过对其21日龄仔鼠进行旷场试验、糖水偏好实验和悬尾实验,观察其情志改变;通过脑立体定位仪在右侧海马区采集脑透析液,应用HPLC-ECD法测定仔鼠脑透析液中L-DOPA、DA、DOPAC含量.结果:与对照组比较,模型组21日龄仔鼠垂直得分、水平得分均降低,糖水消耗量少、糖水偏好值低,在空中停止挣扎的时间较长(P＜0.05);与对照组比较,模型组21日龄仔鼠海马组织细胞外液中各个灌流时间点L-DOPA、DA、DOPAC的水平均降低(P＜0.05);21日龄仔鼠海马区DA、DOPAC与其垂直得分、水平得分、糖水偏好值呈正相关,与空中停止挣扎的时间呈负相关关系(P＜0.05);神经递质L-DOPA与其糖水偏好值呈正相关,与空中停止挣扎的时间呈负相关关系(P＜0.05).结论:21日龄恐伤肾仔鼠情志与海马区L-DOPA、DA、DOPAC含量密切相关.

目的:探讨恐伤孕鼠对其21日龄子代情绪的影响.方法:采用旁观电击法制备恐伤母鼠动物模型.应用旷场实验、糖水偏好实验、悬尾实验分别测试对照组和模型组21日龄仔鼠情绪的变化.结果:旷场实验中,模型组垂直得分、水平得分低于对照组(P＜0.05);糖水偏好实验中,模型组糖水消耗量、糖水偏好值低于对照组(P＜0.05);悬尾试验中,模型组在空中静止时间较对照组长(P＜0.05).结论:恐伤孕鼠会造成其子代幼儿期情绪的改变.

目的 探讨镇喘保肺汤对肾气虚哮喘大鼠尿液代谢的影响,为肾气虚哮喘证候的诊断与治疗提供方法.方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,肾气虚哮喘模型组及中药组,每组各12只.除正常组外,其余两组均使用卵白蛋白注射联合恐伤肾及游泳力竭法建立支气管哮喘肾气虚证模型.中药组在实验第15天开始给予镇喘保肺汤2.0 g/kg灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃.连续干预15d后收集晨尿,通过LC-MS技术进行检测,采用PCA分析结合OPLS-DA分析并确定差异性表达代谢物.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠尿液中肾上腺酮、二十四碳六烯酸、胍丁胺、硬脂酸含量显著升高,前列腺素(19:0/0:0)、前列腺素(16:0/0:0)、尿可的松、脱氧胆酸、甘油二脂、皮质酮、I-尿胆素、脱氧皮质酮含量明显下降.与模型组比较,中药组大鼠尿液中脱氧皮质酮、蛋白酶抑制剂[0-20:0/22:4(7Z,10Z,13Z,16Z)]、21-羟基孕烯醇酮等含量显著升高,镁[0:0/22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/0:0]、二十碳五烯酸、肾上腺酮、溶血性磷脂酸[20:3(8Z,11Z,14Z)/0:0]、胍丁胺、二十二烷酸等明显下降.结论 肾气虚哮喘证候的出现可能与脂类代谢及肾上腺糖皮质激素分泌异常有关,而镇喘保肺汤则可能通过改善脂类代谢的途径,调节肾上腺糖皮质激素分泌预防和治疗支气管哮喘肾气虚证.

目的 观察恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质组织形态学影响及对大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响.方法 将受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常纽、模型组、补肾组,每组各10只.运用恐吓为主的复合应激法刺激模型组和补肾组孕鼠,正常组不予刺激.同时补肾组每日以中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组则根据雌鼠体重予以等量生理盐水灌胃,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠.雌鼠分娩后,仔鼠出生当天每窝随机取1～2只仔鼠断头取全脑,固定,染色,切片,在光镜和电镜观察其组织结构和超微病理改变.另每窝随机取1～2只仔鼠断头取全脑匀浆做定量PCR,观察各组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达变化.结果 模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;电镜下可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,如线粒体肿胀,高尔基复合体肥大,部分伴有细胞核固缩.补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变.补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P＜0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P＜0.01).结论 恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过补肾填精法调节Reelin信号通路从而阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生.

目的:探讨恐惧应激对孕鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、糖皮质激素(GC)含量及仔鼠发育情况的影响.方法:采用旁观电击法制备恐惧应激孕鼠模型,酶联免疫法测定孕鼠血浆ACTH和GC含量,并观察仔鼠的一般发育及神经发育情况.结果:与对照组相比,模型组孕鼠血浆ACTH、GC水平升高(P＜0.05);与对照组相比,模型组仔鼠出牙、被毛时间及出现感觉反射、负向趋地性、步态反射的时间延迟(P＜0.05).结论:恐惧应激可激活孕鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴,影响孕鼠健康;恐伤孕鼠还会对仔鼠一般发育及神经发育造成不良影响.

目的 探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)对小鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后急性炎症及神经功能的影响.方法 将C57BL6/N小鼠分为高ALA饮食组(孕鼠20只,新生鼠88只)和低ALA饮食组(孕鼠20只,新生鼠84只),采用气相色谱法检测两组小鼠脑多不饱和脂肪酸含量;运用控制性皮质撞击建立小鼠TBI模型.采用实时定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法和蛋白质印迹法分别检测TBI后0、4、24、96 h两组小鼠炎症因子及细胞标志物表达.运用转轮实验、横木行走实验和场景恐惧实验观察两组小鼠TBI后神经功能恢复情况.结果 高ALA饮食组小鼠脑二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)含量高于低ALA饮食组[15.48%±1.20%、9.98%±1.10%,P<0.05];高ALA饮食组小鼠TBI后TNF-α和IL-1β、IL-6和CCL12显著低于低ALA饮食组(P<0.05).高ALA饮食组小鼠TBI 24h后运动功能恢复较低ALA饮食组快.高ALA饮食组小鼠TBI 24 h后认知功能均优于低ALA饮食组.结论 增加脑部DHA水平可以减少急性炎症和改善TBI后神经功能恢复.

目的:考察恐伤孕鼠所产80日龄仔鼠情志与母鼠促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic Hormone,ACTH)、糖皮质激素(Glucocorticoids,GC)的相关性.方法:应用旁观电击法建立恐伤肾孕鼠模型,通过对80日龄仔鼠进行旷场试验、糖水偏好实验和悬尾实验,观察其情志改变;采用酶联免疫法(ELISA),检测孕鼠和80日龄仔鼠血浆中ACTH、GC的含量.结果:与对照组比较,模型组80日龄仔鼠垂直得分、水平得分、糖水消耗量和糖水偏好值均降低,空中停止挣扎时间增长,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,模型组恐伤孕鼠血浆ACTH、GC水平均升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);旷场试验中,80日龄仔鼠垂直得分与母鼠GC存在负相关,水平得分与母鼠ACTH、GC均存在负相关,差异有统计学意义(P＜0.05);糖水偏好实验中,80日龄仔鼠糖水偏好值与母鼠ACTH、GC均存在负相关,差异有统计学意义(P＜0.05);悬尾试验中,80日龄仔鼠停止挣扎的时间与母鼠ACTH、GC存在正相关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:恐伤孕鼠所产80日龄仔鼠的情志改变与母鼠ACTH、GC的变化密切相关.

目的:考察恐伤孕鼠所产21日龄仔鼠认知发育与海马区谷氨酸(Glutamic acid,GLU)、γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid,GABA)、甘氨酸(Glycine,GLY)的相关性.方法:应用旁观电击法建立恐伤肾孕鼠模型,通过对21日龄仔鼠进行Morris水迷宫实验,观察其认知发育;通过脑立体定位仪在右侧海马区采集脑透析液,应用HPLC-ECD法测定仔鼠脑透析液中GLU、GABA、GLY含量.结果:与对照组比较,21日龄模型组仔鼠平均逃避潜伏期时间久、游泳速度慢、跨台次数少、20％边缘区域停留时间长,差异均有统计学意义(P＜0.05);21日龄模型组仔鼠海马组织细胞外液中GLU、GLY的水平在各个灌流时间点均升高,而GABA的水平在各个灌流时间点均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);21日龄仔鼠海马区氨基酸类神经递质GLU、GLY与其平均逃避潜伏期、跨台次数存在负相关,与20％边缘区域停留时间呈正相关关系,差异有统计学意义(P＜0.05);神经递质GABA与其平均逃避潜伏期、跨台次数存在正相关,与20％边缘区域停留时间呈负相关关系,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:恐伤孕鼠可影响其21日龄仔鼠的认知发育及海马区GLU、GABA、GLY的含量,其认知发育水平与海马区GLU、GABA、GLY的含量改变有一定的关系.

目的:探讨宫内感染对新生大鼠出生后早期生长发育和神经行为发育的影响.方珐:通过将大肠埃希菌注入孕15d的SD大鼠的子宫颈内建立宫内感染大鼠模型,并观察宫内感染对孕鼠分娩的影响.HE染色法观察新生大鼠脑白质组织病理学变化;免疫组织化学染色和蛋白质印迹法检测新生大鼠脑白质组织胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、2',3'-环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、神经丝(NF)表达.随机监测新生大鼠早期生长发育和神经行为功能.结果:孕鼠宫内感染后,子宫和胎盘组织白细胞计数升高,提示建模成功,但宫内感染对分娩无显著影响.新生大鼠7日龄时脑白质部位结构稀疏呈筛网状改变,GFAP表达增加(P＜0.01),而CNPase和NF表达减少(P＜0.05或P＜0.01).与对照组新生大鼠比较,感染组新生大鼠出生体质量轻、体质量增长缓慢(P＜0.05或P＜0.01);耳廓分离、睁眼、平面翻正、负趋地性、听觉惊恐和游泳试验等完成日龄延长(P＜0.05或P＜0.01).结论:宫内感染可导致新生大鼠脑白质损伤,并引起新生大鼠早期生长发育及神经行为发育延迟.