目的:评价维奈克拉（VEN）联合化疗治疗具有不良遗传学特征的初治成年急性髓系白血病（AML）患者的疗效及对凋亡蛋白表达的影响。方法:2019年4月至2022年5月内蒙古医科大学附属医院收治的38例AML患者，11例为遗传学中风险，27例为遗传学高风险。采用随机数字法将患者分为化疗组（18例）和VEN+化疗组（20例）。化疗组患者接受2个周期的诱导化疗［伊达吡星（或柔红霉素）+阿糖胞苷］和6个周期的强化化疗（阿糖胞苷）。VEN+化疗组患者在化疗组治疗方案的基础上口服VEN。采用Western blot方法检测患者初诊及强化化疗后骨髓血抗凋亡家族蛋白骨髓细胞白血病蛋白1（MCL-1）和B细胞淋巴瘤2（BCL-2）的表达。结果:VEN+化疗组患者的客观缓解率（ORR）为90.0%，高于化疗组（55.6%， P=0.012）。化疗组患者的平均PFS为17.9个月，平均OS为21.3个月，VEN+化疗组患者的平均PFS为27.1个月，平均OS为32.2个月，均优于化疗组（ P值分别为0.038和0.004）。在遗传学中风险患者中，化疗组ORR为80.0%（4/5），平均PFS为27.9个月，VEN+化疗组ORR为100%（6/6），平均PFS为32.0个月，两组差异均无统计学意义（ P值分别为0.251和0.582）。在遗传学高风险患者中，化疗组ORR为46.2%（6/13），平均PFS为11.1个月，VEN+化疗组ORR为85.7%（12/14），平均PFS为23.7个月，均优于化疗组（ P值分别为0.029和 P=0.002）。在化疗组中，M5型患者（7例）和非M5型患者（11例）的平均PFS分别为20.0和15.45个月，差异无统计学意义（ P=0.298），但在VEN+化疗组中，M5型患者（8例）和非M5型患者（12例）平均PFS分别为19.6和30.2个月，差异有统计学意义（ P=0.031）。VEN+化疗组患者最常见的3～4级不良反应为白细胞减少、血小板减少、贫血和感染，与化疗组比较，发生率均未明显增加。Western blot检测显示，VEN能够持续抑制不同FAB分型AML患者骨髓有核细胞中BCL-2蛋白的表达，但VEN仅能使M5型患者骨髓有核细胞中MCL-1蛋白的表达水平提高。 结论:VEN联合强化化疗对具有不良遗传学特征的初治AML患者有较好的近远期疗效，且未增加不良反应。MCL-1蛋白的异常表达可能是导致VEN耐药的重要因素。

髓细胞白血病1（MCL-1）是一种抗凋亡蛋白，在促进多发性骨髓瘤、急性髓系白血病和非霍奇金淋巴瘤等的细胞存活中起关键作用。MCL-1在多种血液恶性肿瘤中高表达，是导致血液恶性肿瘤患者预后不良及化疗耐药的重要因素之一，因此，MCL-1是血液恶性肿瘤的重要治疗靶点。几种MCL-1抑制剂已进入临床试验阶段，包括S63845、AZD5991、S64315、AMG-176和AMG-397。用于血液恶性肿瘤的治疗方案中既有MCL-1抑制剂单药治疗，也有与B细胞淋巴瘤2抑制剂或免疫调节药物联合治疗，均表明MCL-1抑制剂可能是血液肿瘤靶向治疗的突破口。

目的 观察鼻咽清毒颗粒逆转鼻咽癌细胞顺铂耐药的作用效应,并探讨其作用机制.方法 采用MTS法检测系列质量浓度鼻咽清毒颗粒对人鼻咽癌CNE-2、人鼻咽癌顺铂耐药CNE2/DDP细胞增殖的抑制作用;计算鼻咽清毒颗粒对CNE-2、CNE2/DDP 细胞的耐顺铂半数抑制浓度(IC50)的影响;流式细胞技术测定 CNE2/DDP 的细胞凋亡情况;采用 Western blotting法检测CNE2/DDP细胞中铜转运蛋白和抗凋亡蛋白的表达.结果 CNE2/DDP细胞的顺铂耐药指数为RI值为 3.03;与顺铂组比较,鼻咽清毒颗粒0.1、1、10 mg/mL组分别与系列质量浓度的顺铂联用,对CNE-2细胞顺铂IC50分别降低12.19%、46.37%、63.81%;CNE2/DDP细胞顺铂IC50 分别降低 61.75%、70.42%、83.82%.流式细胞技术检测结果表明,与顺铂组比,顺铂+鼻咽清毒颗粒 0.1、1、10 mg/mL组CNE2-DDP晚期凋亡或坏死细胞增加(P＜0.01);Western blotting法检测结果表明,与顺铂组比较,顺铂+鼻咽清毒颗粒 0.1、1、10 mg/mL组铜特异性转运蛋白(CTR1)蛋白的表达均显著升高,B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、骨髓细胞白血病序列 1(Mcl-1)的表达显著降低(P＜0.05、0.01).结论 鼻咽清毒颗粒具有增强鼻咽癌细胞顺铂敏感性、逆转CNE2/DDP细胞顺铂耐药作用,其作用机制可能与增加CTR1 蛋白表达,降低Bcl-2、Mcl-1 蛋白表达有关.

软骨细胞是关节软骨中的独特驻留细胞类型,当其发生一系列病理改变时能够导致骨关节炎(osteoarthritis,OA)的发生.藁本内酯衍生物(ligusticum cycloprolactam,LIGc)是中药当归药效标志物藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)的衍生物,具有抗炎、抑制细胞凋亡等多种生物学功能.然而,其对OA软骨细胞的保护作用以及潜在的作用机制尚不清楚.该研究拟进行体外实验探索LIGc抗OA保护软骨细胞作用的分子机制.采用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导建立大鼠OA软骨细胞炎症模型,并单独使用LIGc和联合高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB(HMGB1/TLR4/NF-κB)信号通路阻断剂甘草酸(glycyrrhi-zic acid,GA)进行干预,以系统评估其治疗效果.通过cell counting kit-8(CCK-8)试剂盒检测不同浓度下LIGc对软骨细胞活力的影响,并筛选出最佳作用浓度;Annexin V-FITC/PI凋亡染色检测各组软骨细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组软骨细胞上清中环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素-2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、HMGB1、TLR4、NF-κB p65的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组软骨细胞HMGB1、TLR4、NF-κB p65、髓样分化因子88(MyD88)的基因表达变化.通过CCK-8确定了LIGc对软骨细胞的大致安全浓度范围,并进一步明确了LIGc作用的最佳浓度.在IL-1β的干预下,成功构建大鼠OA软骨细胞模型,且在该细胞模型中,软骨细胞凋亡率明显增加.与此同时,ELISA检测该组软骨细胞上清中COX-2、PGE2、TNF-α的表达均显著上升;Western blot检测发现模型组软骨细胞Bax、caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65的蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达受到明显抑制;RT-qPCR测定显示软骨细胞内HMGB1、TLR4、NF-κB p65、MyD88的基因表达经IL-1β干预后均有所提高.然而,随着LIGc的加入逆转了IL-1β诱导下上述一系列因子的表达变化.此外,LIGc联合GA共同作用下较单独添加LIGc对实验结果的逆转趋势更为明显.这些研究结果表明,从中药当归中提取并衍生的LIGc能够起到抑制软骨细胞炎症反应及减少软骨细胞凋亡的作用,且该作用的发挥可能与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路具有较强的相关性.LIGc保护软骨细胞的药理作用,对于延缓OA病情及改善患者临床症状具有潜在价值,值得进一步深入研究.

目的:研究Ywhab在小鼠B细胞淋巴瘤发生发展中的作用,并探讨其可能的分子机制.方法:使用生物信息学分析Ywhab与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的相关性.在小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞中感染逆转录病毒构建Ywhab基因过表达细胞系,并采用RT-qPCR和Western blot验证Ywhab的mRNA及蛋白(14-3-3β)水平;通过细胞计数法、CCK-8法和小鼠皮下成瘤实验检测Ywhab过表达对38B9细胞在体内外生长的影响;RT-qPCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达;应用蛋白质免疫共沉淀联合蛋白质谱(CoIP-MS)筛选与14-3-3β特异性结合的蛋白并采用Western blot及分子对接分析进行验证.结果:Ywhab基因在DLBCL中低表达,其低表达预示DLBCL患者的临床预后较差.与正常小鼠骨髓B细胞相比,Ywhab在38B9细胞中低表达.Ywhab过表达能在体内外诱导38B9细胞凋亡,促进凋亡蛋白Puma、Noxa和Bax的mRNA及蛋白表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl2的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).14-3-3β蛋白能特异性结合Hsp90aa1蛋白并抑制其表达,从而促进38B9细胞凋亡.结论:Ywhab能够显著诱导小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞凋亡,其机制可能是通过靶向抑制Hsp90aa1蛋白表达来实现的.

目的:探究髓系/淋巴系或混合谱系白血病3基因(myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia 3,MLL3)对宫颈癌细胞生长、转移、放射敏感性的影响.方法:选择60例宫颈鳞癌患者的癌组织及配对癌旁组织,采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测检测MLL3 mRNA水平.体外培养SiHa细胞,将其分为以下5组:Control组(不转染)、NC-sh组(转染阴性对照shRNA慢病毒)、MLL3-sh组(转染MLL3 shRNA慢病毒)、NC-OE组(转染阴性对照过表达慢病毒)和MLL3-OE组(转染MLL3过表达慢病毒).进一步采用2300EX直线加速器9 MeV β射线照射细胞建立放射抵抗SiHa细胞(SiHaR),然后将其分为:NC-sh组、MLL3-sh 组、8 Gy+NC-sh 组和 8 Gy+MLL3-sh 组.NC-sh 组和 MLL3-sh 组细胞不照射,8 Gy+NC-sh 组和 8 Gy+MLL3-sh 组细胞用9 MeV β射线照射8 Gy.采用MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测MLL3、共济失调毛细血管扩张征突变基因(ATM)、ATM-Rad3相关基因(ATR)、乳腺癌易感基因(BR-CA1)和RAD50双链断裂修复蛋白(RAD50)的mRNA水平;Western blot检测MLL3、Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、cleaved caspase 3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9和γ-H2AX的表达;免疫荧光染色检测γ-H2AX的表达.结果:与癌旁组织相比,宫颈鳞癌组织中的MLL3 mRNA水平显著降低(P＜0.001).与NC-sh组比较,MLL3-sh组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量升高(P＜0.05).与NC-OE组比较,MLL3-OE组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量降低(P＜0.05).与SiHa细胞相比,SiHaR细胞中的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P＜0.001).与8 Gy+NC-sh组比较,8 Gy+MLL3-sh组SiHaR细胞的细胞活力降低,γ-H2AX的蛋白相对表达量和γ-H2AX foci数目升高,ATM、ATR、BRCA1和RAD50的mRNA水平降低(P＜0.05).结论:宫颈癌细胞MLL3的表达下调促进了其生长和转移,但降低DNA损伤修复能力,提高宫颈癌细胞的放射敏感性.

目的 通过观察miR-29a对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡及心功能的影响,研究DCM的可能发病机制.方法 实验一,20 只SD大鼠随机分为对照组和糖尿病心肌病组(DCM组),每组 10 只.采用高糖高脂饮食联合注射链脲霉素建立DCM大鼠模型.测定大鼠体重、尿量、血压、血糖和HbA1c水平;qRT-PCR技术检测大鼠心肌细胞中miR-29a的表达.实验二,16 只SD大鼠随机分为对照组和DCM组,对照组 4 只,DCM组 12 只.DCM大鼠均按实验一方法成功造模.再将DCM大鼠随机分为:DCM组、DCM+NC mimics组和DCM+miR-29a mimics组,每组 4 只.根据分组给予大鼠心肌注射携带NC mimics或miR-29a-3p mimics慢病毒.M型超声检测大鼠心功能;HE染色评价心肌细胞肥大;流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平;Western blot检测心肌细胞中凋亡因子B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Bak1(BCL2-antagonist/killer 1)的表达水平.结果 实验一结果为DCM组大鼠血糖、HbA1c、收缩压、舒张压和尿量均明显高于对照组(P＜0.05);体重先增长,而实验末期下降.qRT-PCR检测显示,miR-29a在DCM大鼠心肌组织中的表达明显下调(P＜0.05).实验二超声结果显示,与对照组大鼠相比,DCM大鼠LVEF、LVFS、E/A比值和心率水平明显降低(P＜0.05),LVIDS、LVIDD、LVESV和LVEDV明显升高(P＜0.05).心肌注射miR-29a mimics后,DCM大鼠LVEF、LVFS和心率水平得到了提高(分别为 P＜0.05 或 P＜0.01),LVIDS、LVIDD、LVESV 和 LVEDV 明显降低(均为 P＜0.01);HE染色显示,与对照组相比,DCM组和DCM+NC mimics组大鼠出现明显的心肌细胞肥大.注射 miR-29a mimics后,心肌细胞肥大程度减轻(P＜0.01);流式细胞术检测显示,与对照组相比,DCM组、DCM+NC mimics组大鼠心肌细胞凋亡率均明显增加(P＜0.01),注射miR-29a mimics的DCM大鼠细胞凋亡率降低(P＜0.05);Western blot检测显示,与对照组相比,DCM组、DCM+NC mimics组大鼠心肌细胞凋亡蛋白Bax、Caspase-3 和Bak1 的表达增加(P＜0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达降低(P＜0.01).miR-29a的上调抑制了Bax、Caspase-3 和Bak1 的表达水平(分别为P＜0.01,P＜0.01 和P＜0.05),提高了Bcl-2和Mcl-1的表达水平(均为P＜0.01).结论 miR-29a可能通过调控心肌细胞凋亡相关因子影响心肌细胞凋亡水平,过表达miR-29a可能改善DCM大鼠的心功能.

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.

目的:研究甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone related peptide,PTHrP)核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)与C末端缺失对小鼠少突胶质细胞发育及髓鞘生成的影响.方法:采用6日龄PTHrP Knock In(PTHrPKI)小鼠及同窝野生型(wild type,WT)小鼠行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记,次日取材经免疫荧光染色检测海马区少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)的增殖能力,通过髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组化染色及电镜技术观察中枢神经系统(central nervous system,CNS)的髓鞘发生;体外培养5日龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠大脑皮层的O4阳性OPCs,运用免疫荧光染色观察Ki67阳性细胞数,流式分析检测凋亡细胞比例,Western blot检测与增殖凋亡相关蛋白的表达变化.继而行分化培养7d后,通过2’,3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(2’,3’-cyclic-nucleotide 3’-phosphodiesterase,CNPase)免疫荧光染色检测细胞分化能力.结果:与同窝WT小鼠相比,PTHrP KI小鼠脑内MBP阳性纤维面积减少,轴突髓鞘稀薄,海马区BrdU与少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte transcription factor 2,Oligo-2)双阳性细胞数减少.体外培养PTHrP KI小鼠OPCs的Ki67阳性细胞百分率降低,AV+/PI-凋亡细胞百分率升高;增殖相关B细胞淋巴瘤滤过性病毒插入位点1 (B cell-specific MLV integration site-1,Bmi-1)蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达降低,凋亡相关Caspase-3蛋白、p16蛋白表达升高.分化培养后,PTHrP KI小鼠来源OPCs的CNPase荧光染色强度降低.结论:PTHrP的NLS与C末端缺失可致小鼠OPCs增殖减少、凋亡增加、分化延缓,进而导致CNS轴突髓鞘形成障碍.

目的 探讨抑制第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)活性对缺氧缺血神经元凋亡的保护作用及机制.方法 培养新生SD大鼠皮质神经元,建立体外神经元氧糖剥夺(OGD)模型模拟细胞缺氧缺血.细胞分为3组:1.正常对照组:正常培养液孵育的神经元;2.OGD组:模型制备后,取再灌注后0.5、3.0、6.0、12.0、24.0、48.0 h神经元进行观察;3.PTEN抑制剂过氧钒酸钠(bpv)干预组:应用bpv处理神经元,再制备OGD模型,于再灌注后24 h观察.应用末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记法检测神经元凋亡,Western blot检测PTEN、p-PTEN、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、抗凋亡蛋白髓细胞淋巴瘤-1(Mcl-1)蛋白表达.结果 1.与正常对照组比较,OGD神经元凋亡增加(P＜0.05),PTEN表达增加,p-PTEN、p-Akt、p-GSK-3β及Mcl-1的表达降低(P均＜0.05),而Akt及GSK-3β表达未发生变化(P均＞0.05).2.与OGD组比较,bpv干预后神经元凋亡减少(P＜0.05),p-PTEN、p-Akt、p-GSK-β和Mcl-1的表达增加(P均＜0.05),而PTEN、Akt及GSK-3β并未发生变化(P均＞0.05).结论 缺氧缺血诱导神经元凋亡发生,PTEN/Akt/GSK-3β/Mcl-1信号通路参与调控其凋亡.抑制PTEN活性后,Akt及GSK-3β磷酸化水平增加,使Mcl-1泛素化降低,从而减少神经元凋亡.