近年抗PD-1/PD-L1免疫治疗药物已广泛应用于多种晚期肿瘤的治疗,因此保证PD-L1免疫组化结果的准确性尤为重要.免疫组化技术是对组织或细胞中的抗原进行定性、定位或定量的方法.抗原免疫活性的高低直接影响抗原的检出率和准确率.

纳米抗体(nanobody，Nb)是克隆重链抗体可变区得到的最小功能性抗原结合片段。Nb相较于经典抗体具有亲和力强、稳定性好、特异性强和免疫原性低等众多优点，在多种难治性疾病，特别是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)的诊治方面吸引了越来来越多的关注。近20年来，关于Nb在HIV感染相关领域的研究呈指数级增长，这些研究为人类感染HIV的检测、预防和治疗方法带来了全方位的更新，同时，对Nb创新性的改造也为Nb在HIV相关临床应用带来了新的思路。

目的:比较限制性抗原亲和力酶联免疫法（LAg-Avidity EIA）和集合核酸法评估MSM的HIV-1新发感染率的可行性 。方法:对2016-2017年云南省13个州（市）MSM哨点监测采用滚雪球方法采集样本进行HIV-1抗体检测，确证阳性样本进行LAg-Avidity EIA检测，HIV-1抗体阴性样本进行集合核酸法检测，分别采用LAg-Avidity EIA新发感染算法和集合核酸法检测新发感染算法计算HIV-1新发感染率，并进行结果的比较。结果:研究样本共计5 363份，其中HIV-1抗体阳性样本407份（含既往阳性177份），HIV-1抗体阴性样本4 956份，完成LAg-Avidity EIA检测211份（91.7%），判为新近感染69份；完成集合核酸法检测4 469份，判定为HIV-1感染窗口期8份。LAg-Avidity EIA估算的2016年和2017年HIV-1新发感染率分别为3.36%和4.84%，集合核酸法估算的HIV-1新发感染率分别为3.27%和3.02%，2种方法估算的HIV-1新发感染率差异无统计学意义。结论:LAg-Avidity EIA和集合核酸法估算得到2016-2017年云南省哨点MSM HIV-1新发感染率一致性较好，2种方法用于HIV-1新发感染率的连续监测会有较好的稳定性。

目的:探讨微卫星不稳定(MSI)及Ki-67表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系及对预后的影响，为结直肠癌的预后判断提供参考。方法:回顾性分析2017年1月—2019年12月在新乡医学院第一附属医院普外科行结直肠癌根治术并经病理确诊的183例结直肠癌患者的病例资料，其中男性101例(55.2%)，女性82例(44.8%)，年龄20~86岁，平均年龄(60.27±13.13)岁。根据错配修复蛋白免疫组化染色结果，将患者分为MSI-H组( n＝32)和MSI-L/MSS组( n＝151)；根据Ki-67抗原免疫组化染色结果，将患者分为Ki-67低表达组(<82.5%， n＝136)和高表达组(≥82.5%， n＝47)，其中Ⅲ+Ⅳ期患者中Ki-67低表达62例(78.5%)、高表达17例(21.5%)。收集分析患者的临床病理资料、无病生存期和总生存期等数据。计数资料以例(%)表示，组间比较采用 χ2检验或Fisher精确检验进行比较，并采用多因素Logistic回归模型分析微卫星不稳定及Ki-67表达水平与结直肠癌临床病理特征的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线及COX比例风险回归模型分析微卫星不稳定及Ki-67表达水平与无病生存期和总生存期的相关性。 结果:单因素分析显示，MSI-H组和MSI-L/MSS组患者在性别( χ2＝4.37， P＝0.037)、肿瘤部位( χ2＝26.40， P<0.001)、肿瘤最大径( χ2＝11.12， P＝0.001)、神经侵犯( χ2＝5.53， P＝0.019)等方面差异有统计学意义。经多因素Logistic回归模型分析显示，只有性别( OR＝3.013，95% CI：1.183~7.672， P＝0.021)、肿瘤部位( OR＝0.167，95% CI：0.067~0.419， P<0.001)、神经侵犯( OR＝0.202，95% CI：0.042~0.968， P＝0.045)为MSI状态的独立相关因素。在Ⅲ+Ⅳ期结直肠癌中，Ki-67低表达组与高表达组在肿瘤部位方面差异有统计学意义( χ2＝3.91， P＝0.048)。多因素COX比例风险回归模型分析显示Ki-67高表达( HR＝0.301，95% CI：0.118~0.768， P＝0.012； HR＝0.275，95% CI：0.083~0.912， P＝0.035)、MSI-H( HR＝0.072，95% CI：0.010~0.525， P＝0.009； HR＝0.122，95% CI：0.017~0.900， P＝0.039)为影响结直肠癌患者术后无病生存期、总生存期的独立保护因素。 结论:MSI-H型结直肠癌常见于男性、右半结肠癌、神经侵犯阴性的患者；在Ⅲ+Ⅳ期结直肠癌中，右半结肠癌Ki-67表达水平较左半结直肠癌低；MSI-H型、Ki-67高表达的结直肠癌患者无病生存期、总生存期较长，预后较好。

目的:探讨 177Lu标记的放射性药物制备的方法，进行质量控制及初步的临床应用。 方法:分别通过手工标记及自动化标记2种方法对临床常用的 177Lu-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)- D-1-苯丙氨酸-3-酪氨酸-奥曲肽(TOC)和 177Lu-前列腺特异膜抗原(PSMA)-I&T进行标记，考察标记中前体和核素的用量、反应温度、pH值、反应时间、标记产率和比活度等因素，并对标记产物的澄清度、pH值、无菌、细菌内毒素和体外稳定性等进行质量控制。将 177Lu-PSMA-I&T初步临床应用于前列腺癌患者的治疗，并通过SPECT/CT显像进行疗效评价。采用配对 t检验分析数据。 结果:2种标记方法前体和核素用量、反应温度、pH值、反应时间等基本相同，均具有较高的产率和比活度。 177Lu-DOTA-TOC自动化标记产率高于手工标记[(99.2±0.4)%与(95.3±1.5)%； t＝7.17， P<0.001]，比活度分别为(91.6±13.7)与(89.1±13.2) GBq/μmol； 177Lu-PSMA-I&T自动化标记的产率亦高于手工标记[(99.6±0.3)%与(95.7±1.3)%； t＝8.24， P<0.001]，比活度分别为(96.1±14.3)与(93.2±13.8) GBq/μmol。标记产物均为无色澄清溶液，pH值6.5~7.0，无菌和细菌内毒素等均符合规定。标记产物48 h后放化纯均>95%，具有良好的稳定性。 177Lu-PSMA-I&T应用于前列腺癌患者后的显像示原发灶及转移灶均有较好摄取。 结论:177Lu标记的放射性药物的标记简便，产率高且稳定。采用自动化标记可简化流程、降低辐射剂量并提高产率。

目的:制备新型 68Ga标记三七素类前列腺特异膜抗原(PSMA)靶向探针，并进行理化性质和体内外评估。 方法:采用固相合成法制备配体P151，测定其亲和性。将配体加入到 68GaCl 3与醋酸钠混合的溶液中，95 ℃反应10 min，使用放射性高效液相色谱(HPLC)测定其标记率及体外稳定性。评估 68Ga-P151的脂水分配系数(log P)，并进行细胞摄取实验。对正常昆明(KM)小鼠进行体内生物分布测定；对前列腺癌22Rv1荷瘤裸鼠注射 68Ga-P151后进行microPET显像，并与 68Ga-PSMA 617进行对比。2组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:成功合成目标配体P151，其抑制常数 Ki为0.58 nmol/L，标记率和放化纯均≥95%；37 ℃放置2 h后， 68Ga-P151在生理盐水和人血清白蛋白(HSA)溶液中的放化纯仍≥95%，表明其体外稳定性好； 68Ga-P151的脂水分配系数(log P)为-2.65±0.17，表明其亲水性较好。注射 68Ga-P151后60 min，前列腺癌LNCaP细胞的总摄取值为(0.83±0.04)百分注射活度(%IA)/10 5个细胞，并可被PSMA抑制剂(ZJ-43)所抑制。正常小鼠体内生物分布显示 68Ga-P151主要经肾脏排泄出体外，在其他组织中摄取较低；荷瘤裸鼠microPET显像显示， 68Ga-P151与 68Ga-PSMA 617的最大标准摄取值(SUV max：0.79±0.23和0.54±0.05； t＝2.12)、肿瘤/肾脏比值(2.04±0.65和1.88±0.33； t＝0.44)、肿瘤/肌肉比值(12.83±5.18和6.95±1.63； t＝2.17)差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:68Ga-P151制备简单、标记率高、生物分布理想，可对PSMA阳性肿瘤显像，其显像效果与 68Ga-PSMA 617相当，有望应用于前列腺癌的诊断。

mRNA疫苗技术是近年逐渐发展起来的疫苗新技术之一，其在稳定性、高效投递等方面的技术日趋成熟。mRNA疫苗在细胞内表达抗原，通过刺激免疫系统产生B、T细胞免疫应答等多种效应机制，可达到预防传染病的作用。同时由于其是全合成制备，生产工艺简单，具有快速应对诸如新型冠状病毒感染等突发传染病疫情的潜力。为了解传染病mRNA疫苗的开发与研究现状，本文重点对mRNA疫苗的结构特点、优势和挑战以及应用于传染病疫苗研究的现状进行了综述，为新型冠状病毒等传染病mRNA疫苗的研发提供一定借鉴。

目的:评估 177Lu－前列腺特异膜抗原(PSMA)－3Q在转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)治疗中的潜力，并与 177Lu－PSMA－I&T进行比较。 方法:制备 177Lu－PSMA－3Q并进行质量控制和稳定性检测；对 177Lu－PSMA－3Q、 177Lu－PSMA－I&T在正常BALB/c小鼠和22Rv1荷瘤鼠体内进行药代动力学评价及生物分布研究；对2例来自解放军总医院的mCRPC患者(60岁和76岁)分别静脉注射 177Lu－PSMA－3Q、 177Lu－PSMA－I&T (7.40±0.74) GBq后24、72、120 h进行SPECT显像。采用两独立样本 t检验分析数据。 结果:制备得到的 177Lu－PSMA－3Q总活度为74 GBq，未校正产率为95%，室温放置168 h后放化纯仍大于95%。 177Lu－PSMA－3Q和 177Lu－PSMA－I&T的分布半衰期分别为(0.75±0.22)和(0.86±0.19) min，清除半衰期分别为(24.74±3.77)和(29.53±3.42) min。正常小鼠生物分布结果示，注射后5 d 177Lu－PSMA－3Q在肝、肺、肾中的摄取值明显低于 177Lu－PSMA－I&T( t值：4.24～8.36，均 P<0.05)。22Rv1荷瘤鼠生物分布结果示， 177Lu－PSMA－3Q在注射后24 h的肿瘤摄取最高，且高于 177Lu－PSMA－I&T[(0.856±0.183)与(0.579±0.126)每克组织百分注射剂量率(%ID/g)； t＝2.78， P＝0.024]；快速的清除模式使 177Lu－PSMA－3Q有着高肿瘤/肌肉比值(99.604±11.106)，且明显高于 177Lu－PSMA－I&T的摄取比值(45.078±10.444； t＝7.80， P<0.001)。在患者SPECT显像中， 177Lu－PSMA－3Q和 177Lu－PSMA－I&T 120 h的病灶残余计数分别占24 h的0.32±0.04与0.58±0.04，差异有统计学意义( t＝7.62， P＝0.002)。 结论:177Lu－PSMA－3Q标记简便，产率和放化纯高，稳定性好，具有良好的生物学性能，患者体内靶向性好，滞留时间较长，背景清除速率快，是较理想的靶向PSMA的前列腺癌治疗药物。

目的:探讨1例ABw07亚型先证者所携带的Bw07等位基因及其转移酶改变的分子生物学机制。方法:选取1例2岁男性患儿为研究对象。先证者及其父母的外周血采用试管法鉴定ABO血型，并对三者进行ABO亚型PCR-SSP检测、ABO基因测序以确定其血型基因型，最后通过模拟突变、DUET结构预测、分子动力学分析和体外细胞实验验证p.Arg352Gln突变对Bw07转移酶的影响。结果:先证者及其母亲血清学表型分别为ABw和Bw，父亲为正常的A型，ABO亚型PCR-SSP检测确定三者基因型分别为Bw07/A、Bw07/O、A/A，Sanger测序进一步验证了先证者及其母亲携带有Bw07基因，模拟突变显示R352Q突变后分子间作用力减弱，DUET预测该p.Arg352Gln突变可以影响Bw07转移酶的热力学稳定性，分子动力学分析证实了热力学稳定性的改变主要是与125-133、193-198、336-354区域氨基酸骨架原子出现较大的波动性有关，体外细胞实验进一步验证了Bw07转移酶合成的抗原减弱。结论:ABw07亚型的形成与Bw07转移酶上高度保守的Arg352突变成Gln有关。

目的:构建可快速、灵敏、定量检测肺炎支原体(MP)免疫球蛋白(Ig)M和IgG抗体的时间分辨荧光免疫层析法(TFICA)。方法:基于毛细管作用，应用铕微球示踪，通过对抗原/抗体微球偶联比、微球稀释度、划膜浓度和血清稀释度进行优化，建立检测MP-IgM和IgG抗体的TFICA，并考核其方法学性能(如灵敏度、特异性、稳定性)。通过对55名健康体格检查者进行检测获得TFICA的正常参考值；采用TFICA与市售化学发光法试剂盒分别检测88名受试者(33例患者，55名健康体格检查者)的血清样本，计算结果一致性( Kappa检验)。 结果:反应条件为：鼠抗人IgG抗体和MP抗原与微球分别按质量比1∶20和1∶100反应，微球工作稀释度分别为1∶200和1∶100；MP抗原和羊抗人IgM的划膜浓度分别为0.5和1.0 g/L；血清稀释度均为1∶300。建立的MP-IgM和IgG TFICA测量范围分别为(0.78~70.00)×10 3相对单位(RU)/L和(0.17~200.00)×10 3 RU/L，检测灵敏度分别为0.78×10 3和0.17×10 3 RU/L，与甲状腺过氧化物酶抗体、心磷脂酶抗体、甲状腺球蛋白抗体均无交叉反应；相对标准偏差分别为3.7%~14.8%和2.9%~14.0%。经37 ℃ 5 d快速老化，MP-IgM和IgG TFICA试剂的平均信号降低率分别为13.7%和14.2%，提示热稳定性好。该法正常参考值分别为3.33×10 3和2.61×10 3 RU/L；与市售化学发光试剂盒检测结果的 Kappa值分别为0.79和0.76。 结论:TFICA检测MP-IgM和IgG抗体具有操作简捷、灵敏度高、特异性好、可定量的优点，具备一定的临床应用价值。