目的 探讨合并肾功能不全的非瓣膜性房颤(AF)患者服用利伐沙班抗凝治疗期间,应用抗活化因子X活性(anti-FXa)试验监测的利伐沙班血药浓度与临床相关出血事件的相关性.方法 纳入2020年1月～2021年1月在我院住院或门诊确诊为非瓣膜性AF且合并肾功能不全患者96例,均选择利伐沙班进行抗凝治疗.根据随访期间是否发生临床相关出血事件将所有患者分为出血组(21例)和未出血组(75例).比较两组患者一般临床资料、实验室检查指标及anti-FXa试验相关数据.采用多因素logistic回归分析评估临床相关出血事件发生的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析利伐沙班血药浓度评估临床相关出血事件发生风险的诊断效能.结果 所有患者随访期间共发生临床相关出血事件21例[21.9％,其中临床相关大出血1例(1.0％),临床相关非大出血事件20例(20.8％)].出血组患者血清Ccr显著低于未出血组(P＜0.05).服药后3 h患者利伐沙班血药浓度及凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和国际标准化比率(INR)均显著高于服药后24 h(P＜0.05).出血组患者服药后3 h利伐沙班血药浓度峰值及服药后24 h利伐沙班血药浓度谷值均显著高于同一服药时间段未出血组,服药后3 h PT、APTT和INR均显著高于同一服药时间段未出血组;未出血组患者服药后24 h利伐沙班血药浓度及PT均显著低于同组服药后3 h,FX:C高于同组服药后3 h;出血组患者服药后24 h利伐沙班血药浓度显著低于同组服药后3h,FX:C高于同组服药后3h(P＜0.05).多因素logistic回归分析结果显示,利伐沙班血药浓度峰值和Ccr均为临床相关出血事件发生的独立影响因素(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,取利伐沙班血药浓度峰值277.9 ng/ml作为最佳截断值时曲线下面积(AUC)为0.843,预测合并肾功能不全的非瓣膜性AF患者临床相关出血事件发生的敏感度为0.905,特异度为0.707.结论 Anti-FXa试验监测利伐沙班血药浓度可用于评估合并肾功能不全的非瓣膜性AF患者服用利伐沙班抗凝治疗期间临床相关出血事件的发生风险.

目的:探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法:选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象，其中男3例、女3例，年龄26~49岁、中位年龄33岁，受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本，先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP)；再加入0.08 mmol/L CaCl 2, 37 ℃孵育激活血小板；然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原，获得sPL。培养RA-FLS，分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组，分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度；细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性；流式细胞术测定各组细胞的凋亡率；体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力；Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力；Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。 结果:(1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL，TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL，IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL，组间比较差异均有统计学意义( F＝12.186、11.934、10.709， P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%，细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%，小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个，迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个，侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个，组间比较差异均有统计学意义( F＝8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组，细胞凋亡率均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组，细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组，Bax蛋白相对表达量均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组，而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用，对RA-FLS凋亡具有促进作用，且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。

肝素抵抗现象逐渐成为临床关注热点，尤其在重症患者中，肝素抵抗可导致抗凝治疗失败或增加大出血风险，及时识别肝素抵抗有助于精准调整肝素用量，避免病情恶化以及不良事件发生。肝素抵抗从机制上可分为抗凝血酶（AT）介导和非AT介导，常见病因主要包括血浆AT缺乏、肝素诱导的血小板减少症、重症感染、接受体外循环或体外膜肺氧合（ECMO）治疗、使用Xa因子逆转剂等。目前，临床上多通过分析活化部分凝血活酶时间（APTT）比值与抗活化因子X活性试验（anti-FXa）的一致性来识别肝素抵抗。主要处理策略包括积极治疗原发病、补充AT及更换抗凝药物。

目的:探讨 miR-93-5p对缺氧/复氧(H/R)诱导的 H9c2心肌细胞凋亡的作用机制.方法:取对数生长期的 H9c2心肌细胞用于实验,将细胞分为control组、H/R组、miR-NC组、miR-93-5p mimic组.miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段 50μmol/L,miR-93-5p mimic组转染 miR-93-5p模拟物.24 h后,除 control组外,H/R组、miR-NC组、miR-93-5p mimic组建立 H/R模型.2 h后采用聚合酶链式反应(PCR)法检测心肌细胞中 miR-93-5p表达水平,噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果:与 control组比较,H/R组 miR-93-5p表达、心肌细胞存活率、SOD和 GSH-Px活性、Bcl-2 蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、Cleaved Caspase-3 和 Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与 H/R 组和miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组 miR-93-5p表达、心肌细胞存活率、SOD和 GSH-Px活性、Bcl-2 蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、Cleaved Caspase-3和 Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:miR-93-5p通过降低H/R心肌细胞的炎症和氧化应激水平,发挥抗细胞凋亡作用.

目的 探究加味柴胡当归汤对肝星状细胞纤维化的抑制作用及其通过调控磷脂酰肌醇 3 激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/B细胞淋巴瘤(Bcl)-2信号通路抗肝纤维化的机制.方法 培养永生化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6),设置正常对照组(不作干预)、模型组[血小板衍生生长因子(PDGF)-BB干预],中药组(PDGF-BB+含药血清干预),激动剂+中药组(PDGF-BB+HY-101625+含药血清干预),抑制剂+中药组(PDGF-BB+LY294002+含药血清干预),采取不同干预方式进行实验.使用CCK-8试剂盒和细胞凋亡试剂盒检测细胞增殖活性和凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP组织抑制剂(TIMP)-1 表达水平;进行Western印迹实验分析细胞中 Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达;利用qRT-聚合酶链反应(PCR)法测定细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT mRNA表达.结果 与正常对照组相比,模型组细胞增殖活性、α-SMA、COL-Ⅰ、TIMP-1、Bcl-2 表达及 PI3K、AKT、mTOR 磷酸化水平显著升高,凋亡率、MMP-2、MMP-9、Bax、Caspase-3和Caspase-9表达显著降低(P<0.05).与模型组相比,中药组、激动剂+中药组、抑制剂+中药组细胞增殖活性、Bcl-2、α-SMA、COL-Ⅰ、TIMP-1表达及PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平明显降低,凋亡率、MMP-2、MMP-9、Bax、Caspase-3和Caspase-9表达水平明显升高(P<0.05).结论 加味柴胡当归汤可通过调控PI3K/AKT/Bcl-2 信号通路,抑制肝星状细胞活化,逆转肝纤维化进程.

目的 观察苍术素对人骨关节炎(OA)软骨细胞的影响.方法 分别用10、50、100 mg/kg的苍术素预处理人OA软骨细胞,随后用IL-1β(10 μg/L)刺激24h.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测环氧合酶2(COX2)和一氧化氮(NO)的表达量;通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测量基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13、COX2和NO的基因表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测核因子-κB(NF-κB)通路的活性及人肝X受体α(LXRα)的表达量.结果 苍术素显著降低IL-1β诱导的人OA软骨细胞中MMP-1 (618.99±12.68、478.65±11.25、243.17±7.88,t =5.120,P ＜0.05)、MMP-13 (62.78 ±5.16、48.35±4.28、30.66 ±4.17,t =4.178,P＜0.05)、COX2(71.41 ±4.33、58.62±3.65、37.48±2.52,t=4.782,P＜0.05)、NO(245.87±9.96、183.26±8.47、120.56±5.38,t=5.030,P＜0.05)的表达.苍术素通过抑制IL-1β介导的NF-κB活化以缓解软骨细胞炎性反应;苍术素通过激活LXRα的活性以抑制IL-1β介导的软骨细胞炎性反应(P＜0.05).结论 苍术素在人OA软骨细胞中有抗炎活性作用.

目的 探讨三氯化钆(GdCl3)抑制Kupffer细胞活化减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IRI组)、三氯化钆组(Gd+ IRI组)、钴原卟啉(CoPP+ IRI)组,每组12只.Sham组与IRI组分别于术前24 h经腹腔注射等体积生理盐水;Gd+ IRI组、CoPP+ IRI组分别于术前24 h经腹腔注射GdCl3(20 mg/kg)、CoPP(5mg/kg).除Sham组仅行开关腹手术外,其他组70％肝脏缺血60 min再灌注6h.比较各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平.酶联免疫吸附试验检测小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)活性.肝组织实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、血红素血氧合酶-1(HO-1)及保护性因子IL-10的表达.免疫组织化学法标记肝胆管上皮细胞中凋亡相关基因Fas、FasL的表达.正态分布的两样本均数比较采用独立样本t检验,多组之间比较采用方差分析.结果 IRI组、Gd+ IRI组及CoPP+ IRI组血清ALT分别为(1 236.7±62.4)、(638.9士50.9)、(740.3±53.1)U/L,AST分别为(1107.8±68.3)、(568.5±42.7)、(679.1±49.9)U/L,Gd+ IRI组及CoPP+ IRI组明显低于IRI组,差异均有统计学意义(t=6.721、4.732、5.984、2.691,P＜0.05).与IRI组比较,Gd+IRI组和CoPP+ IRI组的SOD、GSH-Px活性明显提高(=7.301、1.937,P＜0.05),且MDA含量显著减少(t=9.519、8.635,P＜0.01),Gd+ IRI组及CoPP+IRI组TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达明显降低(=6.721、2.316,P＜0.05),而IL-10、HO-1的mRNA相对表达明显升高,差异有统计学意义(t=2.973、7.921,P＜0.01).肝血流再灌注6h后,Gd+ IRI组及CoPP +IRI组小叶间胆管上皮细胞Fas阳性表达率分别为22.4％、29.7％,低于IRI组(38.9％)差异有统计学意义(x2 =6.561、2.547,P＜0.05);Gd+ IRI组及CoPP +IRI组FasL阳性表达率为21.2％、25.1％,明显低于IRI组(36.5％)(x2 =5.982、3.188,P＜0.05).结论 三氯化钆抑制Kupffer细胞活化,通过抗氧化、抗炎和抗细胞凋亡的作用减轻小鼠HIRI,其机制可能与促进HO-1的表达及下调Fas/FasL的表达有关.

目的 以凝血因子Ⅻ(coagulation factor Ⅻ,FⅫ)为靶点探讨药根碱抗血栓作用的机制.方法 通过Ledock软件将药根碱分子与内源性凝血途径接触激活阶段关键靶蛋白FⅫ、活化凝血因子FⅫ(actived coagulation factor Ⅻ,FⅫa)、凝血因子Ⅺ(co-agulation factor Ⅺ,FⅪ)和活化凝血因子Ⅺ(actived coagulation factor Ⅺ,FⅪa)进行分子对接,以结合能低于-5 kcal/mol作为阈值判断药根碱与接触激活因子的结合活性;采用体外凝血实验法检测血浆活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、血浆凝血酶原时间(plasma prothrombin time,PT)、凝血酶时间(plasma prothrombin time,TT);乏因子血浆纠正试验检测FⅫ、FⅪ、凝血因子Ⅸ(coagulation factor Ⅸ,FⅨ)、凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ,FⅧ)、凝血因子X(coagulation factor X,FX)和凝血因子Ⅶ(coagulation factor Ⅶ,FⅦ)的活性的抑制作用;Western blot法检测药根碱对FⅫ蛋白激活的抑制作用.结果 (1)分子对接实验表明,药根碱与FⅫa、FⅪa结合能均低于-5 kcal/mol,结合活性良好.(2)体外实验中,0.2-0.8 mg/mL药根碱均可显著延长APTT(P＜0.01),但不延长PT和TT(P＞0.05).(3)药根碱各剂量均显著降低FⅫ活性(P＜0.01),药根碱高剂量(0.8 mg/mL)可降低FⅪ活性(P＜0.05),但对FⅨ、FⅧ、FX及FⅦ活性无显著影响(P＞005).(4)药根碱各剂量均显著抑制FⅫ蛋白的激活(P＜0.01).结论 药根碱与FⅫa对接较好,显著延长APTT,抑制FⅫ蛋白激活,降低血浆FⅫ活性,提示其抗栓作用可能通过抑制FⅫ的活性而发挥.

为探究转移相关肺腺癌转录本 1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对 miR-146a 的调控作用及其对关节软骨细胞凋亡和基质降解的影响,采用RT-PCR检测临床软骨组织中miR-146a和MALAT1的表达,分析其变化的相关性;双荧光素酶报告基因试验检测miR-146a和MALAT1的靶向作用关系;之后分组并转染miR-146a mimics或MALAT1重组过表达载体,经过IL-1β处理,采用RT-PCR检测miR-146a表达,CCK-8检测细胞增殖水平,Hoechst检测细胞凋亡水平,Western blotting检测活化型半胱天冬酶3(cleaved caspase 3,cl-CASP3)、B细胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关 X 蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、基质金属蛋白酶 13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)、带有血小板凝血酶敏感蛋白结构域的解聚素金属蛋白酶5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5,ADAMTS-5)、Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ,COL2)、聚蛋白聚糖蛋白水平.结果显示,相比于普通关节软骨组织,骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨组织MALAT1相对表达水平升高(P＜0.05),miR-146a相对表达水平降低(P＜0.05),MALAT1与miR-146a表达呈负相关(r=-0.907 8,P＜0.001);双荧光素酶报告基因试验显示,miR-146a和MALAT1存在靶向作用关系;相比于IL-1β组,miR-146a组细胞增殖水平降低,细胞凋亡率及cl-CASP3、Bax相对蛋白表达水平升高,Bcl-2相对蛋白表达水平降低,同时MMP-13和ADAMTS-5相对蛋白表达水平升高,COL2和聚蛋白聚糖相对蛋白表达水平降低(均P＜0.01);MALAT1过表达可显著降低miR-146a的表达水平,提高细胞增殖活性并抑制其凋亡,同时降低MMP-13和ADAMTS-5相对蛋白表达水平,提升COL2和聚蛋白聚糖相对蛋白表达水平(均P＜0.01).该研究提示,MALAT1可通过靶向作用于miR-146a发挥对软骨细胞的抗凋亡作用.

目的:探讨珠子参皂苷对胃癌细胞HGC-27抑制作用及可能的机制.方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测珠子参皂苷10、20、40、60、80、100、120 μg/mL对肿瘤细胞(HGC-27、A549、MCF-7)和正常细胞(MCF10a、HL-7702)增殖的影响;划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移、侵袭能力,平板克隆和Hoechst 33258染色试验检测细胞增殖和凋亡,流式细胞术检测线粒体活性,双荧光素酶报告试验证实miR-10a靶向抑制磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(Pik3ca)的表达;Real-time PCR法检测miR-10a、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad mRNA表达,Western blot法检测p-PIK3CA、PIK3CA、p-AKT、AKT、非甾体类抗炎药相关基因-1(NAG-1)、BCL-2、BCL-XL、BAX、BAD、细胞色素c(Cytochrome c)、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达.结果:珠子参皂苷对HGC-27细胞的增殖具有较强抑制作用(IC50 =29.77 μg/mL),呈浓度依赖性显著抑制HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭,明显降低线粒体活性、增加LDH释放率、诱导细胞凋亡(P＜0.05或P＜0.01),证实miR-10a可靶向抑制Pik3ca表达,珠子参12.5、25、50 μg,/mL可上调miR-10a、Bax、Bad mRNA表达,下调Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达,上调Cytochrome c、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Apaf-1、AIF蛋白表达和增加BAX/BCL-2、BAD/BCL-XL蛋白及基因比率,下调NAG-1、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9、XIAP蛋白表达和降低p-PIK3CA/PIK3CA、p-AKT/AKT比率.结论:珠子参皂苷能够抑制HGC-27胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其机制可能与上调miR-10a表达、抑制PI3K/AKT/NAG-1信号通路激活,进而参与调控BCL-2及Caspase家族途径有关.