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细菌通过白细胞介素1β信号通路诱导皮肤再生
编辑人员丨4天前
促进皮肤再生的环境因素在很大程度上是未知的。免疫系统和微生物组被认为在皮肤修复和再生组织结构中起作用,但它们之间的确切相互作用尚不清楚。该研究评估了皮肤细菌在创面愈合和创面诱导的毛囊新生(WIHN)中的作用,WIHN模型是一种罕见的成人器官生成模型。WIHN水平和干细胞标志物的表达与细菌计数相关,在无菌小鼠中的表达水平最低,在常规无特殊病原体小鼠中的表达水平次之,而在野生型小鼠中的表达水平最高,甚至WIHN在感染致病性金黄色葡萄球菌的小鼠中的表达水平同野生型。通过更换笼子或外用抗生素减少皮肤微生物群,可降低WIHN水平。其机制可能为,细菌通过炎症细胞因子IL-1β和KC依赖的IL-1R-髓样分化因子88信号通路促进皮肤再生。此外,外用广谱抗生素也可减缓成年志愿者的皮肤创面愈合进程。因而,临床上需要重新考虑常规应用局部抗生素治疗创面的必要性。
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编辑人员丨4天前
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社会隔离对小鼠认知功能及海马星形胶质细胞表型转换的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨社会隔离(social isolation,SI)对小鼠认知行为及海马星形胶质细胞表型转换的影响。方法:20只3~4周龄雄性C57BL/6小鼠根据随机数字表法分为正常群居组(group house,GH组)和社会隔离组(SI组),SI组小鼠单笼饲养8周建立社会隔离模型,GH组小鼠5只/笼正常饲养。采用新旧事物识别实验和新旧位置识别实验检测小鼠认知功能;采用免疫组织化法、RT-PCR和Western blot分别检测小鼠海马星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达变化;Sholl Analysis定量分析星形胶质细胞形态变化;RT-PCR和Western blot法检测海马A1和A2型星形胶质细胞标志物蛋白酶体亚单位β-8(proteasome subunit beta 8,PSMB8)以及钙结合蛋白S100家族的成员(a member of the S100 family of Ca 2+-binding proteins,S100A10)的表达。采用GraphPad Prism 6.0软件进行统计分析,两组间比较采用 t检验。 结果:认知功能结果显示,SI组小鼠新事物识别指数[(-5.54±3.30)%,(33.42±7.14)%; t=4.680, P=0.001]和新位置识别指数[(-7.96±4.81)%,(23.55±8.20)%; t=3.670, P=0.008]均低于GH组。免疫组化结果显示,SI组小鼠海马GFAP阳性细胞数明显低于GH组[(369.90±42.97)个,(544.90±57.64)个; t=2.480, P=0.023]。Sholl分析结果显示,SI组小鼠海马星形胶质细胞突起回缩,突起分支与同心圆交点数目减少,在距离星形胶质细胞胞体6、8、10、12、14、16 μm处,两组间比较均差异有统计学意义(均 P<0.05)。Western blot结果显示,SI组GFAP蛋白的表达低于GH组[(0.85±0.05),(1.03±0.06); t=2.527, P=0.028];PCR结果显示,SI组GFAP mRNA表达低于GH组[(0.83±0.05),(1.00±0.03); t=2.970, P=0.018];SI组小鼠海马区A1表型标志物PSMB8 mRNA表达[(1.58±0.17),(1.00±0.06); t=2.931, P=0.011]和A2表型标志物S100A10 mRNA表达[(1.52±0.14),(1.00±0.07); t=3.121, P=0.007]均高于GH组。SI组营养因子IGF-1 mRNA表达低于GH组[(0.73±0.07),(1.00±0.08); t=2.327, P<0.05],而SI组LCN2 mRNA、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表达均高于GH组[(1.12±0.03),(1.00±0.03), t=2.575, P<0.05;(1.76±0.19),(1.00±0.07), t=3.460, P<0.01;(2.18±0.42),(1.00±0.07), t=2.427, P<0.05]。 结论:社会隔离诱导的小鼠认知障碍可能与海马星形胶质细胞表型转换有关。
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编辑人员丨4天前
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lncRNA AC119762.8-201在乙烯硫脲诱导大鼠胚胎肛门直肠畸形中表达的初步研究
编辑人员丨4天前
目的:验证lncRNA AC119762.8-201在乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)诱导的大鼠胚胎肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)中的差异表达;研究干扰及过表达lncRNA AC119762.8-201后对大鼠小肠隐窝上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC-6)的细胞增殖、迁移(上皮-间质转换)及Wnt5a蛋白表达水平的影响。方法:选用体重250~300 g的健康成年未育的Wistar大鼠30只,其中雌鼠24只,雄鼠6只;雌雄大鼠按4∶1的比例于晚上合笼过夜,次日晨雌鼠做阴道涂片,在光镜下见到精子或阴道栓即确认已交配,当日为孕0 d(E0),选取明确受孕的18只雌鼠按随机数字表法随机分为大鼠ETU-ARM致畸组(9只)和大鼠生理盐水对照组(9只)。孕10 d(E10)时,将大鼠ETU-ARM致畸组一次性灌胃注入1% ETU(125 mg/kg),大鼠生理盐水对照组灌入等量生理盐水。在孕16 d(E16)、17 d(E17)和19 d(E19),对两组孕鼠剖宫并取出胎鼠。无菌操作下,从大鼠ETU-ARM致畸组中共取得162只胎鼠,根据肉眼及解剖显微镜下观察,若胎鼠出现无尾或短尾畸形,且肛门与外界不相通,直肠末端与尿道之间有瘘管连通,则纳入胎鼠ARM组(简称ARM组),ARM组共122只致畸胎鼠,致畸率为75.31%(122/162);从大鼠生理盐水对照组取得141只胎鼠,胎鼠尾部均正常,无肛门直肠畸形,肛门与外界相通且直肠末端与尿道之间无瘘管连通,为胎鼠正常组(简称正常组)。解剖显微镜下,在无菌条件下取出ARM组和正常组胎鼠的直肠末端组织置于-80℃冰箱保存备用。采用实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测lncRNA AC119762.8-201的表达;提取IEC-6细胞质和细胞核RNA,通过qRT-PCR检测lncRNA AC119762.8-201在细胞中的定位;采用siRNA序列或过表达质粒转染的方法下调或上调IEC-6细胞中lncRNA AC119762.8-201的表达,通过细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞上皮-间质转换及Wnt5a蛋白表达水平的影响。结果:通过qRT-PCR验证lncRNA AC119762.8-201在ARM组及正常组胎鼠肛门直肠组织中的表达水平;结果显示在E16、E17及E19时,与正常组相比,lncRNA AC119762.8-201的表达水平分别为(0.47±0.02比1.01±0.08,0.80±0.16比1.00±0.02,0.41±0.06比1.02±0.09),lncRNA AC119762.8-201在ARM组中的表达水平下降,并且在E16和E19,ARM组及正常组之间的差异具有统计学意义( P<0.01)。通过qRT-PCR验证lncRNA AC119762.8-201在IEC-6细胞质及细胞核中的表达水平。结果提示lncRNA AC119762.8-201在IEC-6细胞中有表达,且在细胞质(1.01±0.08)及细胞核(1.01±0.05)中均存在表达,差异无统计学意义( P>0.05)。在转染干扰si-RNA(si-NC和si-lnc)和过表达质粒(over-NC质粒和over-lnc质粒)对lncRNA AC119762.8-201表达水平的影响方面,转染si-RNA的结果显示,与转染si-NC的细胞(1.01±0.18)相比,转染si-lnc后,lncRNA AC119762.8-201的表达水平明显下调为(0.43±0.13),差异具有统计学意义( P<0.05);转染过表达质粒的结果显示,与转染over-NC质粒的细胞(0.98±0.02)相比,转染over-lnc质粒后,lncRNA AC119762.8-201的表达水平明显上调为(2 960.31±167.95),差异具有统计学意义( P<0.01)。在lncRNA AC119762.8-201对细胞增殖的影响方面,结果提示当干扰lncRNA AC119762.8-201的表达时,细胞增殖能力呈下降趋势,6 h时的si-NC比si-lnc为(3.17±0.01比3.15±0.02),差异无统计学意义( P>0.05);12 h为(3.40±0.01比3.26±0.01),差异具有统计学意义( P<0.01);18 h为(3.55±0.01比3.35±0.05),差异具有统计学意义( P<0.01);24 h为(4.02±0.01比4.04±0.02),差异无统计学意义( P>0.05);相反,当过表达lncRNA AC119762.8-201时,细胞增殖能力呈升高趋势,6 h时的over-NC比over-lnc为(3.21±0.04比3.30±0.02),差异无统计学意义( P>0.05);12 h为(3.39±0.01比3.57±0.04),差异具有统计学意义( P<0.01);18 h为(3.59±0.01比3.69±0.03),差异具有统计学意义( P<0.01);24 h为(3.76±0.01比3.79±0.03),差异无统计学意义( P>0.05)。lncRNA AC119762.8-201在干扰或过表达状态下对E-cadherin、β-catenin、N-cadherin及Vimentin表达水平的影响,蛋白质印迹法检测结果提示,当干扰lncRNA AC119762.8-201的表达时,转染si-NC后E-cadherin和β-catenin的表达水平明显低于转染si-lnc后的表达水平,转染si-NC与转染si-lnc后E-cadherin的表达水平相比为(0.32±0.01比0.57±0.04),差异具有统计学意义( P<0.05);转染si-NC与转染si-lnc后β-catenin的表达水平相比为(0.89±0.03比1.48±0.05),差异具有统计学意义( P<0.01);转染si-NC后N-cadherin和Vimentin的表达水平明显高于转染si-lnc后的表达水平,转染si-NC与转染si-lnc后N-cadherin的表达水平相比为(1.47±0.01比0.90±0.0 003),差异具有统计学意义( P<0.01);转染si-NC与转染si-lnc后Vimentin的表达水平相比为(2.02±0.03比1.02±0.02),差异具有统计学意义( P<0.01)。相反,当过表达lncRNA AC119762.8-201时,转染over-NC后E-cadherin和β-catenin的表达水平明显高于转染over-lnc后的表达水平,差异均具有统计学意义( P<0.05);转染over-NC后N-cadherin和Vimentin的表达水平明显低于转染over-lnc后的表达水平,差异均具有统计学意义( P<0.01)。lncRNA AC119762.8-201在干扰或过表达状态下对Wnt5a表达水平的影响,蛋白质印迹法检测结果提示,当干扰lncRNA AC119762.8-201的表达时,转染si-NC后Wnt5a的表达水平明显高于转染si-lnc后的表达水平,差异具有统计学意义( P<0.01);相反,当过表达lncRNA AC119762.8-201时,转染over-NC后Wnt5a的表达水平明显低于转染over-lnc后的表达水平,差异具有统计学意义( P<0.01)。 结论:本研究通过动物模型验证了lncRNA AC119762.8-201在ARM组大鼠肛门直肠组织中的表达水平较正常组降低,其表达水平的降低可能会抑制细胞增殖、细胞上皮-间质转换及Wnt5a的表达,从而影响ARM的发生和发展。
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编辑人员丨4天前
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高强度间歇运动对自发性高血压大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的影响
编辑人员丨4天前
目的:观察高强度间歇运动对自发性高血压大鼠(SHR)血压水平及肾功能的影响,并探讨肾脏肾素-血管紧张素系统(RAS)在其间的作用机制。方法:采用随机数字表法将20只雄性SHR大鼠分为高血压安静组及高血压运动组,同时选取10只Wistar-Kyoto大鼠纳入正常血压组。正常血压组及高血压安静组大鼠均置于鼠笼内安静饲养,高血压运动组大鼠则给予8周高强度间歇运动干预。于末次运动结束后检测各组大鼠血压水平、肾功能、肾脏一氧化氮(NO)和白细胞介素-6(IL-6)含量以及肾脏血管紧张素转换酶(ACE)、ACE2、血管紧张素1型受体(AT1R)、AT2R和Mas受体(MasR)蛋白表达量。结果:与正常血压组比较,高血压安静组大鼠血压升高( P<0.05),肾功能减退( P<0.05),肾脏NO含量减少( P<0.05),IL-6含量升高( P<0.05),ACE和AT1R蛋白表达以及AT1R/AT2R比值升高( P<0.05),ACE2、AT2R及MasR蛋白表达下降( P<0.05);与高血压安静组比较,高血压运动组大鼠血压明显下降( P<0.05),肾功能改善( P<0.05),肾脏NO含量升高( P<0.05),IL-6含量降低( P<0.05),ACE和AT1R蛋白表达以及AT1R/AT2R比值下降( P<0.05),ACE2、AT2R及MasR蛋白表达显著上调( P<0.05)。 结论:8周高强度间歇运动干预能通过调控肾脏RAS轴对SHR大鼠肾脏发挥保护作用。
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编辑人员丨4天前
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中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的表达、纯化和初步晶体学研究
编辑人员丨2024/7/20
铁蛋白是普遍存在于各类有核生物、参与机体铁离子稳态调控的一类蛋白质,它可以自组装形成14 nm左右的中空笼状颗粒,常被作为药物和疫苗的递送载体.支原体铁蛋白的晶体结构显示,铁氧化活性中心和铁离子通道与其他物种存在结构上的差异.目前螺原体铁蛋白还未有相关研究.本研究发现,螺原体铁蛋白与包含支原体在内的其他物种铁蛋白均具有较低的同源性.利用大肠杆菌表达中华绒螯蟹螺原体铁蛋白(SeFer),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,蛋白能以可溶的形式表达于大肠杆菌细胞内.分别通过二乙氨基乙基(DEAE)弱阴离子交换层析、分子筛层析,获得高纯度的SeFer.在4℃和18℃,用坐滴气相扩散法对SeFer进行晶体筛选,该蛋白在多种条件下能生长晶体,通过同步辐射光源衍射,其晶体最好衍射至2.90 ?,属于I432空间群,收集的数据可用于后继结构解析.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)、动态光散射(DLS)以及SeFer分子筛出峰位置显示,经大肠杆菌重组表达的SeFer相对分子质量为400 kD左右,粒径大小为15 nm左右,与理论值接近.利用Alphafold 2对SeFer进行结构预测,发现其具有与其他铁蛋白类似的二十面体球状结构,但是其铁氧化活性中心与支原体铁蛋白保守位点存在差异.本结果不仅为研究SeFer的晶体结构提供了基础,也为疫苗载体提供了新的候选.
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编辑人员丨2024/7/20
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有氧运动调控线粒体质量控制系统逆转衰老大鼠心脏的病理性重塑
编辑人员丨2024/1/6
背景:衰老与心血管疾病易感性增加有关,而线粒体功能障碍在各种原因所致心血管疾病的发病机制中起关键作用.规律体力活动有益心血管健康并能够防治慢性心脏疾病,然而线粒体在运动对衰老心脏发挥保护作用中的具体机制尚未明确.目的:观察有氧运动对衰老大鼠心脏病理性重塑的影响,并探讨线粒体质量控制系统在其间的可能作用机制.方法:取60只Wistar大鼠,采用随机数字表法分3组,每组20只:青年安静组(6月龄)和老年安静组(20月龄)大鼠在鼠笼内饲养12周,老年运动组(20月龄)大鼠进行12周中等强度的有氧跑台运动(60%最高跑速,坡度0°,60 min/d,5 d/周).12周后,取大鼠心脏进行相关指标检测.结果与结论:①组织学检测:与青年安静组比较,老年安静组大鼠出现心脏向心性肥大、心肌纤维化及心肌细胞凋亡和缺失、心脏舒张功能障碍(P<0.05);与老年安静组比较,老年运动组大鼠心肌纤维化和细胞凋亡率减轻、细胞数量增加、心功能改善(P<0.05),心脏表型由病理性肥大向生理性肥大转变;②心肌线粒体功能:与青年安静组比较,老年安静组大鼠心肌线粒体过氧化氢生成速率增加(P<0.05),态3、态4呼吸速率和呼吸控制比下降(P<0.05),呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ活性下降(P<0.05),线粒体钙保留能力下降(P<0.05)、线粒体通透性转换孔开放程度增加(P<0.05);与老年安静组比较,老年运动组大鼠上述指标均有明显改善(P<0.05);③心肌线粒体质量控制:与青年安静组比较,老年安静组大鼠心肌线粒体生物合成下降(P<0.05),线粒体自噬活性增加(P<0.05),线粒体融合减少(P<0.05)、分裂增加(P<0.05);与老年安静组比较,老年运动组线粒体生物合成和线粒体自噬活性升高(P<0.05),线粒体融合增加(P<0.05)、分裂减少(P<0.05);④结果表明:规律有氧运动通过调控线粒体质量控制系统发挥对衰老大鼠的心脏保护效应,进而逆转病理性心脏重塑并提升心功能.
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编辑人员丨2024/1/6
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丰富环境对孕早期母体聚肌胞苷酸免疫刺激引起的仔鼠精神分裂样行为的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨出生后丰富环境刺激对孕早期(第9天)聚肌胞苷酸(polynosinic- polycyti-dylic acid,Poly I : C)免疫刺激引起的仔鼠精神分裂样行为的影响.方法 怀孕母鼠随机分为实验组、对照组,实验组于怀孕第9天给予尾静脉注射病毒类似物聚肌胞苷酸(Poly I : C,5 mg/kg),对照组注射等体积生理盐水(normal saline,NS).在子代小鼠出生后第21天断奶,将每只母鼠所生同窝子代小鼠按雌雄随机分为丰富环境(enriched environment,EE)组及单调环境(dull environment,DE)组,丰富环境组在鼠笼内放置能够增加子代小鼠身体运动及认知能力的模型玩具,如转轮、爬梯、秋千、滚筒等,每周更换一次,单调环境组即常规饲养环境.在子代小鼠出生后第60天,进行前脉冲抑制(pre-pulse inhibition,PPI)测试,以及旷场、新物体/位置识别、社交、水迷宫等行为学实验,对子代小鼠的学习记忆及认知能力进行评估;行为学实验结束后,处死小鼠取脑,Western blot对海马组织中MBP蛋白表达进行分析.结果 (1)PPI结果显示,孕早期Poly I : C母体免疫刺激的子代雌、雄性小鼠%PPI均明显低于对照组(雌性子代:F=28.12,P<0.01;雄性子代:F=14.76,P<0.01).(2)旷场实验中,孕早期Poly I : C免疫刺激的子代雌、雄性小鼠运动的总距离、速度均大于对照组(雌性子代:运动距离,F=5.10,P<0.05,速度:F=5.19,P<0.05;雄性子代:运动距离,F=6.76,P<0.05,速度,F=6.85,P<0.05).(3)在社交实验中,出生后丰富环境增加了子代雌、雄性小鼠与陌生小鼠的交流时间[雌性:EE组(101.30±6.83)s,DE组(76.50±5.59)s,F=9.41,P<0.01;雄性:EE组(98.52±6.82)s,DE组(75.82 ±3.95)s,F=7.95,P<0.01].(4)在水迷宫实验中,出生后丰富环境使子代小鼠找到平台的时间明显缩短(P<0.05).(5)海马MBP蛋白分析结果显示,孕早期Poly I : C免疫刺激的子代雌、雄小鼠海马MBP蛋白表达均低于生理盐水对照组(均P<0.05).结论 出生后丰富环境刺激可以增加Poly I : C免疫刺激引起的子代小鼠的社交能力及学习记忆能力,且可能改善孕早期母体Poly I : C免疫刺激所致的子代雄性小鼠的偏执、刻板行为.
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编辑人员丨2023/8/6
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汽化过氧化氢对具有内循环功能重要 设备的消毒效果研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究汽化过氧化氢对生物安全三级实验室内具有内循环功能设备的消毒效果.方法 采用载体定性杀菌试验法,观察汽化过氧化氢对Ⅱ级A2型生物安全柜、换笼机、动物饲养隔离器的灭菌效果.结果 汽化过氧化氢发生器以12 ml/m3的喷雾量(30%过氧化氢),消毒作用120 min,对在密闭空间运行的Ⅱ级A2型生物安全柜、换笼机、动物饲养隔离器内不同部位染菌布片上的枯草杆菌黑色变种芽孢可达到完全杀灭.结论 汽化过氧化氢对具有内循环功能设备具有良好的消毒效果,可用于生物安全实验室相关设备的消毒灭菌.
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编辑人员丨2023/8/6
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跑步运动结合摄取杜仲提取物对去卵巢大鼠骨密度和抗氧化能力的影响
编辑人员丨2023/8/6
背景:研究显示运动导致骨密度增加,并可改善身体组成.但妇女停经后身体抗氧化能力大幅下降,所以预防运动造成的氧化伤害亦非常关键.杜仲具有对改善骨密度和抗氧化效果,利用运动搭配杜仲摄入,尝试既可以改善更年期骨密度又能减少运动氧化伤害的方案.目的:探讨跑步运动结合摄取杜仲提取物和单纯摄入杜仲提取物对接受卵巢切除大鼠骨密度、血清雌激素、骨质代谢、抗氧化能力的影响.方法:先对大鼠进行1周适应性饲养,随机将大鼠分为2组,分别进行卵巢切除或假手术.大鼠恢复4周后,将切除卵巢大鼠随机分为模型组、杜仲组,杜仲运动组,进行12周干预,干预结束后,将所有大鼠置入代谢笼采集24 h尿样;隔日,所有大鼠进行力竭运动,之后采集大鼠腹腔血液.检测各组大鼠的氧化指标(包括血肌酸激酶、乳酸脱氢酶浓度、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化酶活性),骨质代谢指标(包括血清骨钙素、碱性磷酸酶、Ca、P浓度以及尿液中的脱氧吡啶啉、Ca、P水平),同时记录大鼠的体质量变化、血清雌二醇水平和股骨骨密度值.结果与结论:经12周干预后,杜仲组和杜仲运动组大鼠体质量、丙二醛、骨钙、碱性磷酸酶、磷浓度显著低于模型组(P<0.05);血清雌二醇、股骨骨密度显著高于模型组(P<0.05).杜仲运动组各项指标均优于杜仲组和运动组,但未达到显著性差异(P>0.05).说明长期进行跑步运动并结合摄取杜仲提取物或单纯摄取杜仲提取物均可以显著提升切除卵巢骨质疏松大鼠的骨密度、血清雌激素水平,并可以促进骨代谢平衡,降低骨转换率和因卵巢功能降低导致的体质量增加,能够起到维护骨量、防止骨质疏松作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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电针预处理对换笼失眠大鼠睡眠觉醒的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:观察电针预处理对换笼失眠大鼠睡眠觉醒的影响,探讨电针预处理干预换笼失眠大鼠睡眠觉醒的机制.方法:将160只大鼠随机分为对照组、模型组、电针组和假电针组,每组分为5个亚组,分别为换笼后0 min、30 min、2h、6h4个亚组和睡眠监测亚组,每个亚组各8只.观察4组大鼠电针干预前后睡眠觉醒的变化、换笼后各时点血清激素变化及换茏后24 h HPA轴多巴胺受体变化情况.结果:同对照组相比,换笼后模型组和假电针组表现为日间wake时间延长(P<0.05,P<0.01)、NREM睡眠减少(P<0.05);电针组睡眠觉醒量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).对照组与模型组大鼠外周血激素水平比较,模型组、假电针组与电针组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).换笼后24h模型组大鼠HPA轴的多巴胺D1受体和多巴胶D2受体表达水平显著降低,电针组HPA轴的多巴胺D1受体和多巴胺D2受体表达水平升高.结论:电针预处理能够干预换笼失眠大鼠睡眠觉醒,可能通过干预HPA轴多巴胺受体发挥作用.
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编辑人员丨2023/8/6
