目的:探索神经生长因子（NGF）在小鼠治疗性血管生成中诱导缺血肢体骨骼肌纤维重塑的机制。方法:雌性ICR小鼠18只，无特定病原体级，6周龄，体重25~30 g。按随机数字表法分为假手术组（ n=6）、空白对照组（ n=6）和NGF基因治疗组（ n=6）。对空白对照组和NGF基因治疗组小鼠进行后肢缺血造模，在术后第7天对假手术组注射生理盐水，空白对照组小鼠进行空质粒转染，NGF基因治疗组小鼠进行NGF基因转染。在术后第21天对患肢血流灌注评估后进行腓肠肌取材。对3组腓肠肌标本进行苏木精-伊红（HE）染色，CD31和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色，实时荧光定量PCR检测肌球蛋白重链（MHC）-Ⅰ、MHC-Ⅱa及MHC-Ⅱb的mRNA表达，Western blot检测NGF和过氧化物酶体增殖物激活受体-β/δ（PPAR β/δ）的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞色素C氧化酶（COX）、异柠檬酸脱氢酶（IDH）和三磷酸腺苷（ATP）表达量。 结果:术后第21天，NGF基因转染组小鼠患肢血流灌注量为（195.70±9.99）PU，低于假手术组（312.15±17.32）PU（ P=0.001），但高于空白对照组（82.11±8.55）PU（ P=0.001）。NGF组的肌肉萎缩程度低于空白对照组，NGF基因转染组的毛细血管密度为（0.34±0.05），高于假手术组（0.11±0.03）和空白对照组（0.27±0.04）（均 P<0.05）。NGF基因转染组的内皮细胞增殖指数为（0.39±0.19），高于假手术组（0.18±0.01）和空白对照组（0.25±0.14）（均 P<0.05）。NGF基因转染组的NGF、PPAR β/δ、COX、IDH、ATP的表达水平，以及MHC-ⅠmRNA表达水平较假手术组和空白对照组均明显升高（均 P<0.05）。 结论:NGF基因转染后能够促进小鼠缺血肢体毛细血管生成，增加其血流灌注，进而诱导骨骼肌肌纤维向Ⅰ型重塑，该过程可能与NGF诱导PPAR β/δ表达，促进骨骼肌细胞有氧代谢有关。

目的:明确本地区碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药特点和分子流行病学特征，为临床抗感染治疗提供依据。方法:收集宁波大学附属第一医院和宁波市第二医院碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌92株。用VITEK2 Compact全自动微生物分析仪进行药敏试验；全基因组测序技术确定其荚膜血清型、多位点序列分型(MLST)与耐药基因等分子特征；使用PlasmidFinder确定菌株的质粒复制子类型；Parsnp进行细菌核心基因组系统发育分析。结果:CRKP主要分离自病情较为危重的老年患者，标本以痰液居多(51.09%，47/92)，其次是尿液(13.04%，12/92)和血液(8.70%，8/92)，感染高发科室为重症监护病房(33.70%，31/92)。所有菌株对常用抗菌药物耐药率高，但对多黏菌素B耐药率较低(6.52%，6/92)。耐药基因以 blaKPC-2为主(78.26%，72/92)，荚膜血清型以KL64为主(48.91%，45/92)，MLST分型以ST11为主(54.35%，50/92)。ST11-KL64是优势克隆型，检出率高达46.74%(43/92)，且携带多个质粒，以IncR和IncFⅡ型为主。 结论:本地区CRKP对临床常用抗菌药物高度耐药，主要携带 blaKPC-2耐药基因，克隆型ST11-KL64在本地区广泛克隆传播，两家医院流行的菌株存在相似性，应加强监控。

目的:分析赖氨酸特异性去甲基化酶6B（KDM6B）在乙型肝炎相关性肾炎（HBV-GN）患者肾组织及乙型肝炎病毒X基因（HBx）转染的人足细胞中的表达，及其在HBx介导的足细胞-巨噬细胞转分化（PMT）中的作用。方法:选取2013至2018年在上海交通大学附属第一人民医院经肾穿刺活检病理诊断为HBV-GN的48例患者肾活检标本，以30例原发性肾小球肾炎（PGN）肾活检标本及15例肾肿瘤患者癌旁正常肾组织作为对照。利用免疫荧光及免疫组化法观察HBV-GN患者肾组织KDM6B及巨噬细胞标志物F4/80的表达。分析肾组织KDM6B表达水平与HBV-GN患者临床特征的关系。Western印迹法检测足细胞中KDM6B、F4/80、主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC-Ⅱ）以及共刺激分子CD40的表达；ELISA法测定细胞上清中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-6的含量；同时利用KDM6B小干扰RNA（siRNA）沉默HBx质粒转染的人足细胞中KDM6B基因表达后，Western印迹法检测细胞中KDM6B、F4/80及组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）的表达变化。结果:与正常对照组相比，HBV-GN患者肾组织KDM6B表达增加（0.022±0.004比0.006±0.002， P=0.006）。HBV-GN不同病理类型组间KDM6B阳性率差异无统计学意义（ P=0.139）。此外，在HBV-GN患者足细胞中可观察到KDM6B和F4/80的共表达。估算肾小球滤过率（eGFR）<60 ml·min -1·（1.73 m 2） -1或尿蛋白≥3.5 g/d的患者肾组织KDM6B表达分别高于eGFR≥60 ml·min -1·（1.73 m 2） -1或尿蛋白<3.5 g/d的患者（均 P<0.05）。HBx转染人足细胞后KDM6B、F4/80、MHC-Ⅱ以及CD40表达均上调（均 P<0.05），上清IFN-γ和IL-6含量均增加（均 P<0.05）；将KDM6B基因沉默后，HBx所诱导的足细胞F4/80表达下调，H3K27me3表达则上调（均 P<0.05）。 结论:HBx可通过诱导足细胞KDM6B表达启动PMT，可能参与HBV-GN局部组织免疫微环境紊乱的发生。

目的:确定临床分离菌株产气克雷伯菌整合子、质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因的分布，并分析整合子与临床常用抗菌药物耐药性的关系。方法:收集2015年11月至2021年3月上海市奉贤区中心医院分离自临床样本中的产气克雷伯菌91株，PCR筛查第1、2类整合酶基因( intI1、 intI2)，分析启动子类型和可变区基因盒组成结构。同时对分离株PMQR基因进行检测，并分析整合子与临床常用抗感染治疗药物间的关系。 结果:91株产气克雷伯菌对氨曲南耐药率>40.00%，对其余常用抗菌药物耐药率均<35.00%。91株产气克雷伯菌中30株检出 intI1，未检出 intI2。第1类整合子检出7种可变区基因盒组合，在产气克雷伯菌中检出基因盒组合 aac(6′)-11 C- ΔereA2- IS1247- aac3- arr- ΔereA2。第1类整合子可变区启动子以活性较弱的PcH1启动子为主。 intI1阳性菌株与 intI1阴性菌株在ICU、神经外科和临床其他科室的检出率差异有统计学意义( P<0.05)。 intI1阳性菌株对部分临床常用抗菌药物耐药率明显高于 intI1阴性菌株( P<0.05)。 qnrS为PMQR基因的主要基因型。除2016年外，其余年份分离的产气克雷伯菌中整合子和PMQR基因的检出率均较低。 结论:产气克雷伯菌耐药性的产生与整合子密切相关，产气克雷伯菌中整合子在不同临床科室的分布具有一定的差异性，ICU和神经外科应持续加强细菌耐药的监测。 qnrS是本地区产气克雷伯菌对喹诺酮类药物产生耐药的主要原因。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)linc00261在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法:纳入中南大学湘雅医学院附属海口医院2017年2月至2018年9月收治的100例NSCLC患者，采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者癌组织及对应癌旁组织中lncRNA linc00261的表达水平，并分析其与患者临床病理特征的关系。通过设计合成lncRNA linc00261表达质粒，转染A549细胞，采用qRT-PCR检测转染细胞中lncRNA linc00261表达水平，使用MTT法检测转染细胞的增殖情况，使用流式细胞术检测转染细胞的凋亡情况。结果:qRT-PCR检测结果显示，100例NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261的平均相对表达量(0.15±0.06)明显低于癌旁组织(1.19±0.23)，差异有统计学意义( t＝7.753， P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理组织类型的NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量比较差异均无统计学意义( P值均>0.05)，但不同组织分化程度、临床分期及有无淋巴结转移患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量差异均有统计学意义( P值均<0.05)。qRT-PCR检测结果显示，转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞中lncRNA linc00261的表达量显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组( F＝5.196， P<0.001)。MTT检测结果显示，转染24 h后，3组之间细胞增殖能力差异无统计学意义( F＝0.183， P>0.05)；转染48、72、96 h后，转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的细胞增殖能力显著低于转染空载体的阴性对照组及空白对照组( t＝3.187、5.549， P值均<0.05)。流式细胞书检测结果显示，转染48 h后，转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的凋亡比例显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组( χ2＝4.175、6.093， P值均<0.05)。 结论:lncRNA linc00261在NSCLC患者癌组织中表达下调，并与NSCLC的发生发展有关，其在NSCLC中可能发挥抑癌基因作用，过表达lncRNA linc0026可抑制NSCLC细胞增殖并诱导凋亡，有可能成为NSCLC潜在的治疗靶点。

目的:分析黏质沙雷菌携带KPC-2型碳青霉烯酶的相关质粒特征。方法:4株碳青霉烯类抗生素耐药的黏质沙雷菌来自2016年我院肝胆病区的4位患者，使用仪器BD Phenix-100鉴定菌株并测定最小抑菌浓度(MIC)，脉冲场凝胶电泳分析菌株之间的同源性，改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型，PCR及产物测序检测基因型，接合试验检测质粒的转移性，质粒全基因组测序后比对，并分析其特征，使用软件DNAMAN比对复制起始蛋白氨基酸序列，软件MEGA7.0 Neighobor-Joining法构建系统发育树。结果:4株黏质沙雷菌对碳青霉烯类抗生素均表现耐药，菌株具有同源性，Hodge试验为阳性，碳青霉烯酶基因型为 blaKPC-2，接合试验阳性；质粒为42 742 bp的环状DNA，具有incX6质粒的类似骨架和相似的复制起始蛋白氨基酸序列，并和incX6具有共同的节点； blaKPC-2处于由Tn3家族转座子、重组酶基因、△ISKpn6和ISkpn27等插入元件构成的耐药核心区。 结论:未知质粒类型为incX6-like， blaKPC-2位于质粒的△Tn6296转座子上；携带KPC-2的此类质粒的细菌应引起重视。

目的:分析一株同时产KPC-2和NDM-5碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌耐药基因特征。方法:肺炎克雷伯菌KPN-hnqyy分离自我院血液科一位患者的粪便标本，使用仪器BD Phenix-M50鉴定菌株并测定最小抑菌浓度；酶联免疫层析试验和PCR方法检测碳青霉烯酶基因型；接合试验检测相关质粒的转移性；PacBio和Illumina平台对菌株全基因组测序，并在BacWGSTdb数据库中检索菌株MLST分型、耐药基因和质粒类型，使用软件Easyfig_2.2.3比对基因组和开放读码框序列，BRIG v0.95生成可视化质粒圈图。结果:肺炎克雷伯菌KPN-hnqyy对碳青霉烯类抗生素耐药，MLST分型为ST11型， blaKPC-2和 blaNDM-5碳青霉烯酶基因阳性；接合子 blaKPC-2基因阳性， blaNDM-5阴性；全基因组测序显示菌株含有1个染色体和3个质粒；肺炎克雷伯菌KP69和KP19-2029等与本研究菌株染色体基因组相似性大于99.9%，且其各自携带的不同种类的质粒上含有相似的IncR和IncFⅠ耐药基因融合区， blaKPC-2基因位于此融合区中一个由Tn3-△Tn4401-Tn1721/Tn1722序列演化而来的两端插入IS26转座酶基因的结构中； blaNDM-5基因位于一种含有噬菌体插入片段特殊质粒的Ⅰ型转座子上，两端也插入了IS26转座酶基因。 结论:ST11型肺炎克雷伯菌携带 blaKPC-2的IncR和IncFⅡ耐药基因融合区与染色体基因组可能一起广泛存在，特殊质粒携带的 blaNDM-5基因可能是通过IS26转座元件介导的基因重组方式偶然获得；携带 blaKPC-2基因的ST11型肺炎克雷伯菌在中国广泛传播并能通过IS26转座元件获得其他碳青霉烯酶基因的能力应引起重视。

目的:评价从噬菌体库筛选获得的1株抗狂犬病病毒单克隆抗体的基本特征。方法:从抗狂犬病病毒噬菌体库中筛选获得1个阳性克隆，扩增获得其抗体轻重链可变区，构建全分子抗体的表达质粒后在HEK293 EBNA1细胞中瞬时表达，亲和纯化后对该抗体进行体外抗狂犬病病毒中和活性、中和指数、逃逸株测序、差示扫描荧光法热稳定性分析，并与数据库中街毒株糖蛋白比对关键氨基酸位点。结果:该抗体体外抗狂犬病病毒中和活性为691IU/mg；该抗体对狂犬病病毒CVS-11和CTN株的中和指数分别为8.52和7.05；CVS-11逃逸株糖蛋白测序分析表明，该抗体针对的关键氨基酸主要为N37 K、N194 K和K205 N。与1 338株狂犬病病毒街毒株糖蛋白基因比对表明，37、194和205位上仅有1个街毒株在194位上与突变逃逸株氨基酸类型相同。该抗体Tm值为70.58±0.31 ℃。结论:获得1株高中和指数的全分子人源抗狂犬病病毒中和抗体，该抗体具有较好的热稳定性。

目的:建立端粒酶反转录酶(TERT)启动子突变的焦磷酸测序方法，验证其用于脑胶质瘤的可行性。方法:以TERT启动子野生型和突变型质粒为参考标准品，混和为待测核酸样本(预设突变率分别为0%、5%、10%、25%、50%和100%)；采用焦磷酸测序方法进行检测，以3次检测均值作为检测突变率。采用Pearson相关分析法进行检测突变率与预设突变率的相关性分析。收集2020年4—6月由北京市神经外科研究所分子病理室诊断为脑胶质瘤的120例患者的甲醛固定石蜡包埋(FFPE)切片样本；其中40例经二代测序检测，TERT启动子野生型17例，C228T突变型19例，C250T突变型4例。对120例样本进行扩增和焦磷酸测序，检测TERT启动子突变情况；计算不同病理类型脑胶质瘤患者中TERT启动子突变率，即突变型/(野生型+突变型)。采用Kappa一致性检验法比较40例样本的焦磷酸测序结果与二代测序结果。结果:TERT启动子标准品检测结果显示，碱基检测峰的位置及峰高清晰，碱基单峰信号值均超过30；相关性分析结果显示，C228T和C250T的检测突变率与样本预设突变率呈线性正相关( Y＝0.843 X+22.317， r2＝0.80， P＝0.010)。脑胶质瘤FFPE样本的焦磷酸测序检测结果显示，120例样本中，65例为TERT启动子野生型，55例为TERT启动子突变型；突变型中，以C228T突变为主43例，C250T突变12例。星形细胞瘤，IDH突变型患者中，TERT启动子的突变率为6.7%(2/30)；少突胶质细胞瘤，IDH突变伴1p/19q联合缺失患者中，TERT启动子的突变率为91.3%(21/23)；胶质母细胞瘤，IDH野生型患者中，TERT启动子的突变率为47.8%(32/67)。焦磷酸测序法与二代测序法检测TERT启动子突变的一致性好(39/40，Kappa值为0.96, P<0.001)。 结论:采用焦磷酸测序平台检测法判断脑胶质瘤标本TERT启动子突变状态具有可行性，与二代测序法检测结果的一致性好。

目的:探讨碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌(CRE)的耐药性及耐药传播机制，为CRE感染的治疗和防控提供科学依据。方法:收集绍兴第二医院2016年5月—2018年8月临床分离的CRE 76株。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行菌种鉴定；微量肉汤稀释法或琼脂稀释法测定多黏菌素、替加环素、头孢他啶/阿维巴坦和磷霉素等10种抗菌药物的最低抑菌浓度(MICs)；PCR法筛查碳青霉烯酶编码基因( blaKPC、 blaNDM、 blaIMP、 blaVIM、 blaOXA-48)并测序确认；脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析菌株的同源性；S1-PFGE联合Southern blot印迹杂交技术进行碳青霉烯酶基因定位；滤膜接合试验明确携带碳青霉烯酶基因质粒的水平转移能力。 结果:76株CRE中，肺炎克雷伯菌51株，大肠埃希菌10株，其他肠杆菌目细菌15株；主要分离自尿、痰及血液标本；ICU的分布率最高(55.26%)。76株CRE对多黏菌素、替加环素和头孢他啶/阿维巴坦呈现较低耐药率(0%、1.33%、18.42%)，对阿米卡星和磷霉素的耐药率均<45%，对其他药物的耐药率均>97%。KPC-2型碳青霉烯酶的检出率最高(85.33%)。产KPC-2的ST11型CRKP占比最高(62.75%)，主要分布在ICU(62.50%)。Southern blot杂交试验显示 blaKPC-2主要位于约90 kb的质粒上(39/63)。滤膜接合试验显示 blaKPC、 blaNDM和 blaIMP均可通过质粒水平转移给受体菌。 结论:该院CRE仅对多黏菌素、替加环素、头孢他啶/阿维巴坦等少数抗菌药物呈现较好敏感性；产KPC-2型碳青霉烯酶是肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因；产KPC-2的ST11型肺炎克雷伯菌是碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的主要流行克隆；90 kb大小的质粒是编码 blaKPC-2基因的主要质粒类型；碳青霉烯酶基因可通过质粒水平传播；医院需加强医院感染预防控制措施，控制CRE的克隆流行。