目的:探讨复合人表皮干细胞（ESC）的猪脱细胞真皮基质（ADM）对裸鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法:采用实验研究方法。采用数码相机拍照观察猪ADM形态，采用苏木精-伊红（HE）染色观测猪ADM中细胞残留，采用扫描电子显微镜观察猪ADM表面结构，采用红外光谱仪分析猪ADM二级结构，采用动态光散射粒度分析仪分析猪ADM粒径，采用纳米粒度电位仪分析猪ADM电位。采用倒置荧光显微镜观察猪ADM在培养基中放置30 min、1 d、5 d的形态（样本数为2）；采用随机数字表法（分组方法下同）将猪ADM分为5 min组、10 min组、20 min组、30 min组、60 min组、120 min组，常温静置相应时间，称量法计算吸水量（样本数为3）；将Swiss小鼠胚胎成纤维细胞（Fb）分为仅有培养基的空白对照组和另加入相应终质量浓度的ADM浸提液的50.0 g/L ADM浸提液组、37.5 g/L ADM浸提液组、25.0 g/L ADM浸提液组、12.5 g/L ADM浸提液组、6.5 g/L ADM浸提液组，分别于培养24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖率并进行细胞毒性分级（样本数为5）；将1只6周龄雄性SD大鼠红细胞分为生理盐水组、超纯水组及添加相应终质量浓度猪ADM浸提液的5 mg/mL ADM浸提液组、10 mg/mL ADM浸提液组、15 mg/mL ADM浸提液组，于反应3 h，采用酶标仪检测血红蛋白的吸光度值代表猪ADM血液相容性（样本数为3）。从陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院泌尿外科2020年7月收治的1名6岁健康男童包皮环切术后废弃包皮中分离培养ESC并采用流式细胞术鉴定。混合培养法构建复合ESC的猪ADM（以下简称ESC/ADM）颗粒，培养3 d后采用HE染色和激光扫描共聚焦显微镜观察ESC/ADM复合效果。将36只7~8周龄雄性无胸腺裸鼠分成单纯磷酸盐缓冲液（PBS）组、单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组，每组9只，并建立全层皮肤缺损创面模型，伤后即刻，创面均一次性采用相应试剂处理。分别于伤后1、7、11、15 d，观察创面愈合情况并计算创面愈合率（样本数为3）；伤后7 d，行HE染色观察创面上皮化情况并测量未上皮化长度（此处及以下样本数均为4）；伤后11 d，行Masson染色观察创面胶原沉积和真皮化情况并计算创面切面真皮面积，行免疫荧光染色并计算创面表达ESC特异性标志物CD49f的细胞数，行实时荧光定量反转录PCR检测创面移植ESC的3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的mRNA表达。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、重复测量方差分析、LSD- t检验。 结果:猪ADM为白色微粒状，内部无细胞存在，由网状结构组成，结构排列无序，表面粗糙；猪ADM分别在1 659、1 549、1 239 cm -1波数处出现吸收峰；猪ADM在溶液中主要粒径分布在500~700 nm；猪ADM表面带负电荷。放置30 min、1 d、5 d，猪ADM均形态相对稳定；放置30~120 min猪ADM吸水量保持相对高水平。6.5 g/L ADM浸提液组、12.5 g/L ADM浸提液组、25.0 g/L ADM浸提液组小鼠胚胎Fb在培养24 h细胞毒性分级为1级，其余各组各时间点细胞毒性分级均为0级。反应3 h，超纯水组红细胞中血红蛋白的吸光度值明显高于生理盐水组和15 mg/mL ADM浸提液组（ t值分别为8.14、7.96， P<0.01）。第4代细胞常规培养3 d形态呈鹅卵石样且低表达CD71和高表达CD49f的被鉴定为ESC。猪ADM颗粒上有ESC附着、生长。伤后1 d，单纯PBS组、单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面大小基本一致。伤后7、11、15 d，各组裸鼠创面收缩，其中单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面收缩明显。伤后7 d，单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面愈合率明显高于单纯PBS组（ t值分别为2.83、4.72， P<0.05或 P<0.01）；伤后11 d，ESC/ADM组裸鼠创面愈合率明显高于单纯PBS组（ t=4.86， P<0.01）；伤后15 d，单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面愈合率均明显高于单纯PBS组（ t值分别为2.71、2.90、3.23， P<0.05）。伤后7 d，单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面未上皮化长度分别为（816±85）、（635±66）、（163±32）μm，明显短于单纯PBS组的（1 199±43）μm（ t值分别为5.69、10.19、27.54， P<0.01）。伤后11 d，单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面切面真皮面积明显大于单纯PBS组（ t值分别为27.14、5.29、15.90， P<0.01）；单纯ADM组和ESC/ADM组裸鼠创面的胶原生成比单纯PBS组明显，单纯ESC组和单纯PBS组相近。伤后11 d，单纯ESC组和ESC/ADM组裸鼠创面中CD49f表达阳性数量分别为（135±7）、（185±15）个，GAPDH的mRNA表达阳性；单纯PBS组、单纯ADM组裸鼠创面均无CD49f、GAPDH的mRNA表达。 结论:ESC/ADM颗粒能够促进裸鼠全层皮肤缺损创面愈合，这可能与其提高了ESC移植后的存活率和ADM促进了真皮结构重排、血管新生有关。

目的:制备纳米银（AgNPs）杂化的载辛伐他汀（SIM）聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）微球，评价其体外缓释效果。方法:采用乳化-溶剂挥发法制备载SIM的PLGA微球。使用丝素蛋白（SF）并通过其疏水作用对载SIM的PLGA微球表面进行改性；通过静电吸附用壳聚糖（CTS）及AgNPs进一步对微球表面进行改性，制备AgNPs吸附CTS修饰SF包覆的载SIM的PLGA微球。使用扫描电子显微镜、傅里叶变换红外光谱仪、能谱仪、Zeta电位仪对载药微球进行分析，并考察其体外释放性能。结果:所制备的PLGA微球的平均直径约为9.67 μm。傅里叶变换红外光谱和能谱结果表明，成功构建了AgNPs杂化后的载SIM的微球；Zeta电位结果表明载药微球处于稳定的状态；体外释放结果表明，载药微球有较好的体外释放效果，能延缓药物释放速率并延长药物释放时间。结论:SF修饰的AgNPs杂化的载SIM的PLGA微球具有抑菌与成骨作用，且表现出较好的体外释放效果，可应用于口腔内的局部缓释给药，在牙周炎治疗方面具有潜在的应用价值。

目的:建立铁蛋白-普鲁士蓝纳米材料（ferritin-PB NPs）的制备方法，并探究其光热转换性能和对肿瘤细胞的光热杀伤效果。方法:首先通过沉淀法制备普鲁士蓝纳米材料（PB NPs），随后负载于铁蛋白空腔结构中，构建得到ferritin-PB NPs。采用红外光谱和紫外可见分光光谱测试ferritin-PB NPs中的成分组成，采用动态光散射仪和透射电子显微镜测试ferritin-PB NPs的尺寸及形貌，通过热成像仪测试ferritin-PB NPs的光热升温效果及光热稳定性效果，通过激光共聚焦显微镜观察ferritin-PB NPs在HeLa细胞和HepG2细胞中的摄取效果，并通过MTT实验测试ferritin-PB NPs对HeLa细胞的光热杀伤效果。结果:ferritin-PB NPs的形貌为铁蛋白内部包覆PB NPs的复合结构，可响应730 nm激光辐照迅速将光能转化为热能，导致测试溶液温度明显升高。ferritin-PB NPs能迅速被HeLa细胞和HepG2细胞摄取，并且在730 nm光照条件下抑制HeLa细胞的增殖。结论:通过简便的方法制备了ferritin-PB NPs，具有良好的生物相容性和光热细胞毒性效果，后期有望用于体内肿瘤治疗。

目的:制备聚乙烯醇（PVA）/羟基磷灰石（HA）复合栓塞微球，并对其理化性能进行研究。方法:将PVA与HA的混合溶液作为分散相、含有失水山梨糖醇脂肪酸酯的液体石蜡作为连续相，以戊二醛为交联剂采用反相悬浮化学交联法，制备PVA/HA复合栓塞微球。采用光学显微镜和扫描电镜对PVA/HA复合栓塞的外观形貌、粒径分布以及微观形貌进行观察，采用傅里叶红外光谱对PVA/HA复合栓塞微球的化学结构进行表征，并对PVA/HA复合栓塞微球的弹性以及载药和释药等性能进行测试。结果:PVA/HA复合栓塞微球为内部多孔状圆形小球，粒径分布为50~300 μm，弹性性能为（13.6±0.145）kPa，为PVA微球的2.28倍，载药量达（76.80±1.22）mg/g，包封率为（38.4±12.7）%，7 d内最高累积释放率为（7.37±0.101）%，最高累积释药量为（256.2±9.8）μg。结论:PVA/HA复合栓塞微球具有良好的机械性能和载药释药性能，为其作为医疗器械提供了重要参考依据。

目的:制备中空硒化铜纳米粒子（Cu 2- xSe NPs），并考察其光热以及放射治疗（放疗）增敏性能。 方法:以氧化亚铜（Cu 2O）为牺牲模板，以硒粉为硒源，通过牺牲模板法制备Cu 2- xSe NPs，再在其表面修饰甲氧基聚乙二醇巯基（mPEG-SH），得到最终的纳米粒子Cu 2- xSe-PEG NPs。分别采用透射电子显微镜、激光粒度仪及紫外-可见分光光度计对Cu 2- xSe NPs的形貌、粒径及紫外光谱等进行表征；通过红外热成像仪和生物学X射线辐照仪考察Cu 2- xSe-PEG NPs的光热及放疗增敏性能。 结果:所得Cu 2- xSe NPs具有中空结构，粒径为（136.9±7.0）nm，单分散性好，在近红外区有吸收。Cu 2- xSe-PEG NPs的质量浓度为200 μg/ml时，在808 nm激光照射下可升温至55 ℃。Cu 2- xSe-PEG NPs在X射线照射下产生的活性氧水平具有浓度和辐射剂量依赖性。 结论:本研究建立的制备方法能控制合成Cu 2- xSe NPs的尺寸，且材料具有良好的光热和放疗增敏性能，为运用Cu 2- xSe-PEG NPs进行肿瘤的热放疗提供了一定的理论基础。

目的:应用磁性分子印迹技术,从降尿酸中药秦艽中特异性吸附与分离龙胆苦苷.方法:以龙胆苦苷为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,甲醇为致孔剂,制备龙胆苦苷磁性分子印迹聚合物.通过傅里叶变换红外光谱(FTIP)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)对材料进行表征,通过绘制动力学吸附曲线及静态等温线评价其吸附性能.结果:龙胆苦苷磁性分子印迹聚合物合成成功,震荡60 min基本达到吸附平衡,从秦艽中提取和分离龙胆苦苷,吸附量为6.316 mg/g.结论:降尿酸中药秦艽中的龙胆苦苷可被龙胆苦苷磁性分子印迹聚合物特异性捕获.

目的:比较明胶(Gel)和聚多巴胺(PDA)分别修饰聚己内酯(PCL)后对成骨细胞生物学行为和成骨功能的差异.方法:利用静电纺丝技术制备PCL电纺膜,化学自组装技术于PCL表面分别修饰Gel、PDA,记为G/PCL和D/PCL,用扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、X线光电子能谱(XPS)、接触角测量仪等测定表征电纺膜的理化性能.通过SEM,免疫荧光染色后共聚焦显微镜观察MC3T3-El细胞在2种材料上的黏附形态,CCK-8试剂法检测细胞1、3、5 d增殖情况,碱性磷酸酶、茜素红染色及实时荧光定量PCR检测成骨基因表达水平.结果:D/PCL膜表面有PDA颗粒涂覆层,FTIR和XPS显示Gel与PDA的特征峰,接触角测量G/PCL和D/PCL未见明显液滴.G/PCL组细胞密度较高,黏附形态好,伪足明显.细胞增殖结果显示G/PCL组最高(P＜0.05).碱性磷酸酶和茜素红染色中D/PCL组的颜色深于其余2组.qRT-PCR结果显示D/PCL组ALP、COL-1、RUNX2、OCN成骨相关基因表达较其余两组明显提高.结论:Gel和PDA修饰均可提升PCL支架的细胞黏附、增殖和成骨性能,Gel修饰提升增殖作用更明显,PDA修饰提升成骨作用更显著.

目的 基于中药经典复方葛根芩连汤(Gegen Qinlian decoction,GQD)合煎过程中成分间相互作用,探讨其代表性成分葛根素、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩苷、甘草酸、巴马汀体外结合形成自组装纳米粒的性能及改善伊立替康(CPT-11)所致肠毒性作用的药理活性,为来源于中药汤剂的活性成分间的自组装纳米粒提供参考.方法 采用溶剂挥发法分别制备小檗碱-汉黄芩苷自组装纳米粒(berberine-wogonoside nanoparticles,Ber-Wog NPs)、小檗碱-葛根素自组装纳米粒(berberine-puerarin nanoparticles,Ber-PueNPs)、黄芩苷-葛根素自组装纳米粒(baicalin-puerarin nanoparticles,Bai-PueNPs)、黄芩苷-巴马汀自组装纳米粒(baicalin-palmatine nanoparticles,Bai-Pal NPs)、黄芩苷-甘草酸自组装纳米粒(baicalin-glycyrrhizic acid nanoparticles,Bai-GANPs)5种组分自组装纳米粒,测定其粒径分布、多分散指数(polydispersity index,PDI)、包封率、载药量,采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察其微观形貌,紫外光谱和傅里叶红外光谱考察成分间相互作用;考察5种组分自组装纳米粒缓解CPT-11致小鼠迟发性腹泻的药理作用.结果 组分间按1∶1投药比,制备所得 Ber-WogNPs、Ber-PueNPs、Bai-PueNPs、Bai-PalNPs、Bai-GANPs 的平均粒径分别为(198.09±4.64)、(216.29±5.31)、(173.53±5.46)、(185.75±3.38)、(242.10±12.30)nm;PDI 分别为 0.14±0.06、0.13±0.06、0.19±0.03、0.19±0.01、0.21±0.05,TEM观察均为球状纳米粒,除Ber-WogNPs外,其余4种纳米粒包封率均较高.紫外可见吸收光谱和红外光谱提示,5种纳米粒的组装均是通过分子间非共价键作用形成;分子对接模型进一步提示,其形成机制与分子间静电相互作用或氢键相关.药效试验结果显示,制剂组可缓解小鼠体质量降低,腹泻指数降低,结肠组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin,IL-1β)含量降低,IL-10 含量升高;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)显示结肠黏膜组织病变显著缓解.结论 GQD来源的几种代表性成分可高效自组装形成纳米粒,且具有类似GQD缓解CPT-11所致肠毒性作用,为研究传统中药汤剂药效物质基础形态与药效的相关性提供了新思路.

目的 制备黄芪甲苷(ASⅣ)脂质体原位凝胶(ASⅣ lips gel),对ASⅣ lips gel进行制剂学表征及细胞学评价,探讨ASⅣ lips gel在眼部给药系统的应用潜力.方法 采用乙醇注入法制备黄芪甲苷脂质体(ASⅣ lips),以包封率为考察指标进行ASⅣ lips处方及制备工艺优化,对最优处方及工艺制得的ASⅣ lips进行表征;以壳聚糖(CS)和甘油磷酸钠(GP)为凝胶基质,通过物理交联制备CS/GP凝胶,对CS/GP凝胶进行表征;将ASⅣ lips载入CS/GP凝胶构建ASⅣ lips gel,并对ASⅣ lips gel进行稳定性研究、体外释放研究、细胞毒性及细胞摄取考察.结果 最优处方及工艺制得的ASⅣ lips平均粒径为(75.09±0.65)nm,与透射电镜观察到的粒子大小接近,且粒径分布均匀;包封率可达71.68％,对ASⅣ具有较好的包载效率.红外光谱与X射线衍射分析可知已成功制得CS/GP凝胶;CS/GP凝胶在扫描电镜下呈明显的三维网状结构,35℃下胶凝时间为3 min.ASⅣ lips gel连续7 d粒径基本无明显变化,稳定性良好;体外释放结果表明,与黄芪甲苷滴眼液相比,ASⅣ lips gel有明显的缓释作用.细胞毒性结果显示ASⅣ lips gel对人视网膜色素上皮细胞毒性较低,细胞相容性较好.分别用荧光显微镜定性观察、流式细胞仪定量分析制剂的细胞摄取情况,结果表明,脂质体原位凝胶制剂比滴眼液更易被人视网膜色素上皮细胞摄取.结论 制备的ASⅣ lips gel在眼部温度下可自发成胶,具有明显的缓释作用,更易被人视网膜色素上皮细胞摄取,有作为眼部给药系统的潜力.

细菌、真菌、病毒等微生物是引起食源性疾病的重要因素,因此,快速灵敏地检测食品中的微生物是确保食品安全供应和预防人类食源性感染的有效手段.传统的检测方法如菌落计数、显微镜分析和免疫学方法等繁琐耗时,很难满足要求.近红外光谱是一种分子振动谱,对微生物膜结构的变化非常敏感,因而对每种微生物都有高度特异的吸收特征,且近红外光谱技术具有快速、无损等优点,广泛应用于微生物检测.本文综述了近红外光谱技术原理、常见光谱预处理方法及模型校准方法,并总结该技术在食品中微生物检测应用的主要研究进展及该技术在食品微生物检测中后续需解决的问题,为该技术在食品微生物检测领域得到更广泛的应用提供支持.