目的:探讨硫酸吲哚酚(IS)通过有机阴离子转运蛋白-3(OAT-3)及氧化应激诱导心肌肥大及纤维化的作用。方法:对大鼠心肌细胞(H9C2)进行传代培养，并分为四组：Control组、IS组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照组(siOAT-3)及siOAT-3+IS组。Control组常规培养，不进行IS刺激；IS组加入含250 μmol浓度的IS刺激；siRNA阴性对照组加入20 nmol/L OAT-3 siRNA；siOAT-3+IS组加入20 nmol/L OAT-3 siRNA 48 h后，加入IS刺激24 h。采用RT-PCR方法检测并分析各组细胞中OAT-3、NADPH氧化酶-4(Nox-4)、抗氧化蛋白[核因子E2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶1(HO-1)]、心肌肥大指标[心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链基因(β-MHC)]及纤维化指标[转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad-3)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)]的mRNA表达水平。H9C2细胞进一步分为Control组、IS组以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)组，NAC组以抗氧化剂NAC预处理后加入250 μmol浓度的IS刺激24 h，采用RT-PCR试验方法检测上述指标的mRNA表达水平。结果:IS组H9C2细胞中OAT-3的mRNA表达水平显著高于Control组，siOAT-3组及siOAT-3+IS组H9C2细胞中OAT-3的mRNA表达水平显著低于IS组( P<0.001)。相较于Control组，IS组H9C2细胞中Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及Collagen Ⅰ的mRNA表达水平明显升高(均 P<0.001)，Nrf-2、HO-1的mRNA表达水平明显降低(均 P<0.001)。相较于IS组，siOAT-3组及siOAT-3+IS组H9C2细胞中Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及Collagen Ⅰ的mRNA表达水平明显降低(均 P<0.001)，Nrf-2、HO-1的mRNA表达水平明显升高(均 P<0.001)。以NAC预处理H9C2细胞，能显著抑制IS诱导的Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及Collagen Ⅰ mRNA的高表达(均 P<0.001)，显著增高Nrf-2、HO-1 mRNA表达水平(均 P<0.01)。 结论:IS在H9C2细胞中通过OAT-3和氧化应激诱导心肌肥大和纤维化因子高表达。

目的:分析滇南地区人群溶质载体有机阴离子转运蛋白家族1b1（SLCO1B1）和载脂蛋白E（ApoE）基因分布情况。方法:回顾性分析云南省滇南中心医院（红河哈尼族彝族自治州第一人民医院）2019年5月至2020年6月诊治的患者104例的资料，分析SLCO1B1和ApoE基因分布情况，分析其与民族、性别及年龄的关系，并与其他地区进行比较。结果:滇南地区人群SLCO1B1基因的5种表型*1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b、*1a/*15、*1b/*15所占比例分别为4.81%、32.69%、42.31%、12.50%、7.69%，未检测到*1a/*5、*5/*5、*5/*15和*15/*15，携带SLCO1B1正常代谢型占79.81%，中间代谢型占20.19%，未检测到弱代谢型。滇南地区人群ApoE基因的5种表型E2/E2、E2/E3、E3/E3、E3/E4、E4/E4所占比例分别为0.96%、16.35%、70.19%、11.54%、0.96%，未检测到E2/E4基因，ApoE保护型基因、正常型基因及风险型基因的人群占比分别为17.31%、70.19%及12.50%。SLCO1B1和ApoE基因的多态性位点突变频率观察值符合Hardy-Weinberg遗传平衡（ P > 0.05），具有恒定性及群体代表性。使用Fisher检验发现，滇南地区人群少数民族与汉族SLCO1B1基因分布差异有统计学意义（ P=0.013），不同性别及不同年龄的SLCO1B1基因分布差异无统计学意义（ P > 0.05），少数民族与汉族、不同性别及不同年龄的ApoE基因分布差异均无统计学意义（均 P > 0.05）。 结论:滇南地区人群SLCO1B1基因与民族有关，与性别及年龄无关；ApoE基因与民族、性别及年龄无关。

由于工业发展以及生活废弃物污染的不断加剧,作物中的重金属浓度超标,严重威胁人体的健康.铝激活苹果酸转运体编码一类阴离子通道蛋白,在植物有机酸的跨膜转运中发挥重要的作用.为研究GmALMT33基因在大豆应对镉胁迫中的功能,本研究以大豆黑农48的叶片cDNA为模板,利用RT-PCR克隆得到GmALMT33基因.该基因CDS区全长1622 bp,编码553个氨基酸,含有1个ALMT结构域.qRT-PCR结果表明,GmALMT33在大豆根部的表达水平最高;镉胁迫后,该基因表达量呈现先升高后降低的趋势.构建植物表达载体pCPB-GmALMT33并对烟草、大豆毛状根进行遗传转化,转基因植株抗逆表型与生理指标分析表明,镉(66pmol/LCdCl2)胁迫下,转基因烟草叶片黄化、褪绿,边缘褐化程度明显低于野生型烟草.转基因大豆毛状根复合体植株茎秆和叶脉呈现的红褐色毒害症状程度明显弱于转空载体植株.在镉胁迫处理7d后,转基因烟草叶片的超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶活性及可溶性糖含量均高于野生型对照,丙二醛含量均低于对照.在镉胁迫处理0 d、1 d、3 d后,转基因大豆毛状根复合体根和叶的超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶活性、可溶性糖含量均高于转空载体对照,丙二醛含量均低于对照,表明GmALMT33基因提高了植株的耐镉能力.本研究为进一步探讨GmALMT33基因的作用机制提供了依据,并为大豆抗逆育种提供了新的基因.

目的 研究载脂蛋白E(ApoE)和有机阴离子转运多肽1B1(SLCO1B1)基因多态性在河北地区的分布情况,以及基因多态性与血脂水平关键指标的相关性,为他汀类药物临床合理用药提供依据.方法 收集2019年8月至2023年8月于沧州市人民医院进行ApoE和SLCO1B1基因检测的315例河北地区患者,统计并分析其ApoE和SLCO1B1总体及不同性别基因多态性分布和基因型分布情况.结果 315例患者中共检出6种ApoE基因型,由多到少依次为E3/E3(66.98%),E3/E4(18.41%),E2/E3(13.02%),E2/E4(0.95%),E4/E4(0.32%)及E2/E2(0.32%).共检出6种SLCO1B1基因型,由多到少分别为*1b/*1b(40.64%),*1a/*1b(33.97%),*1b/*15(13.33%),*1a/*1a(7.30%),*1a/*15(4.44%)和*15/*15(0.32%).ApoE各基因型及各基因表型在不同性别分布间的比较,差异有统计学意义(x2=11.40,9.11,P<0.05),SLCO1B1各基因型及基因表型在不同性别分布间的比较,差异有统计学意义(x2=13.05,7.83,P<0.05).在各血脂水平方面,ApoE基因多态性与血脂水平LDL-C具有相关性(r=0.167,P<0.05),SLCO1B1 基因表型与各血脂指标水平均无明显相关性(P>0.05).结论 河北地区人群的ApoE和SLCO1B1基因多态性分别以E3型和I类正常代谢基因型为主,且不同性别中ApoE、SLCO1B1的各基因型及基因表型存在差异,ApoE基因表型会影响LDL-C水平.

目的 研究血脂异常患者载脂蛋白(ApoE)、有机阴离子转运蛋白家族成员 1B1(SLCO1B1)基因多态性与阿托伐他汀调脂治疗后血脂、肝功能的相关性.方法 选取 2020 年 1 月—2023 年9 月就诊于沧州市人民医院的 128 例高脂血症患者,阿托伐他汀治疗至少 4 周,检测ApoE、SLCO1B1基因和血脂、肝功能指标,分析其因型与调脂疗效、肝功能指标关系.结果 阿托伐他汀治疗后,ApoE基因表型E2 组三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均较治疗前改善,E3组总胆固醇(TC)、HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均较治疗前改善,E4 组HDL-C水平均较治疗前改善,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,ApoE基因表型各组丙氨酸转氨酶(ALT)差异无统计学意义,仅E3 组谷氨酰转移酶(GGT)差异有统计学意义(P＜0.05).阿托伐他汀治疗后,SLCO1B1基因表型Ⅰ型的TC、TG、HDL-C、LDL-C均较治疗前改善,Ⅱ型HDL-C较治疗前改善,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,SLCO1B1基因表型各组ALT、GGT差异无统计学意义.结论 临床使用阿托伐他汀时,可检测ApoE、SLCO1B1基因多态性评估降脂疗效,实现阿托伐他汀个体化用药.

目的 通过建立高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠模型,探讨葛根菊苣茯苓方的降尿酸作用与可能机制.方法 将42 只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、葛根菊苣茯苓方低、中、高剂量(6.15 g/kg、12.3 g/kg、24.6 g/kg)组,别嘌醇组(0.03 g/kg),正常+葛根菊苣茯苓方组(正常给药组).除正常组与正常给药组外,其余各组大鼠每日灌胃氧嗪酸钾 1.5 g/kg、腺嘌呤 0.1 g/kg建立HUA模型,连续21 d.从第 8 天开始,除正常组与模型组外,其余各组大鼠每日灌胃葛根菊苣茯苓方及别嘌醇干预治疗,持续 14 d.造模结束后,采集大鼠血液,测定血尿酸(serum uric acid,SUA)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量;取大鼠肝脏及肾脏,计算肾脏系数;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肾脏、肝脏病理变化;Western blot检测肾脏中有机阴离子转运体(organic anion,OAT)1、OAT3、尿酸转运体(recombinant urate transporter,URAT)1、三磷酸腺苷结合转运蛋白(ATP-binding cassette sub-family G member,ABCG)2、葡萄糖转运蛋白(glucose transporter type,GLUT)9 蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠肾脏表面皱缩,色泽变浅,肾小管代偿性扩张,可见尿酸盐结晶;肾脏质量增加(P<0.05),肾脏系数增大(P<0.05);血清SUA、BUN、XOD、SCr、ADA含量与肾脏组织URAT1、GLUT9 蛋白表达显著上升(P<0.05);ABCG2、OAT1、OAT3 蛋白表达显著降低(P<0.05).与模型组比较,治疗组大鼠上述指标有明显改善,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 葛根菊苣茯苓方可以通过调节尿酸盐转运相关蛋白降低HUA大鼠的高尿酸水平.

因应用不当或饮食污染摄入马兜铃酸Ⅰ所引起的、以进展性间质纤维化为特征的急慢性肾炎称为马兜铃酸肾病或巴尔干地方性肾病.马兜铃酸Ⅰ特异性损伤近端小管,而对肾脏其他组织细胞未表现出明显的直接损伤作用.因此,近曲小管上皮细胞通过有机阴离子蛋白1和3特异性摄入马兜铃酸Ⅰ,是马兜铃酸Ⅰ发挥特异性肾毒性作用的关键.近年来对肾小管摄取马兜铃酸Ⅰ的机制己明确,但参与其在肾小管上皮细胞顶膜侧转运的蛋白鲜有报道.通过综述马兜铃酸Ⅰ在肾小管的消除机制,以期为预防和治疗马兜铃酸肾病提供新靶点.

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响.方法 运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析 LncRNA SLCO4A1-AS1 和 miR-615-5p 在食管癌组织、细胞系中表达情况.将 si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p 模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞.CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系.结果 食管癌组织、细胞系中 LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调.抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与 si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC 比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中 IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展.抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡.

目的 通过观察健脾渗湿解毒汤对高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型大鼠尿酸盐转运蛋白表达的影响,探讨该方治疗HUA的作用机制.方法 取健康雄性SD大鼠 60 只,随机分为空白对照组、模型组、苯溴马隆组和健脾渗湿解毒汤低、中、高剂量组.除空白对照组大鼠给予灌胃蒸馏水外,其他各组大鼠分别灌胃氧嗪酸钾和腺嘌呤建立HUA模型,各药物治疗组大鼠在造模 1h后予相应药物灌胃,持续给药21d后处死,检测各组大鼠血尿酸(serum uric acid,SUA)、血肌酐(serum creatinine,SCR)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肾脏及肝脏组织病理学变化;Western blot和实时荧光定量PCR法检测肾脏组织尿酸盐转运蛋白(urate transporter,URAT)1、有机阴离子转运蛋白(organic anion transporter,OAT)3 的表达.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠血清SUA、SCR含量明显升高(P<0.05),肾脏组织中URAT1 蛋白和mRNA的表达水平明显升高(P<0.01)、OAT3 蛋白和mRNA的表达水平明显降低(P<0.01).与模型组比较,健脾渗湿解毒汤低剂量组大鼠SUA含量明显降低(P<0.01),健脾渗湿解毒汤中剂量和高剂量组大鼠SUA、SCR、BUN含量均明显降低(P<0.05).此外,高剂量健脾渗湿解毒汤能够明显降低URAT1 蛋白及mRNA(P<0.05)、升高OAT3 蛋白及mRNA的表达水平(P<0.05),减轻肾脏损伤.结论 健脾渗湿解毒汤有显著的降尿酸效果,具体机制可能与其抑制尿酸重吸收蛋白URAT1、上调尿酸分泌蛋白OAT3 的表达相关.

目的 探讨尿毒素硫酸吲哚酚(IS)通过有机阴离子转运蛋白-3(OAT-3)诱发人正常肾小管上皮(HK-2)细胞氧化应激和纤维化因子的作用.方法 HK-2 细胞进行传代培养,待孔板中细胞密度达到 80%～90%时分为空白对照组(Control组,加入培养液中正常培养不予干预)、IS处理组(IS组,加入 250 μmoL IS培养),两组细胞培养 24 h;同时,进一步在 HK-2 细胞中用小干扰 RNA(siRNA)沉默 OAT-3 的表达后提取总 RNA,其浓度测定并进行 RT-PCR 以及Western blot试验检测氧化应激(Nox-4)及纤维化因子(Collagen I、TGF-β1、Smad-3、α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平;最后 HK-2 细胞以抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后,加入 250 μmoL IS刺激 24 h,采用 RT-PCR及 West-ern blot试验检测上述指标的mRNA和蛋白表达水平.结果 RT-PCR结果显示,HK-2 细胞以 250 μmoL IS刺激 24 h后,IS显著增加 HK-2 细胞中氧化应激(Nox-4)及纤维化因子(Collagen I、TGF-β1、Smad-3、α-SMA)的 mRNA表达水平(P<0.05);HK-2 细胞中 siRNA沉默 OAT-3 的表达后发现,IS诱导的上述氧化应激和纤维化因子的 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05).以 NAC预处理后,HK-2 细胞 IS刺激 24 h 发现,NAC 有效抑制 IS诱导 Nox-4、Collagen I、TGF-β1、Smad-3、α-SMA的 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05).结论 硫酸吲哚酚经 OAT-3 摄取到 HK-2 细胞内诱发氧化应激和纤维化因子高表达.