目的:探讨亚胺培南联合常用抗菌药物对bla KPC-2型碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的体外抗菌作用。 方法:选取乐清市人民医院2018年1月至2019年1月分离的6株非重复的经聚合酶链反应和DNA序列确认的bla KPC-2型CRKP菌株，测量其对常用9种抗菌药物的敏感率，采取棋盘稀释法进行亚胺培南联合8种抗菌药物的药物敏感性试验，计算部分抑菌浓度指数（FIC）并评价联合应用效果；通过绘制体外时间-杀菌曲线评估联合用药的杀菌作用。 结果:6株bla KPC-2型CRKP菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、环丙沙星、利福平、头孢噻肟等抗菌药物耐药率为100.00％（6/6），对米诺环素、克拉维酸耐药率为66.67％（4/6），对替加环素耐药率为33.33％（2/6）；亚胺培南联合替加环素抗菌作用较好，对4株起协同作用、2株起相加作用；以菌株KPN2进行亚胺培南联合替加环素治疗的时间-杀菌曲线显示：菌株KPN2在亚胺培南1/2最低抑菌浓度（MIC）与替加环素1/4 MIC在（t+2）时杀菌率>95％，此作用可维持（t+10）h至（t+12）h，亚胺培南联合替加环素对002杀菌率逐步降低，002生长曲线逐渐上升。 结论:体外药物敏感性试验显示，亚胺培南联合替加环素对bla KPC-2型CRKP具有较好协同杀菌作用，可供临床治疗bla KPC-2型CRKP感染患者时参考。

目的:探讨硫氯酚与庆大霉素联用对粪肠球菌的抗菌活性。方法:11株粪肠球菌临床菌株于2018年1月至2019年12月收集自中南大学湘雅三医院住院患者，通过微量肉汤稀释法检测硫氯酚及庆大霉素对粪肠球菌的抗菌活性；通过微量棋盘稀释法检测硫氯酚与庆大霉素的联用效果；最后，选取亚抑菌浓度的硫氯酚及与庆大霉素分别单独及联合处理48 h后观察其持续抗菌效果。多组间计量资料比较采用单因素方差分析，多组中两两比较采用Tukey或Dunnett检验。结果:硫氯酚对粪肠球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为2~4 mg/L和4~8 mg/L。硫氯酚与庆大霉素联用具有协同抑菌作用，其协同抑菌指数为0.313~0.375。硫氯酚与庆大霉素联用48 h能持续抑制粪肠球菌的增殖（ P<0.01）。硫氯酚能协同庆大霉素抑制粪肠球菌生物膜的形成及分散24 h已形成的生物膜（ P<0.05）。 结论:硫氯酚与庆大霉素联用对粪肠球菌具有协同抑制作用，且抑菌效果可持续48 h以上。

目的:本研究旨在评估杀白细胞素（Panton-Valentine leukocidin，PVL）基因与临床特征之间的关系，描述侵袭性金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）感染临床分离株的分子生物学特征。方法:收集自2016年1月至2019年12月间首都医科大学附属北京儿童医院引起侵袭性感染的金葡菌分离株，并使用电子病历回顾性收集对应患儿临床资料；对分离株进行多基因座序列分型和葡萄球菌蛋白A分型，并检测pvl基因携带情况。此外，使用微量肉汤稀释法检测所有分离株的抗生素最低抑菌浓度，根据金葡菌分离株是否携带pvl分为pvl+和pvl-两组，使用成组 t检验及Mann-Whitney U检验比较两组临床资料；使用 χ2检验比较两组分离株药物敏感性。 结果:研究期间共收集到127例侵袭性金葡菌感染病例，pvl+组患儿的白细胞计数、中性粒细胞计数、CRP高于pvl-组（ P=0.001、 P=0.001、 P=0.005）。pvl携带率为44.9%，在57例pvl+致病株中，64.9%（37/57）为MRSA感染。pvl-分离株的多重耐药率高于pvl+分离株（70% vs. 49.12%， P=0.02）。 结论:在侵袭性金葡菌感染中，pvl与患儿炎症指标升高有关；临床分离株中pvl阳性率较高，且pvl-金葡菌多重耐药率较高。

目的:研究金银花活性成分异绿原酸及联合伏立康唑＋头孢他啶对早期铜绿假单胞菌-烟曲霉菌混合生物被膜的体外协同抑菌作用。方法:体外构建早期24 h静止铜绿假单胞菌-烟曲霉混合生物被膜模型并建立不同浓度(250、500、1 000 μg/ml)的异绿原酸组及联合抗生素组(1 μg/ml伏立康唑＋16 μg/ml头孢他啶)分别作用24 h，扫描电镜(SEM)观察生物被膜形态学改变；结晶紫染色法定量生物被膜；XTT减低法测混合生物被膜内烟曲霉及铜绿假单胞菌的总代谢活性。结果:电镜观察证实异绿原酸可破坏早期混合生物被膜结构使胞外基质减少；且异绿原酸联合抗生素组较单纯抗生素联合组对混合菌体的抑制作用更加明显，使载体上生物被膜的量明显降低。结晶紫染色法提示：250、500、1 000 μg/ml异绿原酸组总被膜定量与250、500、1 000 μg/ml异绿原酸联合伏立康唑＋头孢他啶组、伏立康唑＋头孢他啶组、空白对照组及组间两两比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。XTT比色法提示：对于早期混合生物被膜，异绿原酸联合抗生素组与空白组、异绿原酸组相比，联合用药组的代谢活性明显减低(抑制率达50%)。 结论:异绿原酸在体外不能杀死铜绿假单胞菌-烟曲霉混合生物被膜内菌体，但对早期铜绿假单胞菌-烟曲霉混合生物被膜具有破坏作用，使得异绿原酸联合伏立康唑＋头孢他啶对早期混合生物被膜的破坏作用明显强于伏立康唑联合头孢他啶组，且均呈浓度依赖性。

目的:探讨Halicin对金黄色葡萄球菌的抗菌作用。方法:采用微量肉汤稀释法检测Halicin对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度；通过摇菌培养和稀释菌落计数法检测Halicin对金黄色葡萄球菌的时间-杀菌曲线；通过微量棋盘稀释法检测Halicin与常用抗菌药物的联合抗菌作用；通过结晶紫染色法测定Halicin对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制和清除作用；通过红细胞溶血试验初步检测Halicin对红细胞的毒性；最后，通过小鼠皮肤脓肿模型，取脓肿周围皮肤组织研磨稀释菌落计数。采用 t检验比较Halicin的体内抗菌效果。 结果:Halicin对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用，其最低抑菌浓度为2~4 mg/L。Halicin 16 mg/L处理8 h后，金黄色葡萄球菌平均菌落数下降5.5×10 6 CFU/ml（ t=73， P<0.05），且呈现浓度依赖性。Halicin和氨苄西林联用时，表现为协同抗菌作用，其分级抑菌浓度指数为0.5。Halicin的浓度为4倍最低抑菌浓度时，可以有效抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成，使其生物膜总量（ A570）从（2.89±0.09）减少到（1.35±0.17）（ t=11.12， P<0.05），但对已形成的生物膜无显著清除效果。Halicin对红细胞几乎无溶血活性，即使当Halicin的浓度为128 mg/L，其溶血率仍低于10%。体内实验表明，20 mg/kg Halicin可使细菌数量下降3.0×10 7 CFU/ml。 结论:Halicin对金黄色葡萄球具有较强的抑菌作用且无明显的溶血毒性。

目的:评估苯甲酸钠和水杨酸钠对多黏菌素耐药革兰阴性菌敏感性的影响。方法:对筛选到的9株多黏菌素耐药革兰阴性菌菌株采用PCR扩增 mcr耐药基因。采用微量肉汤稀释法检测多黏菌素及联合不同浓度羰基氰氯苯腙（CCCP）、苯甲酸钠和水杨酸钠的最低抑菌浓度(MIC)及FIC抑菌指数。CCCP、苯甲酸钠和水杨酸钠单独或联合4 mg/L多黏菌素进行杀菌试验。 结果:9株多黏菌素耐药菌株的MIC分别为4、8、4、8、32、1 024、2 048、8和4 mg/L。从1株多黏菌素耐药大肠埃希菌中检测到 mcr-1耐药基因。30 μmol/L CCCP、30 mmol/L苯甲酸钠和30 mmol/L水杨酸钠可将多黏菌素的MIC下降至折点或折点以下(MIC≤2 mg/L)，2株鲍曼不动杆菌多黏菌素的MIC下降至原来的1/64，2株天然耐药的变形杆菌多黏菌素的MIC仍为≥128 mg/L。多黏菌素与CCCP或苯甲酸钠或水杨酸钠联合后，对除变形杆菌之外的7株细菌均有协同或相加作用。多黏菌素和CCCP联用后具有较强的杀菌作用。 结论:苯甲酸钠和水杨酸钠可部分或完全逆转多黏菌素的耐药性，是治疗耐多黏菌素革兰阴性菌感染的良好促进剂。

目的:探究lycosin-Ⅰ体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的活性及体外联合8种常用抗菌药物对MRSA的抗菌作用。方法:本研究遵循了随机对照试验的设计原则。收集中南大学湘雅二医院2021年9至11月临床分离的MRSA 10株，采用微量肉汤稀释法测定lycosin-Ⅰ体外抗MRSA的最低抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）和杀菌动力学试验；采用微量肉汤棋盘式稀释法检测lycosin-Ⅰ与青霉素、红霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、利福平、米诺环素、万古霉素及利奈唑胺共8种常见抗菌药物的体外联合抑菌效果。结果:lycosin-Ⅰ体外抗MRSA的MIC范围为4~8 mg/L，MIC 50和MIC 90分别为4和8 mg/L；MBC范围为4~8 mg/L，其比值MBC/MIC为1~2；杀菌动力学试验结果显示，lycosin-Ⅰ浓度为1/2 MIC或MIC时，MRSA临床分离株和标准菌株均在短时间存活菌数下降而后出现恢复繁殖的现象，而浓度为2 MIC或4 MIC时存活细菌载量则呈现逐渐减少直至杀灭的趋势。lycosin-Ⅰ与庆大霉素体外联用时以协同作用为主而与其他抗菌药物联用主要表现为相加作用。此外，lycosin-Ⅰ与抗菌药物体外联用后可显著降低抗菌药物的MIC 50和MIC 90。 结论:lycosin-Ⅰ在体外对MRSA具有较好的抑菌和杀菌活性且杀菌快速、彻底，同时与其他抗菌药物体外联合抗MRSA时，能起到协同或相加作用。

目的:探讨中药单体小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）细胞膜完整性、通透性的影响以及细菌细胞壁结构的改变，为中药单体成分小檗碱在抗菌中的临床应用奠定基础。方法:本研究采用非随机同期对照试验。收集上海市第八人民医院检验科2019—2020年老年科患者下呼吸道样本分离培养的MRSA菌株3株。采用梅里埃VETEK MS全自动快速微生物质谱检测系统及VETEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪鉴定细菌药敏实验检测细菌菌种及药敏；采用微量肉汤稀释法测定小檗碱对MRSA的最低抑菌浓度（MIC）；采用培养基电导率实验观察不同浓度小檗碱对MRSA细胞膜通透性的改变；透射电子显微镜观察不同浓度小檗碱作用后MRSA细胞壁结构的变化。通过GraphPad Prism5统计软件，对电导率实验结果进行差异性分析。结果:小檗碱对MRSA的MIC为64 μg/ml；8 μg/ml（1/8 MIC）、16 μg/ml（1/4 MIC）、32 μg/ml（1/2 MIC）、64 μg/ml（1 MIC）、128 μg/ml（2 MIC）小檗碱作用菌体4 h后，电导率分别增加了24.49%、34.59%、208.92%、196.40%及208.68%。透射电子显微镜观察发现低浓度（8 μg/ml；1/8 MIC）小檗碱对细菌无明显破坏作用，MRSA菌体结构完整；中浓度（64 μg/ml，1 MIC）小檗碱作用于MRSA后发现MRSA的细胞壁变薄；高浓度（512 μg/ml；8 MIC）小檗碱诱导MRSA的细胞壁结构大量破坏溶解，菌体内容物大量外泄，导致细菌裂解死亡。结论:小檗碱通过改变MRSA细胞膜通透性及破坏和溶解细胞壁的结构，达到杀灭细菌的作用。

目的:比较头孢泊肟酯和头孢克肟对儿童社区获得性肺炎常见病原菌的体外抗菌活性，为指导临床合理应用抗生素提供依据。方法:回顾性选择2018年6月至2019年10月在江西省儿童医院住院的100例社区获得性肺炎患儿感染的病原菌，按美国临床和实验室标准协会(CLSI)的推荐，采用宏量肉汤稀释法(试管)分别测定病原菌对头孢泊肟酯和头孢克肟的敏感性及耐药性，并进行比较。结果:1．头孢泊肟酯对链球菌属、流感嗜血杆菌、卡他摩拉菌的50%受试菌株最低抑菌浓度(MIC 50)、90%受试菌株最低抑菌浓度(MIC 90)值均在敏感范围内，表现出较强的抑菌作用。头孢克肟对肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的MIC 50在敏感范围内，而对两者的MIC 90值则表现为耐药。剩余细菌对2种药物均表现出不同程度的耐药性。2.头孢泊肟酯对肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的最低杀菌浓度(MBC)范围明显低于头孢克肟，表现出较强的杀菌活性。这2种药物对卡他摩拉菌、β化脓性链球菌、无乳链球菌的50%受试菌株最低杀菌浓度(MBC 50)、90%受试菌株最低杀菌浓度(MBC 90)值均仍在MIC敏感范围内，均表现出较强的杀菌作用；剩余细菌对2种药物则均表现出不同程度的耐药性。3.入选的100株病原菌对头孢泊肟酯、头孢克肟的敏感率分别为70.00%(70/100株)、57.00%(57/100株)，耐药率分别为22.00%(22/100株)、39.00%(39/100株)，2种药物的药物敏感性比较差异有统计学意义( χ2＝7.40， P＝0.03)。 结论:头孢泊肟酯对儿童社区获得性肺炎常见病原菌有较高的敏感性，可作为儿童呼吸道细菌感染初始经验性治疗的药物选择，也可作为儿童常见呼吸道细菌感染抗生素序贯疗法口服的适宜选择。

目的 构建伤寒沙门菌线性质粒pBSSB1 LP002基因缺陷株(△LP002),探讨LP002基因在伤寒沙门菌致病中的作用.方法 采用自杀质粒介导的同源重组法制备伤寒沙门菌△LP002.2种菌株分别培养12 h,每隔1 h应用分光光度计检测波长600 nm处吸光度(OD600)值并绘制生长曲线,采用实时荧光定量PCR法检测野生株培养至OD600=0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.8时LP002 mRNA相对表达量,并选择合适生长期的△LP002和伤寒沙门菌野生株进行表型实验:采用细菌动力实验检测动力圈直径,采用生物膜形成实验检测生物膜形成量;氨苄西林、庆大霉素处理后检测活菌菌落数并绘制生存曲线,观察有无滞留菌形成,计算抗生素处理5 h时滞留率、抑菌圈直径;检测对HeLa细胞的侵袭能力及在巨噬细胞内存活能力,计算侵袭指数、增殖指数.结果 经PCR筛选验证,野生株基因组扩增产物长度为1 450 bp,△LP002基因组扩增产物长度为888 bp,敲除长度为562 bp,表明△LP002制备成功.培养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 h 时,△LP002 OD600值与野生株比较差异均无统计学意义(t=1.385、1.576、1.895、0.351、0.833、0.195、0.213、0.926、0.024、0.011、0.116、0.063,P 均＞0.05).△LP002 动力圈直径[(35.67±1.15)mm]、生物膜形成量(0.29±0.04)与野生株[(35.00±1.00)mm、0.36±0.04]比较差异均无统计学意义(t=0.756,P=0.492;t=2.196,P=0.093).生存曲线显示,△LP002、野生株均存在滞留现象;△LP002经氨苄西林、庆大霉素处理5 h时滞留率[(0.300±0.200)％、(0.022±0.022)％]与野生株[(0.513±0.252)％、(0.063±0.044)％]比较差异均无统计学意义(t=1.143,P=0.317;t=1.464,P=0.217).经氨苄西林、庆大霉素处理前、后△LP002与野生株抑菌圈直径比较差异均无统计学意义(P＞0.05);△LP002、野生株经氨苄西林、庆大霉素处理后抑菌圈直径与处理前比较差异均无统计学意义(P＞0.05).△LP002 侵袭指数[(28.65±4.73)％]、增殖指数(1.10±0.17)均低于野生株[(41.35±3.59)％、2.63±0.18](t=5.230,P＜0.001;t=15.550,P＜0.001).结论 LP002基因缺陷可抑制伤寒沙门菌对HeLa细胞的侵袭能力及在巨噬细胞内存活能力,但不影响细菌生长速度、动力、生物膜形成能力、滞留菌形成能力及对氨苄西林和庆大霉素的敏感性.