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下调极光激酶B对 CALR突变MARIMO细胞增殖、凋亡的影响及相关基因、信号通路的变化
编辑人员丨6天前
目的:探讨下调极光激酶(AURK)B对 CALR突变MARIMO细胞增殖、凋亡的影响,以及相关基因和信号通路的变化情况。 方法:选择来源于1例68岁 CALR突变阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)女性患者的MARIMO细胞为研究对象。采用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)转染MARIMO细胞,并根据shRNA不同,将该细胞分为sh-AURKA、sh-AURKB和sh-无关序列对照(CTRL)组。采用倒置荧光显微镜观察各组MARIMO细胞株,采用流式细胞术(FCM)检测其绿色荧光蛋白(GFP)阳性率。通过FCM、5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)/4′,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色、Annexin V/PE试剂对sh-AURKB和sh-CTRL组MARIMO细胞增殖、凋亡情况进行分析。采用RNA转录组测序(RNA-Seq)技术分析sh-AURKB和sh-CTRL组MARIMO细胞差异表达基因(DEG)的富集情况,对其进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选显著DEG。通过实时荧光定量-PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法对DEG的mRNA和蛋白质相对表达水平进行验证。定量资料的2组比较,采用 t检验。3组总体比较,采用单因素方差分析;两两比较,采用最小显著差异(LSD)法。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。 结果:①转染72 h后,sh-AURKB组MARIMO细胞数量较sh-CTRL组减少[ (0.62±0.03)×10 5比(12.44±0.08) ×10 5],差异有统计学意义( t=257.20, P<0.000 1)。与sh-CTRL组相比,sh-AURKB组处于S期的MARIMO细胞比例降低[(33.37±0.75)%比(42.77±0.91)%],处于G2-M期的MARIMO细胞比例增高[(27.83±0.69)%比(17.90±0.40)%],细胞凋亡比例增高[(16.47±0.70)%比(2.75±0.13)%],并且差异均有统计学意义( t=13.83, P=0.000 2; t=23.78, P<0.000 1; t=33.28, P<0.000 1)。② RNA-Seq检测结果显示,与sh-CTRL组相比,sh-AURKB组MARIMO细胞中有2 787个基因表达上调,2 420个基因表达下调。③ sh-AURKB和sh-CTRL组DEG主要注释于细胞内区域、细胞内膜边界细胞器、膜边界细胞器、细胞内细胞器部分、细胞器部分等GO节点。KEGG富集分析结果显示,共89个通路显著富集。对相关通路进一步筛选结果显示,2组显著DEG为 NDUFV1,NPRL2,MAP2K4,CPEB1。④ RT-qPCR结果显示,sh-AURKB组的 NPRL2、MAP2K4、CPEB1mRNA相对表达水平显著低于sh-CTRL组,差异有统计学意义(LSD- t=14.13、9.13、3.10, P<0.000 1、<0.000 1、=0.021)。蛋白质印迹法检测结果显示,与sh-CTRL组相比,sh-AURKB组NDUFV1/GAPDH蛋白条带灰度值比值增高,NPRL2/GAPDH、CPEB1/GAPDH、MAP2K4/GAPDH和p-MAP2K4/GAPDH降低,并且差异均有统计学意义(LSD- t=22.60、12.09、7.48、20.48、8.22, P<0.000 1、<0.000 1、=0.000 3、<0.000 1、=0.000 2)。 结论:AURKB参与 CALR突变MARIMO细胞的增殖、分化及凋亡等过程,而下调AURKB可引起相关基因表达水平发生显著变化。DEG主要富集在细胞代谢、细胞周期及凋亡相关通路。
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编辑人员丨6天前
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极光激酶A在肝细胞癌中的表达及预后意义
编辑人员丨6天前
目的:探索极光激酶A (AURKA)在肝细胞癌(HCC)中表达和对预后的判断作用。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载并提取HCC患者的mRNA表达谱及临床数据。从正常肝组织与全部肿瘤组织、癌旁正常组织与配对肿瘤组织两个方面对TCGA数据库HCC患者的AURKA mRNA表达情况进行分析,然后在人类蛋白质图谱(HPA)数据库中搜索AURKA,分析AURKA在HCC组织和正常肝组织蛋白质水平的表达情况。根据TCGA数据库HCC患者的TNM分期信息,探索AURKA的mRNA在不同分期的表达情况。采用Kaplan-Meier法分析TCGA数据库HCC患者的AURKA高、低表达(以中位数为截断值)与生存期长短是否显著相关。利用Kaplan-Meier Plotter网站公共资源平台中HCC患者的RNA-seq表达谱数据进行外部验证。对TCGA数据库患者的年龄、性别、分化程度、TNM分期、AURKA的mRNA表达进行Cox单因素和多因素分析。结果:TCGA数据库中HCC肿瘤组织共有374例,正常肝组织共有50例,其中肿瘤和正常组织来源于同一患者的配对组织共有50对。TCGA数据库中全部HCC肿瘤组织对比正常肝组织和配对癌旁组织,AURKA的mRNA均显著高表达,并且在蛋白质水平亦表达升高,差异具有统计学意义( P<0.05);随着肿瘤TNM分期的升高,AURKA的mRNA表达呈现逐渐上升趋势,差异具有统计学意义( P<0.05);在TCGA数据库HCC队列中,AURKA的mRNA高表达与HCC不良预后相关,并且在Kaplan Meier Plotter数据库得到验证,差异均具有统计学意义( P<0.05);Cox多因素回归分析显示,TNM分期( HR=1.69,95% CI:1.37~2.10)和AURKA的mRNA表达水平( HR=1.03, 95% CI:1.01~1.10)是HCC患者的独立预后影响因素。 结论:AURKA在HCC中显著高表达且与HCC的不良预后相关,是HCC的预后独立影响因素。
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编辑人员丨6天前
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极光激酶A抑制剂对胶质母细胞瘤细胞增殖和B7-H3蛋白表达影响的实验研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨极光激酶A(AURKA)抑制剂对胶质母细胞瘤(GBM)的细胞增殖和免疫检查点B7-H3表达的影响。方法:基于中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)计划数据库(共325例患者),分析AURKA mRNA的表达水平与肿瘤的病理学类型、世界卫生组织(WHO)级别、原/复发状态、患者的生存期、O 6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)甲基化、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变及染色体1p19q共缺失的相关性。比较AURKA mRNA在不同病理学类型、不同WHO级别,以及原发与复发性脑胶质瘤中表达的差异。绘制Kaplan-Meier生存曲线以比较不同AURKA mRNA表达水平的脑胶质瘤患者生存期差异。通过单因素和多因素Cox回归模型分析探讨AURKA mRNA表达水平、IDH突变、染色体1p19q共缺失、发病年龄、放疗、化疗、WHO级别及原/复发状态对脑胶质瘤患者生存期的影响。绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC),以确定AURKA mRNA表达水平对脑胶质瘤患者生存期的预测价值。收集首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心接受手术治疗患者的脑胶质瘤组织样本,其中低级别胶质瘤(LGG)4例,GBM 4例;通过蛋白质免疫印迹(WB)法检测AURKA在肿瘤组织样本中的表达情况。采用AURKA抑制剂alisertib处理人GBM细胞株U87-MG,将其分为对照组(以DMSO处理)和alisertib处理组(以5 μmol/L alisertib处理)。采用CCK-8法和结晶紫染色方法分别检测alisertib对细胞活性和克隆形成的影响。采用WB法检测alisertib对AURKA、磷酸化AURKA和B7-H3蛋白表达的影响。应用流式细胞术检测alisertib对GBM细胞膜蛋白B7-H3表达的影响。 结果:CGGA计划数据库分析结果表明,AURKA mRNA在GBM中的表达水平高于星形胶质细胞瘤和少突胶质细胞瘤(均 P<0.001);在WHO 2、3及4级胶质瘤组间,AURKA mRNA的表达水平随WHO级别的升高而增加( P<0.001);AURKA mRNA在复发性胶质瘤中的表达水平高于原发性胶质瘤( t=4.50, P<0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,AURKA mRNA高表达组的患者比低表达组生存期短(均 P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,AURKA mRNA的表达水平、IDH突变、染色体1p19q共缺失、发病年龄、放疗、化疗、WHO级别及原/复发状态均为脑胶质瘤患者生存期的影响因素(均 P<0.05);多因素Cox回归模型分析结果显示,AURKA mRNA高表达、复发状态、WHO高级别、发病年龄偏高、未接受化疗及无染色体1p19q共缺失均为脑胶质瘤患者生存期的独立危险因素(均 P<0.05)。ROC曲线分析显示,AURKA mRNA表达水平预测脑胶质瘤患者1年、3年和5年生存期的AUC(95% CI)分别为0.78(0.72~0.83)、0.85(0.80~0.89)、0.84(0.79~0.89)。临床样本的WB结果显示,人GBM组织中AURKA蛋白的表达水平高于LGG( t=2.62, P=0.040)。CCK-8实验结果显示,alisertib处理24、48、72 h后均显著抑制了U87-MG细胞的活性(均 P<0.05)。克隆形成实验结果显示,alisertib明显抑制了U87-MG细胞的克隆形成( t=9.30, P<0.001)。WB实验结果表明,alisertib处理组的磷酸化AURKA表达水平明显低于对照组( t=10.98, P<0.001),而B7-H3蛋白表达水平高于对照组( t=7.55, P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,alisertib处理组膜蛋白B7-H3的表达水平升高( t=20.04, P<0.001)。 结论:AURKA抑制剂alisertib可能能够抑制GBM的细胞增殖,并增强免疫检查点B7-H3的表达。
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编辑人员丨6天前
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桥粒斑菲素蛋白3在乳腺癌中的表达及临床意义
编辑人员丨6天前
目的:探讨桥粒斑菲素蛋白3(PKP3)在乳腺癌中的表达及预后的关系。方法:分析160例乳腺癌患者的组织芯片,采用免疫组织化学方法检测组织标本中PKP3的表达水平,应用 χ2检验和Fisher精确概率法分析PKP3高表达与低表达组间差异。采用Cox比例风险回归模型分析乳腺癌患者预后的危险因素,采用Kaplan-Meier法绘制患者总生存曲线。 结果:160例乳腺癌肿瘤组织中109例PKP3呈高表达,51例呈弱表达。PKP3高表达与年龄( χ2=8.845, P<0.05)、病理分级( χ2=6.434, P<0.05)、孕激素受体(PR)( χ2=3.902, P<0.05)、细胞核增殖抗原(Ki-67)( χ2=6.237, P<0.05)、CK56( χ2=5.561, P<0.05)、分子分型( χ2=8.602, P<0.05)、丝切蛋白(Cofilin)( χ2=14.672, P<0.05)和极光激酶A(Aurora A)( χ2=25.286, P<0.05)表达比较,差异有统计学意义。PKP3高表达与T分期( χ2=0.046, P>0.05)、N分期( χ2=3.270, P>0.05)、美国癌症联合委员会(AJCC)临床分期( χ2=1.420, P>0.05)、雌激素受体(ER)表达( χ2=2.534, P>0.05)、人表皮生长因子-2(Her-2)表达( χ2=3.173, P>0.05)比较,差异无统计学意义。单因素Cox回归分析发现PKP3高表达( HR=2.330,95% CI:1.321~4.924, P<0.05)、病理分级(Ⅲ)( HR=88.331,95% CI:7.639~1 021.413, P<0.05)是乳腺癌患者预后不良的危险因素,多因素Cox回归分析发现PKP3高表达( HR=2.078,95% CI:1.022~4.224, P<0.05)、病理分级(Ⅲ)( HR=67.626,95% CI:5.797~788.947, P<0.05)是乳腺癌患者预后不良的危险因素,采用Kaplan-Meier生存分析结果所示,PKP3的高表达与较低的生存率相关( P<0.05)。 结论:PKP3在乳腺癌在组织中高表达可提示患者预后差。
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编辑人员丨6天前
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哇巴因通过阻遏激光激酶信号途径抑制肝癌细胞生长机制探索
编辑人员丨6天前
目的:观察钠钾ATP酶抑制剂哇巴因抑制肝癌HepG2细胞的增殖和分裂效果,并探讨其作用机制。方法:不同浓度(0.1、1.0、10.0 μmol/L)哇巴因作用HepG2细胞24 h,以HepG2细胞为对照组,通过细胞活力检测试剂盒(CCK-8法)检测哇巴因对HepG2细胞增殖的抑制作用,细胞免疫荧光共定位(ICC法)检测细胞染色体分离状态,Western印迹检测极光激酶A(AURKA)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、促分裂原活化蛋白激酶(ERK)、p-ERK蛋白表达。结果:0.1、1、10 μmol/L哇巴因作用细胞24 h后,细胞生长抑制率分别为(23.50±4.57)%、(49.80±5.32)%和(72.10±5.62)%,与对照组相比差异均有统计学意义,抑制效果呈现浓度依赖性( F=32.8,均 P<0.05);细胞免疫荧光共定位显示,1 μmol/L哇巴因作用细胞24 h后,染色体分离发生障碍。与对照组相比,加药组细胞纺锤体直径显著较低,差异有统计学意义( t=9.58, P<0.05)。Western印迹结果显示,1 μmol/L哇巴因作用HepG2细胞24 h后,与对照组相比,AURKA、p-mTOR、p-ERK表达较低( F=16.26,8.32,33.59; P<0.05),哇巴因可阻抑肝癌细胞在裸鼠体内生长( F=370.20, P<0.05)。 结论:哇巴因通过阻遏激光激酶信号途径,诱发肝癌HepG2细胞染色体分裂障碍、抑制肝癌细胞生长。
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编辑人员丨6天前
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复发难治外周T细胞淋巴瘤治疗进展
编辑人员丨6天前
外周T细胞淋巴瘤(PTCL)是一组起源于胸腺后T细胞或成熟自然杀伤(NK)细胞的异质性疾病。随着医疗技术的革新,PTCL患者的预后明显改善,但是仍有一部分患者出现复发、难治、预后较差的情况。近年来,二线化疗方案、造血干细胞移植、部分新药(组蛋白去乙酰化酶抑制剂、二氢叶酸还原酶抑制剂、极光激酶A抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、靶向治疗等)的应用在复发难治PTCL患者的治疗中发挥着重要作用,同时,移植方案的选择及以新药为骨架的方案之间的联合也成为研究的热点。
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编辑人员丨6天前
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膀胱癌关键基因及通路的生物信息学分析
编辑人员丨6天前
目的:运用生物信息学技术对膀胱癌基因表达谱分析获取差异基因及其相关信号通路。方法:利用生物信息学技术及相关工具对GSE13507、GSE7476、GSE40355、癌症基因图谱计划(TCGA)数据库中膀胱癌基因表达序列数据集行差异表达分析并获取共同差异基因379个,使用STRING数据库、Cytoscape软件获取蛋白互作网络(PPI)及关键基因,clusterProfiler包对10个关键基因行基因本体论(GO)、生物信号通路(KEGG)富集分析,最后利用人类蛋白表达图集(HPA)在线工具对10个关键基因行生存分析。结果:差异分析获取上调基因77个、下调基因302个,共379个。MCODE提取得到2个主要的PPI网络,cytoHubba共筛选出10个关键基因[细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、泛素结合酶E2 C(UBE2C)、细胞分裂周期蛋白20(CDC20)、胸苷酸合成酶(TYMS)、极光激酶A(AURKA)、哺乳动物叉头框蛋白M1(FOXM1)、细胞周期蛋白B2(CCNB2)、PDZ结合激酶(PBK)、细胞分裂蛋白调节剂1(PRC1)],均为上调基因。通过GO、KEGG富集分析,关键基因主要富集在蛋白酶代谢、细胞周期与细胞分裂等功能中,以及细胞周期、细胞衰老、p53信号通路、FoxO信号通路等信号通路上。生存分析结果显示CCNB1、CDC20、PRC1在癌组织中高表达,与较差的预后相关( P<0.05),差异有统计学意义。 结论:通过生物信息学分析与挖掘有助于认识膀胱癌的发生发展,CCNB1、CDC20、PRC1有助于膀胱癌诊断及治疗。
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编辑人员丨6天前
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基于网络药理学及分子对接探讨黄精治疗黄褐斑作用机制
编辑人员丨1个月前
目的:基于网络药理学及分子对接探讨黄精治疗黄褐斑的作用机制.方法:检索中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)数据库筛选黄精有关活性成分,利用SwissTargetPrediction预测有效成分作用靶点.通过GeneCard、Drugbank数据库收集黄褐斑相关的疾病靶点,并通过韦恩图对有效成分靶点和疾病靶点进行交集,获得黄精治疗黄褐斑的潜在有效靶点.绘制活性成分与潜在有效靶点的网络图,利用Cytoscape软件分析每个活性成分在治疗黄褐斑中的重要性.将黄精和疾病的交集靶点利用STRING数据库进行蛋白互作分析,筛选出黄精治疗黄褐斑的关键靶点.通过David数据库将交集靶点进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并深度挖掘黄精主要活性成分及作用靶点;通过分子对接验证活性成分和作用靶点蛋白之间的分子结合能.结果:共筛选出黄精活性成分12个,黄精治疗黄褐斑靶点327个.黄精治疗黄褐斑的核心活性成分有(2R)-7-羟基-2-(4-羟苯基)-4-苯丙二氢呋喃、甘草素、4,5-二羟基黄酮、黄芩素、谷甾醇、西伯利亚蓼苷A、中华蓼素1、β-谷甾醇等,核心靶点为细胞周期蛋白A2(CCNA2)、细胞周期蛋白A1(CCNA1)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、细胞周期蛋白E1(CCNE1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、极光激酶A(AURKA).黄精治疗黄褐斑的通路主要富集于孕酮介导的卵母细胞成熟、细胞衰老、乙型肝炎、癌症通路等信号通路.分子对接发现活性成分和治疗靶点具有较强的结合力.结论:黄精可能通过(2R)-7-羟基-2-(4-羟苯基)-4-苯丙二氢呋喃、甘草素、4,5-二羟基黄酮等成分作用于CCNA2、CCNE1、CDK2、CCNA1、CCNA1等靶点,通过调节孕酮介导的卵母细胞成熟、细胞衰老、乙型肝炎等相关信号通路治疗黄褐斑.
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编辑人员丨1个月前
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细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和极光激酶A(AURKA)在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及意义
编辑人员丨1个月前
目的 探讨血清细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和极光激酶A(AURKA)在HBV相关肝细胞癌(HBV-HCC)患者中的诊断价值.方法 收集2022年6月—2023年12月在甘肃省人民医院消化内科住院部的HBV-HCC患者、HBV相关肝硬化患者(HBV-LC)及慢性乙型肝炎患者(CHB)各50例,收集同期体检中心与病例组年龄、性别相匹配的健康人群50例,记录患者的年龄、性别、并发症以及入院后首次的血常规、肝功能、凝血等检验指标.ELISA法检测各组血清中CDK1和AURKA水平.符合正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;非正态分布的计量资料多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用Bonferroni检验.计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法.CDK1与AURKA表达的关系采用Spearman相关分析;受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)分析CDK1与AURKA对HBV-HCC的诊断价值.结果 与对照组相比,HBV-HCC患者肝功能各项指标差异均有统计学意义(P值均<0.05);CHB组与HBV-HCC组Alb、Glb、DBil、AST、GGT、ALP水平比较差异均有统计学意义(P值均<0.05);HBV-LC组与HBV-HCC组Glb、AST、GGT水平比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).HBV-HCC组患者血清中CDK1及AURKA水平明显高于HBV-LC组、CHB组和对照组(P值均<0.05).CDK1水平与AURKA在总研究人群和HBV-HCC患者中均存在显著的正相关性(r值分别为0.526 6、0.815 2,P值均<0.001).以对照组为参照,CDK1诊断HBV-HCC的AUC为0.832 3,敏感度为92.86%,特异度为75%;AURKA诊断HCC的AUC为0.886 6,敏感度为95.80%,特异度为74%.以CHB组为参照,CDK1诊断HBV-HCC的AUC为0.833 3,敏感度为93.75%,特异度为75%;AURKA诊断HBV-HCC的AUC为0.972 7,敏感度为95.83%,特异度为91.67%.以HBV-LC组为参照,CDK1诊断HBV-HCC的AUC为0.608 5,敏感度为66.67%,特异度为54.17%;AURKA诊断HBV-HCC的AUC为0.762 2,敏感度为95.83%,特异度为47.92%.结论 血清CDK1与AURKA水平随着HBV相关慢性肝病的进展而升高,二者对HBV相关HCC有一定的诊断价值.
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编辑人员丨1个月前
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Aurora-A/TPX2复合体与肿瘤关系的研究进展
编辑人员丨2024/7/20
基因组不稳定是肿瘤的重要标志,细胞分裂过程中调节遗传稳定性的相关蛋白质与信号通路在肿瘤的发生发展中起着重要作用.极光激酶(Aurora kinase)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,其包括极光激酶A(Aurora-A)、极光激酶B(Aurora-B)和极光激酶C(Aurora-C)3个亚型,在细胞周期中呈动态分布.通过调控细胞有丝分裂过程中中心体的成熟和分离、双极纺锤体的组装和稳定、染色体的精确分离等过程,以确保细胞周期的正常完成.爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)是Aurora-A的关键调节剂之一,在有丝分裂纺锤体的组装和维持纺锤体极的完整性方面至关重要.最近有学者发现了Aurora-A/TPX2复合体在肿瘤发生发展中的新作用.因此,本文就Aurora-A和TPX2的生物学特性、与肿瘤发生发展的关系以及Aurora-A/TPX2复合体作为一个新的功能单位在肿瘤形成中的作用机制进行综述.
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编辑人员丨2024/7/20
