款冬花首载于《神农本草经》,历代本草专著和方书典籍中有关其药用历史的记载十分丰富,是临床中常用的止咳化痰药.目前,关于款冬花的基原、产地、规格等级等已有较多综述,但性味、功效记载的变迁,以及古代应用的考证及现代应用的评述未见相关综述.性味是中药药性理论的核心部分,反映中药性质、性能,是临症治法、遣药组方的重要依据.此外,历代典籍中记载了大量的款冬花方剂和应用,有值得深入挖掘的价值..

款冬花为菊科植物款冬Tussilago farfara L.的干燥花蕾,系中国常用大宗中药材之一,具有润肺下气、化痰止咳之功效.款冬花化学成分丰富,药用价值高,临床疗效好.然而,不同产地款冬花受环境、栽培条件等因素的影响,它们在生长状态、理化性质、药材性状及次生代谢产物积累等方面均存在不同程度的差异,尤其是各地款冬花药材中主要化学成分参差不齐,导致药材品质参差不齐.基于此,通过本草考证探明款冬花历代产区沿革,结合课题组多年对中国主产区款冬花的研究成果,并整理款冬花中主要化学成分的研究文献资料,对倍半萜类、酚酸类、黄酮类、生物碱类化学成分进行数据收集和横向归纳比较,总结不同产地款冬花成分的研究现状,从款冬花标志性成分角度窥视其成分差异,为开展不同产地款冬花的共性和个性特征研究提供数据支撑.

目的 研究大黄橐吾化学成分及其抗炎活性.方法 大黄橐吾乙醇提取物采用高效液相色谱、凝胶柱色谱、硅胶柱色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.利用CCK-8法、Griess法测定化合物的体外抗炎活性.结果 从中分离得到18个化合物,分别鉴定为14-acetoxy-7β-senecioyloxy-1-(2-methylbutyryloxy)-notonipetranone(1)、rel-(1R,3 αS,5R,6S,7R,7αS)-1-[(1S)-1-(acetyloxy)ethyl]octahydro-6-[(2-methylbutanoyl)oxy]-4-methylidene-2-oxo-7-(propan-2-yl)-1H-inden-5-yl(2E)-3-methylpent-2-enoate(2)、款冬酮(3)、petasipaline B(4)、8α-hydroxy-4(15),11-eudesmadiene(5)、羽扇烯酮(6)、羽扇豆醇(7)、(3β)-lup-20(29)-en-3-yl stearate(8)、松脂醇单葡萄糖苷(9)、isoeucommin A(10)、isoline(11)、尿苷(12)、三十四烷醇(13)、棕榈酸(14)、tridec-1-ene(15)、cis-octadec-9-enoic acid(16)、甲基-α-D-呋喃果糖苷(17)、β-谷甾醇(18).化合物1～6、9～11、14对脂多糖诱导的RAW264.7细胞生成NO有抑制活性.结论 化合物3～6、8～10、12～17为首次从该植物中分离得到.化合物1～6、9～11、14具有抗炎活性.

目的:款冬花具有止咳化痰的作用,以止咳为主.研究显示款冬花的某些成分可能与止咳作用相关,另有某些成分被证实具有止咳活性,但款冬花止咳药效的物质基础尚未阐明.本研究通过对款冬花提取物的高效液相色谱指纹图谱与止咳作用进行谱效相关分析,旨在阐明款冬花的止咳活性成分群.方法:采用高效液相色谱法建立10批款冬花提取物的指纹图谱并获得其化学成分数据;选用豚鼠作为实验动物,采用枸橼酸引咳法获得10批款冬花提取物的止咳药效数据.将SPF级健康雄性Hartley豚鼠随机分为S1～S10组、阳性对照组和空白对照组(共12组),每组10只,S1～S10组分别给予款冬花提取物S1～S10(4 g/kg),阳性对照组给予枸橼酸喷托维林(10 mg/kg),空白对照组给予纯化水,各组连续给药5 d,将豚鼠置于5 L容积的密闭广口瓶内,用超声雾化器以最大喷雾力度喷入17.5%的枸橼酸并持续0.5 min,记录每只豚鼠的咳嗽潜伏期和5 min内咳嗽次数.采用灰色关联度分析和偏最小二乘回归对款冬花提取物的化学成分数据和止咳药效数据进行谱效相关分析,预测款冬花的止咳活性成分群.对预测的款冬花止咳活性成分群进行等效性验证:将SPF级健康雄性Hartley豚鼠随机分为S9组、活性成分群组、阳性对照组和空白对照组(共4组),每组10只,S9组给予款冬花提取物S9(4 g/kg),活性成分群组给予预测的止咳活性成分组合物(剂量相当于4 g/kg的款冬花提取物S9),阳性对照组给予枸橼酸喷托维林(10 mg/kg),空白对照组给予纯化水,各组连续给药5 d,动物造模和药效指标观察同前.结果:共建立10批款冬花提取物的高效液相色谱指纹图谱并获得14个主要共有峰的峰面积数据;获得10批款冬花提取物的止咳药效数据.与空白对照组比较,阳性对照组及S1、S2、S3、S4、S6、S7、S8、S9、S10组的咳嗽潜伏期加长(均P<0.01),阳性对照组及S1、S2、S4、S6、S8、S9、S10组的5 min内咳嗽次数减少(均P<0.05).谱效相关分析显示:异绿原酸C、异绿原酸A、绿原酸、异绿原酸B、异槲皮苷、芦丁6种成分对款冬花止咳作用的贡献度较高,初步判断为款冬花的止咳活性成分群.等效性验证显示:S9组、活性成分群组的2个药效指标的差异均无统计学意义(均P>0.05),证实异绿原酸C、异绿原酸A、绿原酸、异绿原酸B、异槲皮苷、芦丁为款冬花的止咳活性成分群.结论:谱效相关分析结合等效性验证可用于款冬花止咳药效物质基础研究.款冬花发挥止咳作用是多成分共同作用的结果.

目的 基于响应曲面法,从多指标综合评价的角度建立蜜炙款冬花的最佳炮制工艺.方法 用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)定量分析,以款冬酮、绿原酸、异绿原酸A和芦丁含量的综合评分值为考察指标,以加蜜量、炒制温度、炒制时间为单因素,用响应曲面法优选出蜜款冬花的最优炮制工艺并进行验证实验.结果 优选的蜜炙款冬花最佳炮制工艺为加蜜量为 4 倍药材量,炒制温度为 195℃,炒制时间为 12 min.验证实验中 3 批样品提取后的综合评分值(94.16%)与预测值(95.92%)相比,相对误差为0.93%.结论 该实验的方法学考察结果准确、重复性好,用响应曲面法优选的蜜炙款冬花的最佳炮制方案可行,为制定蜜炙款冬花的质量标准提供了理论依据.

[目的]探讨款冬花多糖对白细胞介素-6(IL-6)诱导的乳腺癌细胞恶性行为作用机制.[方法]IL-6 诱导人乳腺癌细胞MCF-7后,不同浓度的款冬花多糖处理.转染miR-NC、miR-889-3p mimics的MCF-7细胞经IL-6处理;转染NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors的MCF-7细胞经款冬花多糖与IL-6 处理;噻唑蓝(MTT)、平板克隆形成以及TranswellTM实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-889-3p、Toll样受体 4(TLR4)的表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TLR4 蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-889-3p与TLR4 的靶向关系.[结果]款冬花多糖可降低IL-6 诱导的MCF-7 细胞增殖(P＜0.05)、迁移及侵袭能力(P＜0.05),而提高miR-889-3p的表达(P＜0.05),呈剂量依赖性;TLR4 是miR-889-3p的靶基因,miR-889-3p可靶向调控TLR4 的表达;转染miR-889-3p mimics可降低IL-6 诱导的MCF-7 细胞增殖、迁移及侵袭(P＜0.05);转染miR-889-3p-inhibitors可恢复款冬花多糖对IL-6 诱导的MCF-7 细胞增殖、迁移及侵袭.[结论]款冬花多糖可通过调节miR-889-3p/TLR4 表达而抑制IL-6诱导的乳腺癌细胞恶性行为.

目的 探究款冬酮(tussilagone,TUS)对过敏性鼻炎模型(allergic rhinitis,AR)小鼠肥大细胞的抑制作用及其分子机制.方法 将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、TUS组和Ly294002组,每组10只.AR小鼠模型采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)联合鼻腔滴注OVA方法构建.造模完成后第1～7天,TUS组小鼠按照5 ml/kg的剂量每天腹腔注射8 × 10-2 mol/L款冬酮药剂;Ly294002组小鼠每天腹腔注射6.0 mg/kg的PI3K/AKT信号通路抑制剂Ly294002溶液.采用HE染色检测小鼠鼻黏膜组织病理情况,Giemsa染色检测鼻黏膜组织嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润;采用ELISA法检测致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4、IL-5和IFN-γ水平;流式细胞术检测小鼠脾脏组织CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞水平.Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平.将RBL-2H3细胞分为对照组、模型组、款冬酮组(C-TUS组)和Ly294002组(C-Ly294002组).采用100 ng/ml的DNP-IgE处理12 h致敏细胞后,C-TUS组细胞加入1 μl浓度为8×10-2 mol/L的款冬酮处理2 h,C-Ly294002组细胞加入10 μl浓度为25 mol/L的Ly294002溶液处理2 h.采用ELISA法检测β-己糖氨酸酶和组胺水平,采用Fura-2/AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组小鼠鼻黏膜组织出现了大量炎性细胞浸润,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均增加;TUS组和Ly294002组小鼠鼻黏膜组织炎性浸润较模型组显著改善,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均减少.与对照组比较,模型组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P＜0.05),IFN-γ水平降低(P＜0.05),脾脏组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例降低(P＜0.01),鼻黏膜组织中PI3K和PKB蛋白磷酸化水平升高(P＜0.05);与模型组比较,TUS组和Ly294002组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均降低(P＜0.05),IFN-γ水平升高(P＜0.05),脾脏组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例升高(P＜0.05),鼻黏膜组织中PI3K和PKB蛋白磷酸化水平均降低(P＜0.05);与TUS组比较,Ly294002组各项指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,模型组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL4和IL-5的水平均升高(P＜0.01),IFN-γ水平降低(P＜0.05),Ca2+内流强度增强(P＜0.01),PI3K和PKB蛋白磷酸化水平升高(P＜0.05);与模型组比较,C-TUS组和C-Ly294002组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL4和IL-5的水平均降低(P＜0.05),IFN-γ水平升高(P＜0.05),Ca2+内流强度减弱(P＜0.05),PI3K和PKB蛋白磷酸化水平均降低(P＜0.05);与C-TUS组比较,C-Ly294002组各项指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 款冬酮通过抑制肥大细胞的活化和维持细胞免疫稳态,对过敏性鼻炎起到缓解作用,该机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路激活有关.

目的 观察款冬花散对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺巨噬细胞极化的影响及TLR4/NF-KB/NLRP3通路在介导巨噬细胞极化过程中的作用.方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、罗红霉素组及款冬花散低、中、高剂量组,每组8只.建立COPD(痰热壅肺证)大鼠模型,采用款冬花散干预,HE染色评估肺组织病理改变,ELISA法对肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平和肺组织iNOS、CD10水平进行定量检测,通过免疫组化和RT-PCR检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的蛋白和mRNA表达水平.结果 与空白组相比,模型组大鼠BALF中IL-1β、IL-18含量升高,肺组织中一氧化氮合酶(iNOS)含量升高、CD10含量降低,肺组织中TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达上调(P＜0.01),而款冬花散组对COPD(痰热壅肺证)模型大鼠的生物学特征有一定改善作用,在一定程度上改善肺组织炎性改变,降低大鼠BALF中IL-1β、IL-18含量,降低肺组织iNOS含量,升高肺组织CD10含量,下调肺组织TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达,且以高剂量组较为明显,呈现出一定的量效关系(P＜0.05或P＜0.01).结论 款冬花散能通过TLR4/NF-κB/NLRP3通路抑制COPD(痰热壅肺证)大鼠肺巨噬细胞的M1型极化,靶向干预巨噬细胞极化,从而达到治疗作用.

目的 对款冬的生态适宜性进行评价,为款冬合理引种栽培提供参考.方法 通过第四次全国中药资源普查,收集野生款冬166批,记录采样点的经纬度、海拔等地理信息,结合55个生态因子数据,利用最大熵模型和地理信息系统软件的空间分析功能进行分析.结果 11月份降水量、3月份降水量、土壤类型、6月份降水量、植被类型及土壤质地分类是影响款冬生长的主要生态因子.款冬适宜分布区主要集中在我国中部及南部地区,包括云南西北部、湖北边缘地区、陕西南部、甘肃南部、河北南部、山东中部和东部、河南北部、安徽中部、江苏西部、江西北部、湖南东部和北部、广西西部和南部及广东西南部.结论 本研究结果与款冬实际生长环境基本吻合,可为款冬引种栽培提供理论依据.

以款冬幼嫩叶柄为材料,研究植物生长调节剂对其离休培养与植株再生的影响,建立了款冬离体快繁技术体系.结果表明:款冬叶柄切段较理想的灭菌方法为75％乙醇浸泡30 s,转入饱和漂白粉上清液浸泡15 min;适合愈伤诱导的培养基为MS +6-BA 3.0 mg·L-1 +2,4-D 2.0 mg·L-1,诱导率96.2％;在培养基MS +ZT2.0 mg·L-1 +NAA 0.3 mg·L-1上芽苗分化效果较好,分化率91％,平均芽数8.26个;较佳的不定芽增殖培养基为MS+KT 1.0 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1,增殖倍数为11.81,平均苗高4.9 cm;生根培养基为1/2MS+ IBA 0.2 mg·L-1,生根数平均为5.68条,生根率为95.22％以上;瓶苗移栽于河沙-有机肥3∶1的基质中生长良好,成活率达90％以上;大田试验表明:同等栽培条件下款冬组培株、栽培株和野生株在生长量与花粒产量等方面存在显著差异,以组培株生长量与花粒产量相对较高.组培品与野生品有效成分含量基本一致.