死后经过时间的准确推断是法医病理学和刑事侦查领域的一项困难且极为关键的任务.近年来,物理、化学、微生物学、免疫学、昆虫学、分子生物学等学科方兴未艾,特殊染色、光谱、质谱、色谱、影像学等技术不断发展,用于死后经过时间推断的方法日益增多,其中免疫标记技术发挥了重要作用.本文系统地综述了国内外利用免疫标记技术推断死后经过时间的相关研究,包括免疫组化技术、免疫印迹技术、免疫荧光技术、放射免疫技术等,总结并分析这些技术在死后经过时间推断中的研究进展,以期为开拓法医病理学死后经过时间推断的研究思路,并能更好地将之应用于法医实践中提供参考.

目的:对比研究头穴丛刺联合经验方治疗脑缺血大鼠的作用及机制.方法:选取健康大鼠随机分组,预标记48 h后行MCAO造模,治疗方法采用头穴丛刺联合补阳还五汤原方及头穴丛刺联合加味经验方分组治疗.在各时间点分别处死取材,以神经功能评定、行为学评定、病理学检查和Western blot分别测定Hes5蛋白指标,对比研究,观察头穴丛刺联合加味经验方对模型大鼠NSC的影响.结果:经过大量处方筛选发现,头穴丛刺联合补阳还五汤传统组方在加入醉魂藤、走马芹、钻秆虫等药材后,在神经功能评分、行为学功能评分方面两种治疗方法治疗脑缺血大鼠均有作用,但加味经验方作用更佳(P＜0.05).检测脑组织含水量在梗死周边区的表达Hes5蛋白,指标发现两种治疗方法治疗脑缺血大鼠均有作用,但加味经验方组作用更佳(P＜0.01).结论:头穴丛刺联合补阳还五汤传统组方加入醉魂藤、走马芹、钻秆虫等药材后作用最佳,其作用机制可能是参与影响脑梗死后神经干细胞的增殖、迁移和分化.

目的 通过检测不同温度下家兔尸体玻璃体液内K+、Mg2+浓度随pMI的变化规律,探索应用混合效应模型推断死亡时间(postmortem interval,pMI)的可行性.方法 家兔处死后分别置于5℃、15℃、25℃和35℃温度下保存,在0~120 h内每12 h双眼交替微量提取玻璃体液80~100μL.应用生化免疫分析仪检测玻璃体液中K+、Mg2+的浓度.应用混合效应模型进行分析拟合,建立pMI推断方程.使用放置于10℃、20℃、30℃温度下均经过20、40、65 h的样本检测数据对pMI推断方程进行验证.结果 各温度(y)下家兔玻璃体液中K+、Mg2+浓度[f(x,y)]随pMI(x)延长均呈上升趋势.在5℃~35℃,pMI及温度拟合的K+、Mg2+浓度方程分别为:fK+(x,y)=3.4130+0.3092 x+0.3376 y+0.01083 xy-0.00247 x2(P<0.0001);fMg2+(x,y)=0.7456+0.006432 x+0.0338 y(P<0.0001).经验证,pMI为0~40 h时,K+、Mg2+浓度推断pMI的偏离时间均在10 h以内;pMI为40~65 h时,偏离时间在21 h以内.结论 在5℃~35℃的环境温度区间内,利用混合效应模型拟合的方法可实现利用温度和玻璃体液物质浓度双参数推断pMI,将为解决玻璃体液化学物质在pMI推断中的实际应用提供新方法.

目的 研究氟西汀联合重复经颅磁刺激(rTMS)对急性脑梗死的患者神经缺失功能的恢复及C-反应蛋白(CRP)水平的影响,是否有助于神经功能恢复及降低脑卒中后抑郁(PSD),降低体内炎症水平.方法 将120例首次发生急性脑梗死患者进行分组,分别是对照组、氟西汀组、rTMS组、氟西汀+rTMS组,且每组30例患者,对照组给予空白处理,4组均接受脑血管二级预防治疗.各组干预时间为6周,分别以美国国立卒中研究卫生院量表(NIHSS)、汉密顿抑郁量表(HAMD)、巴塞尔(Barthel)指数评价各组治疗后的神经缺损、认知功能、生活自理能力、抑郁的状态;同时检测各组患者的血清hs-CRP水平变化.结果 经过6周干预之后的NIHSS、HAMD、Barthel指数、血清hs-CRP水平变化可得知,对照组与氟西汀组、rTMS组、氟西汀+rTMS组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);氟西汀组、rTMS组与氟西汀+rTMS组相比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 氟西汀、rTMS均可以改善脑梗死后神经功能缺损、生活自理能力和降低脑卒中后抑郁的发生率,并且能降低体内炎症水平,两者联合治疗优于单个治疗.

目的 研究家兔失血性休克死后129h内肝脏CT影像学的变化与死后经过时间的关系.方法以失血性休克处死家兔,在死后不同时间对家兔进行肝脏螺旋CT扫描,选取第一腰椎层面测定肝组织平均CT值和肝脏面积/腰椎面积.结果肝脏面积/腰椎面积在肝窗上呈现"相对不变一快速减小一缓慢减小"的时间变化,肝脏组织平均CT值呈先上升后下降的总体趋势.将每个参数的测量值进行多项式运算,获得了更能体现2项指标与死亡时间关系的二项式回归方程,均具有高度的统计学意义(P均＜0. 01).结论CT扫描可动态、客观显示家兔死后肝脏的影像学变化,肝脏组织平均CT值变化对早期死亡时间推断更准确,肝脏面积/腰椎面积变化对中晚期死亡时间推断更灵敏.

目的 观察机械性窒息主要征象——瘀点性出血经过高温(烘烤、水煮)作用后的病理学特点及其变化规律.方法 采用扼压颈部以及前位缢型缢死的方式建立家兔机械性窒息死亡动物模型,将处死的家兔随机分为烘烤组和水煮组,每组4只.对烘烤组家兔的喉室及心肺组织进行烘烤3 min、6 min、10 min后,对瘀点性出血部位进行观察并拍照.将水煮组家兔的喉室及心肺组织置于沸水(100℃)中加热,在30 s和60 s时观察并拍照.最后将所有实验家兔的喉室、双肺组织进行组织病理学检验.结果 8只家兔喉室、气管及肺组织瘀点性出血经高温作用后未消失,肉眼可见其颜色加深,与周围正常组织区别明显,易辨别,镜下亦可见出血.结论 机械性窒息所致的瘀点性出血可能与致伤方式、作用力度、作用时间以及个体差异有关,在高温作用后不会消失.

目的 总结分析外院转诊失败皮瓣病例的原因并提出建议.方法 回顾性分析2010年1月至2018年1月78例外院转诊皮瓣失败病例,将坏死原因归纳为3类:①皮瓣移植术后血供障碍造成部分或全部坏死,不包括皮瓣皮缘的坏死,在清创后可直接缝合者21例.②感染造成皮瓣部分坏死,皮瓣术后深部感染再次发生及皮瓣术后窦道形成者46例.③皮瓣设计缺陷造成术后张力过大,皮缘坏死,拆线后再次皮瓣下重要组织外露者11例.针对不同的坏死程度和坏死原因采取不同的处理方法:通过清创后VSD处理并单纯游离皮片修复30例,通过清创换药再次缝合或使用皮肤牵张技术修复20例,再次通过皮瓣修复创面28例.在创面修复后半年随访,评价皮瓣功能及外观.结果 分析皮瓣失败原因,感染病例数远超过血运障碍者;完成皮瓣的医院级别之间差异无统计学意义(P＞0.05),但完成皮瓣修复手术的医师之间差异有统计学意义(P＜0.05);术后1周为坏死高发时间,且半数病例在发现坏死后即进行探查.78例手术次数1～7(3.1±1.9)次.本组有14例经过处理后皮瓣挽救成功,功能全部保留;有15例皮瓣完全坏死,其余43例为皮瓣部分坏死,这58例中有5例采用带蒂皮瓣修复,23例采用任意皮瓣联合游离皮片修复,有6例通过换药瘢痕修复,其余均单纯游离皮片修复.有66例涉及皮瓣周围邻近关节功能及远端肢体功能,创面修复后半年随访,邻近关节功能和远端肢体功能评价,其中上肢18例中优良11例,可6例,差1例;小腿及足踝36例中优良15例,可14例,差7例;足部12例中优良者3例,可6例,差3例.外观评分平均8.7分,属于中度瘢痕化.结论 感染是皮瓣坏死的主要原因;专业显微外科医师进行皮瓣修复手术更有利于降低坏死率;在皮瓣修复失败后转诊来的患者,根据坏死程度和坏死原因,采用不同的修复方法,可获得满意的治疗效果.

目的:探讨应用数字图像分析技术研究死后角膜褶皱时序性变化规律并筛选合适量化指标.方法:兔镒死后随机分为睁眼组和闭眼组,每组 20只,置于 20℃暗室内.于死后 72h内每隔 1 h,使用数码相机采集兔角膜图像,应用 MATLAB软件分割出角膜幢孔区域图像,并提取反映死后角膜皱褶变化的 4项图像纹理特征参数值(CON 、COR 、ASM 、HOM).比较死后睁、闭眼对各参数值随死后经过时间(postmortem interval,PMI)的变化趋势影响,分析各特征参数(y)与 PMI(x)的相关性.结果:不论死后睁眼或闭眼,CON随 PMI呈上升趋势,COR呈下降趋势,但睁眼组 CON 、COR值较闭眼组变化迅速且幅度大;CON 、COR值与 PMI相关性较好(P<0.05),回归方程分别为 y=0.002 4x2-0.026 8x+0.467 3(R2=0.978,睁眼组)、y=0.000 4x2-0.010 6x+0.304 4(R2=0.904,闭眼组),y=-0.000 4x2+0.014 2x+3.893 8(R2=0.938,睁眼组)、y=-3E-05x2+0.001 2x+3.980 8(R2=0.852,闭眼组);ASM 、HOM值与 PMI关系无统计学意义(P>0.05).结论:个体死后角膜褶皱发生时序性变化,纹理特征 CON 、COR与死后经过时间相关性较好.

目的 死亡时间推断是法医病理学实践的重点.运用mRNA定量技术进行死亡时间推断已成为目前研究的热点.在进行mRNA指标挑选时,为了排除其他干扰因素的影响,实验数据必须要经过内参指标的标准化.因此,内参基因的选择对实验结果具有重要影响.方法 SD大鼠颈椎脱臼处死后置于4℃、15℃、25℃、35℃环境温度下,在死后0h、6h、12h、18h、24h五个时间点取骨骼肌组织.利用实时荧光定量PCR技术测定常用内参基因Ct值,并使用三种内参评估软件(geNorm、NormFinder、BestKeeper)综合分析内参稳定性.结论 综合三种内参评估软件结果,在低温条件下,RPS29、RPL13是较合适的内参,而在高温条件下,5SrRNA、18SrRNA是较合适的内参.在35℃时,GAPDH、HPRT、PGK1、UBC、B2M与死亡时间有明显相关性.

目的 利用傅里叶变换红外(Fourier transform infrared,FTIR)显微光谱技术结合化学计量学方法.分析挫伤骨骼肌组织光谱差异性与损伤时间的关系,为损伤时间推断提供新的技术.方法 建立大鼠骨骼肌挫伤模型,于损伤后预设的不同时间点将大鼠处死后,并分别于死后0h和死后24h时损伤处取大鼠骨骼肌组织.应用FTIR显微光谱技术进行数据采集获得原始数据后采用随机森林、支持向量机等化学计量学方法进行运算分析.结果 大鼠骨骼肌组织光谱吸收峰强度随损伤时间延长发生变化;各损伤时间点光谱有聚类趋势.支持向量机构建的判别模型进行4h～24h和28h～48h二分类内部交叉验证准确率达91.7％,外部验证准确率达83.3％;在二分类基础上随机森林对4h～24h内各时间点的内部验证和外部验证平均准确率分别为83.3％、75.0％.经过对死后0h和死后24h样本分析,同一死亡时间的不同损伤时间光谱亦有明显区分.结论 红外光谱结合化学计量学方法可对骨骼肌挫伤组织进行有效分析并建立分类判别模型,对损伤时间推断有参考价值.