目的:研究蜂毒肽Protopolybia-MP Ⅲ及其优化突变体MP Ⅲ-3/4/7/10/14 在体外对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)复制周期不同阶段的抑制活性.方法:通过qPCR技术和多肽分阶段孵育平台,检测蜂毒肽Protopoly-bia-MP Ⅲ及 5 个优化突变体在Vero细胞内对HSV-1 感染的预防作用,以及其对HSV-1 复制周期不同阶段的影响.结果:Protopolybia-MP Ⅲ多肽突变体MP Ⅲ-4/10/14 预处理Vero细胞后去除上清,能限制HSV-1 感染.进一步通过多肽抗病毒作用阶段分析实验,发现野生型多肽Protopolybia-MP Ⅲ主要作用于HSV-1 复制周期的吸附阶段,而MP Ⅲ-3/14 主要作用于病毒复制周期的进入/融合以及进入后阶段,MP Ⅲ-4/7 主要作用于病毒复制周期的吸附以及进入/融合阶段,MP Ⅲ-10 主要作用于病毒复制周期的吸附以及进入后阶段.结论:本工作明确了蜂毒肽Protopolybia-MP Ⅲ及其突变体MP Ⅲ-3/4/7/10/14 对HSV-1 复制周期不同阶段的抑制活性,初步阐明了Protopolybia-MP Ⅲ多肽优化突变体抗病毒活性提高的原因,为胡蜂抗病毒多肽的分子设计和药用研究奠定基础.

目的:了解新型冠状病毒肺炎期间医务人员的心理健康状况，为进一步开展医务人员的心理干预、确保医务人员心理健康提供参考和科学依据。方法:于2020年2月4至16日，采用方便抽样方法，应用《抑郁-焦虑-压力量表》（DASS-21）中的《压力-焦虑亚量表》，通过问卷星调查615名医务人员的心理健康状况。共发放、回收615份问卷，有效问卷615份，有效回收率100%。结果:医务人员心理压力和焦虑情绪的检出率分别为13.82%（85/615）及25.37%（156/615）。31~40岁年龄段、工作于重点科室是医务人员心理压力的危险因素（ OR=1.779、2.127）；女性、经常用肥皂/洗手液/消毒液洗手是心理压力的保护因素（ OR=0.520、0.528）。医务人员工作于定点救治医院、重点科室更容易产生焦虑（ OR=2.042、2.702）；口罩与面部及鼻梁贴合高是医务人员心理焦虑的保护因素（ OR=0.500）。 结论:新型冠状病毒肺炎疫情防控期间，医务人员表现较高的心理压力及焦虑，应早期对医务人员进行心理干预，重点关注男性、31~40岁年龄段、工作于定点救治医院及重点科室的医务人员。

目的:总结接触苯扎氯铵后发生的颗粒状角化不全（GP）的临床表现和组织病理学特征。方法:回顾性分析2022年4 - 8月在武汉市第一医院皮肤科就诊的7例有苯扎氯铵接触史的GP病例，收集患者一般情况、皮损表现、病理检查、治疗和随访信息。结果:7例GP均为成年患者，典型表现为发生在间擦部位的红斑和棕色鳞屑，呈环状分布。7例患者均报告近期接触过含有苯扎氯铵的消毒液。7例患者共收集10份皮损标本，组织病理检查均显示特征性角化过度和角质层内蓝灰色细颗粒状角化不全。停止暴露于苯扎氯铵1个月后皮损均好转。结论:GP具有独特的临床表现和组织病理学表现，苯扎氯铵暴露史有助于诊断GP。

严重过敏反应是急性全身过敏反应最严重的临床表现，近年来发病率有所增高，因此有必要继续传播该疾病的诊治和管理知识，以使每位医疗保健专业人员都具备相应急救知识技能。本版指导意见与当前最新的严重过敏反应诊治信息保持一致，从定义、诊断标准、严重度分级、诱因和协同因素及治疗管理等方面进行阐述，强调肾上腺素肌内注射仍是严重过敏反应的一线治疗措施，在严重过敏反应发生后，患者应转诊至专科医师来评估潜在诱因，并接受健康教育以预防复发和进行疾病自我管理。

目的:建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法:以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63，以离心力135 000× g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒，并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID 50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测，评价病毒富集效果；通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。 结果:经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理，两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高( P<0.001)。超速离心方法富集前后，电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态；4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍，PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍，经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法( P<0.05)；8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h( P<0.05)，但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒；离心力为135 000× g时，选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。

目的:构建大鼠RNAi-腺苷A2a受体(A2aR)慢病毒载体并进行鉴定。方法:首先构建3对短发夹RNA(shRNA)-A2aR序列(shRNA-A2aR 1、shRNA-A2aR 2、shRNA-A2aR 3)，在shRNA慢病毒载体中分别插入3对双链shRNA oligo，shRNA慢病毒重组质粒构建成功后，将重组质粒、包装载体、穿梭载体共转染293T细胞，从而获得病毒液。实验Ⅰ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为3组( n＝6)：空载组(V组)、shRNA-A2aR 1组和shRNA-A2aR 3组，各组分别转染MOI为10的相应病毒液，转染48 h时，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率，以筛选最佳慢病毒载体。实验Ⅱ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为5组( n＝36)：空载组(V组)、MOI5组、MOI10组、MOI15组和MOI20组，各组分别转染相应MOI的病毒液(最佳慢病毒载体)，于转染24、48和72 h时，采用CCK-8法测定细胞存活率，荧光显微镜下观察细胞活力和细胞死亡情况，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率。 结果:实验Ⅰ　成功构建了2种shRNA-A2aR慢病毒载体(shRNA-A2aR 1、3)。shRNA-A2aR 3病毒液滴度为3.5×10 8 TU/ml。与V组和shRNA-A2aR 1组比较，shRNA-A2aR 3组心肌细胞A2aR表达下调( P<0.01)，shRNA-A2aR 3慢病毒载体干扰效率73%。实验Ⅱ　选择shRNA-A2aR 3慢病毒载体转染24 h时，各组细胞存活率均>85%；转染48 h时，MOI5组和MOI10组细胞存活率>80%；转染72 h各组细胞存活率<70%。倒置荧光显微镜下可见，MOI5组荧光密度稍低，MOI10组转染48 h及MOI20组转染24 h时，荧光密度较高且细胞状态较好；转染72 h时各组心肌细胞活力明显下降、死亡细胞增加。Western blot显示：MOI10组转染48 h、MOI15组转染48 h、MOI20组转染24和48 h时干扰效率均>70%。 结论:成功构建了大鼠shRNA-A2aR慢病毒载体，且MOI为10、转染48 h或MOI为20、转染24 h为最佳转染方案。

目的:构建早老蛋白增强子2（PSENEN）基因沉默的人永生化角质形成细胞（HaCaT）模型，探究PSENEN基因表达下调对HaCaT细胞增殖以及γ分泌酶表达的影响。方法:设计3组靶向PSENEN基因的shRNA序列，与线性化的LV3-pGLV-h1-GFP-puro载体构建慢病毒重组表达质粒，经酶切及测序鉴定后，进行慢病毒的包装、纯化和滴度测定。将HaCaT细胞分为5组进行转染：shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组分别加入含沉默PSENEN基因的shRNA1、shRNA2、shRNA3慢病毒原液，NC组加入含阴性对照shNC慢病毒原液，空白组不加病毒液。转染完成后，荧光显微镜下观察荧光表达，流式细胞仪检测转染效率。CCK8法测定HaCaT细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（qPCR）、Western印迹法分别检测PSENEN、呆蛋白（NCT）、早老蛋白1（PS1）、前咽缺陷蛋白1a（APH1a）mRNA、蛋白的相对表达量。统计分析采用重复测量方差分析、单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:倒置荧光显微镜下观察到shRNA1~shRNA3组、NC组均有荧光表达，流式细胞仪示转染效率均达98%以上。qPCR、Western印迹法显示，与NC组（1.054 ± 0.272、1.076 ± 0.075）相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组PSENEN mRNA（0.187 ± 0.010、0.163 ± 0.022、0.174 ± 0.009）、蛋白（0.219 ± 0.097、0.208 ± 0.014、0.185 ± 0.062）表达均显著降低（均 P < 0.001）。CCK8法显示，与NC组相比，shRNA1组细胞增殖活性在0、12、36、48 h均显著增高（均 P < 0.05），24和60 h差异无统计学意义（均 P > 0.05）；shRNA2、shRNA3组在0、12、24、36、48、60 h细胞增殖水平均显著高于NC组（均 P < 0.05）。shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组、NC组、空白组间NCT、PS1、APH1a基因mRNA表达差异无统计学意义（ F值分别为8.168、4.644、1.981，均 P > 0.05），mNCT、imNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白相对表达差异有统计学意义（ F值分别为39.268、5.929、27.842、20.663，均 P ≤ 0.01）。与NC组相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组mNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白表达均显著降低（均 P < 0.01），imNCT蛋白表达变化无统计学意义（均 P > 0.05）。 结论:成功构建了PSENEN基因沉默的HaCaT细胞模型，PSENEN基因沉默会引起HaCaT细胞增殖活性增强，γ分泌酶其他亚基蛋白含量下降。

目的:探讨2种皮肤消毒剂2%葡萄糖酸氯己定醇溶液与0.5%碘伏消毒液对免疫功能低下患者的中心静脉导管（CVC）维护的效果。方法:选取2016年1月1日至2017年8月31日于北京大学人民医院血液科层流病房接受治疗的患者180例为研究对象。按照随机数字表法分为试验组和对照组各90例。试验组采用2%葡萄糖酸氯己定醇皮肤消毒剂维护CVC，对照组采用0.5%碘伏消毒液维护CVC。每周换药1次，连续维护3周，根据导管处伤口情况换药，并记录每次换药原因及每次换药所需时间，分析2组患者的导管维护时间、换药原因、换药间隔天数及导管伤口不良反应发生情况。结果:试验组的皮肤待干时间和护士换药时间分别为（0.62 ± 0.10）、（11.67 ± 0.33）分钟，对照组分别为（1.97 ± 0.18）、（14.48 ± 0.33）分钟，2组比较差异有统计学意义（ t值为63.044、57.296， P<0.01），2组在换药间隔天数、CVC导管伤口不良反应发生情况方面比较差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:2%葡萄糖酸氯己定醇与0.5%碘伏消毒液在免疫功能低下患者CVC导管维护中均有良好的皮肤消毒效果，并且使用2%葡萄糖酸氯己定醇的皮肤待干时间更短、护士换药时间更短，有利于提高护理工作效率，值得在临床护理工作中推广。

目的:构建携带过表达miR181a的慢病毒载体，转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSC)，使基因修饰后的BMSC持续高水平表达miR181a。方法:将miR181a质粒与三种助转质粒PRSV，PRRE，VSVG共同转染进293T细胞中，构建含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFP)的过表达miR181a的慢病毒表达载体。72 h后收获过表达miR181a的病毒液，转染BMSC。用嘌呤霉素筛选，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，即miR181a-BMSC。结果:成功构建出携带miR181a的慢病毒载体，转染率超过95%。嘌呤霉素筛选BMSC，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，与BMSC组相比，miR181a-BMSC组中，miR181a的表达量明显增多，差异具有统计学意义(3.80比25.92， t＝19.401， P<0.05)。提取BMSC和miR181a-BMSC的外泌体，纯化后miR181a-BMSC的外泌体内miR181a表达量明显增高，差异具有统计学意义(1.41比0.87， t＝6.003， P<0.05)。 结论:成功构建出慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞。

目的:了解我国县级医院支气管镜资源配置及技术应用现状。方法:一项横断面调查。2021年3—8月，根据地区生产总值、县域数量分层抽样，从中国各省中抽样12个省级行政区，共抽查291家县级医院，调查支气管镜技术在县级医院的开展情况。在每个省级行政区常规开展支气管镜技术的县级医院中用计算机随机抽样2家，调查这24家医院的支气管镜资源配备、技术应用、洗消及麻醉等现状。组间比较采用独立样本 t检验或两相关样本非参数检验。采用Spearman相关分析探索相关性。双侧 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:根据抽样结果估算，每个省级行政区常规开展支气管镜技术的县级医院数量占县级医院总数的比例是11.4%（9.9%，13.8%），与省级行政区内人口数（ r=0.64， P=0.025）、地区生产总值（ r=0.65， P=0.025）显著相关。接受问卷调查的24家县级医院每家配备（1.6±1.0）条支气管镜，配备电子支气管镜、纤维支气管镜的医院数量分别为22家（91.7%）、6家（25.0%）。6家（25.0%）医院每个工作日进行支气管镜操作，12家（50.2%）医院有相对固定的医生及护士。全部操作医生接受过专项培训。2020年每家医院支气管镜检查例数较2019年显著增加［140（70，335）比100（29，254）， P=0.001］。全部医院采用符合标准的洗消槽、清洗剂和消毒液。24家医院采用表面麻醉，10家（41.7%）医院开展表面麻醉联合镇静镇痛。2家（8.3%）医院仍在使用阿托品减少气道分泌物。 结论:支气管镜技术在县级医院普及情况距离国家卫生计生委员会有关标准的差距大，存在区域间的不平衡。支气管镜操作医师均接受规范培训、洗消工作符合要求，但部分医院辅助用药不规范、未按指南常规给予镇静剂。应加强县级医院支气管镜技术开展及相关资源的配置，规范操作流程。