目的:基于网络药理学与实验验证探讨玉肤解毒膏治疗卡培他滨所致手足综合征(HFS)的作用机制.方法:采用高效液相色谱仪鉴定玉肤解毒膏化学成分;通过TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction数据库筛选玉肤解毒膏活性成分及作用靶点;通过String平台进行蛋白互作网络分析;GeneCards数据库筛选HFS相关靶点;使用Metascape数据库对交集靶点进行基因本体(GO)富集功能分析、京都基因与基因百科组全书(KEGG)通路富集分析;运用AutoDocktools软件对活性成分及核心靶点进行分子对接验证.构建HFS大鼠模型,通过蛋白免疫印迹法检测比较玉肤解毒膏和尿素软膏对HFS大鼠足跖部皮肤中组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平的影响.结果:共筛选得到玉肤解毒膏活性成分97个,成分作用靶点304个,与HFS交集靶点45个.关键靶点主要富集在Toll样受体信号通路、中性粒细胞胞外陷阱形成、Rap1通路等信号通路.活性成分龙血素A、漆黄素、乔松素、紫檀芪、芫花素与核心靶点HDAC6、组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、组织蛋白酶D(CTSD)具有较好的结合活性和稳定性.玉肤解毒膏可显著降低HFS大鼠足跖部皮肤中HDAC6、TLR4蛋白表达水平.结论:玉肤解毒膏可能通过调控HDAC6、TLR4表达而降低神经炎症反应,发挥治疗HFS的作用.

目的:探究疏肝解郁安神方治疗冠心病合并抑郁状态的作用机制.方法:纳入 2021 年 10 月—2022 年 1 月于河南中医药大学第一附属医院心内科住院治疗的冠心病合并抑郁状态病人,采用随机数字表法分为治疗组 9 例(疏肝解郁安神方+西医常规治疗+心理疏导治疗),对照组 8例(西医常规治疗+心理疏导治疗),疗程为 1周.利用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)检测两组病人治疗前后的血清代谢物,筛选潜在的差异代谢物,预测与疏肝解郁安神方治疗冠心病合并抑郁状态相关的代谢通路.结果:冠心病合并抑郁状态病人具有相似的代谢谱特征;通过二级质谱分析,最终共得到 26个二级差异代谢物.与干预前冠心病合并抑郁状态病人代谢谱相比,疏肝解郁安神方干预后,黄芩苷、漆黄素、N5-L-1-羧乙基-L-鸟氨酸、5-羟色胺、乌头酸盐、半胱氨酸硫酸酯、5-2-羟乙基-4-甲基噻唑 7个代谢物在中药干预后表达水平上调;N-[(3a,5b,7a)-3-羟基-24-氧代-7-(亚砜基)胆聚糖-24-基]-甘氨酸、L-赤霉素、十一烷酸、瓜氨酸、壬酸、氧化苯乙烯 6个代谢物在中药干预后表达水平下调;同时对获得的 26 个二级差异代谢物进行京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,最终富集到 46 条代谢通路,富集度最为显著的 4 条通路分别为环磷酸腺苷信号通路、柠檬酸循环、胆汁分泌、5-羟色胺能突触通路.结论:本研究利用代谢组学技术揭示了疾病和中药复方干预后机体内代谢产物变化,从代谢终端产物层面阐述了疏肝解郁安神方治疗冠心病合并抑郁状态的作用机制,为后续试验的开展和新药的研发提供了一定的参考依据.

目的 探究漆黄素(Fisetin)对地卓西平马来酸盐(MK-801)诱导的精神分裂症模型大鼠认知功能损伤的影响.方法 将24只SD大鼠随机分为3组:精神分裂症模型组(SZ组)、漆黄素干预组(Fisetin组)、空白对照组(Control组),每组8只,并利用MK-801处理SZ组和Fisetin组,建立精神分裂症模型.建模完成后,对Fisetin组大鼠腹腔注射漆黄素(20 mg·kg-1·d-1),SZ组和Control组大鼠腹腔注射等体积二甲亚砜,连续14 d.利用Morris水迷宫实验对大鼠的学习、记忆功能进行评估;Western-blot检测大鼠海马区钙/钙调素依赖激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的表达及磷酸化水平.结果 Morris水迷宫实验结果显示,相较于Control组,SZ组的逃避潜伏期显著延长(P＜0.05),空间探索时间显著缩短(P＜0.01),穿越原安全平台所在位置次数显著减少(P＜0.01);相较于SZ组,Fisetin组逃避潜伏期显著缩短(P＜0.05),空间探索时间显著延长(P＜0.05),穿越原安全平台所在位置次数显著增加(P＜0.05).蛋白表达方面,3组大鼠海马组织中CaMKI、ERK1/2、CREB的表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);与Control组相比,SZ组CaMK Ⅱ、ERK1/2、CREB 的磷酸化水平显著降低(P＜0.05 或 P＜0.01);与 SZ 组相比,Fisetin 组 CaMKI、ERK1/2、CREB的磷酸化水平显著升高(P＜0.01).结论 漆黄素可缓解MK-801诱导的精神分裂症模型大鼠的认知功能损伤,其机制可能与提高CaMKⅡ、ERK1/2、CREB的磷酸化水平有关.

目的 分析漆黄素对大鼠静脉血栓形成的影响.方法 70只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及45、15、5 mg/kg漆黄素组和阿司匹林组(47 mg/kg),分别每天1次灌胃相应药物(假手术组和模型组分别给予5 g/L羧甲基纤维素钠溶液10 mL/kg),连续7 d.末次给药1 h后,麻醉大鼠,用丝线结扎下腔静脉和左肾静脉交叉下方部位(假手术组不结扎),缝合腹壁.2 h后重新打开腹腔,用动脉夹封闭距结扎处1.5 cm外的其他静脉分支,腹主动脉采血(以38 g/L枸橼酸钠:全血为1∶9抗凝);采血后剪取下腔静脉和左肾静脉交叉结扎点远心端1 cm静脉血栓,分离血栓,用滤纸吸干残血,称重并记录.抗凝血离心后取血浆,按ELISA试剂盒检测血浆抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、蛋白酶C(PC)、纤溶酶原(PLG)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量.结果 与模型组相比,45 mg/kg漆黄素组和阿司匹林47 mg/kg组血栓质量降低(P＜0.01);漆黄素3个剂量组AT-Ⅲ含量升高(均P＜0.05);45 mg/kg漆黄素组PC含量升高,而PLG和PAI-1含量均降低(均P＜0.05).结论 漆黄素具有体内抗静脉血栓形成的作用,其作用与AT-Ⅲ和PC上调,PLG和PAI-1下调有关.

目的 评价抗寄生虫中药水提物和有机溶剂粗提物体外对细粒棘球蚴的作用效果.方法 从感染绵羊肝脏细粒棘球蚴包囊中分离原头节,体外培养24h后,取活性大于95％的原头节(100 μl,约100个)加入96孔板,分别加入终浓度为0.8 mg/ml(低浓度组)、1.6 mg/ml(中浓度组)、3.2 mg/ml(高浓度组)的鸦胆子、苦楝皮、辣蓼、石榴皮、使君子、槟榔、贯众、鱼藤、马蔺子、五倍子和仙鹤草等11种抗寄生虫中药的水提物,体外作用72 h后,伊红染色法检测原头节活性,倒置显微镜观察下观察原头节的形态,计算死亡率;同时设相同浓度的阿苯达唑组和空白对照组.从具有体外抗原头节作用的中药中提取黄酮、多糖、皂苷和生物碱等粗提物,分别以终浓度1.00 mg/ml体外作用于原头节72 h后,观察原头节形态,计算死亡率;同时设空白对照组.对体外抗原头节效果明显的粗提物进行液相色谱与串联质谱联用分析.组间比较采用单因素ANOVA分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 中药水提物作用72h后,鸦胆子、苦楝皮、辣蓼水提物高浓度组原头节边缘模糊,结构松散,基质溶解;其余8种中药水提物高浓度组原头节形态正常,各部分结构清晰;阿苯达唑组原头节生发层有轻微损伤;空白对照组原头节形态正常.体外培养72 h后,鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物高浓度组原头节的死亡率分别为(99.63±0.57)％、(90.89±1.10)％和(51.93±0.60)％,中浓度组分别为(85.97±1.50)％、(81.14±1.19)％、(42.46±0.56)％,低浓度组分别为(78.34±1.35)％、(77.27±0.92)％、(36.66±0.60)％,与空白对照组[(0.62±0.51)％]相比差异均有统计学意义(F=180 678.22、41 488.99、44 346.38,19 543.86、27 887.32、34 590.79,20 059.467、41 953.68、17 993.77,均 P＜0.01),与阿苯达唑组[(30.03±2.02)％]比较差异均有统计学意义(F=6 585.72、4 210.84、646.46,2 956.80、2 849.68、210.83,2 365.92、2 712.28、58.12,均 P＜0.01);其余8种中药水提物高、中、低浓度组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷、辣蓼皂苷和辣蓼生物碱组原头节皱缩、结构松散、基质溶解,原头节死亡率分别为(98.33±2.89)％、(96.67±5.77)％、100％、(99.33±1.15)％和(56.67±2.11)％,与空白对照组[(10.33±2.51)％]比较差异均有统计学意义(F=1 584.00、563.71、3 808.47、3 099.52、14.65,均P＜0.01);其余中药粗提物组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).液相色谱与串联质谱联用分析结果显示,正、负离子模式下分别鉴定出741、398种代谢产物,其中正离子模式下从鸦胆子黄酮粗提物中鉴定出差异显著的黄酮类化合物4种,分别为漆黄素、5-甲基-7-甲氧基异黄酮、儿茶素和甜橙黄酮;负离子模式下鉴定出8种,分别为原花青素B2、槲皮素-3β-D-葡萄糖苷、枸桔苷、橙皮素、槲皮素、木犀草素、芹菜素和黄豆黄素.结论 鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物,鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷和辣蓼皂苷有明显体外抗细粒棘球蚴的作用,且效果优于阿苯达唑.

目的 制备漆黄素固体脂质纳米粒(FIT-SLN),对其进行质量评价并考察其体外释放作用.方法 采用乳化蒸发-低温固化法制备FIT-SLN,利用Box-Behnken设计试验优化处方工艺,并制成冻干粉末.考察其外观、粒径、Zeta电位,并通过差示量热扫描仪判断药物在FIT-SLN冻干粉中的存在状态,透析袋法评价制剂在不同介质中的体外释放行为.结果 FIT-SLN的最佳制备工艺:漆黄素用量3 mg、吐温80用量115μL、双硬脂酸甘油酯(Precirol ATO 5)用量30 mg、卵磷脂用量30 mg.所得FIT-SLN的粒径、Zeta电位、包封率分别为(124.53±2.00)nm、(-21.33±1.69)mV、77.89％,体外释放规律与一级动力学方程相符.结论 成功制备粒径小、包封率高的FIT-SLN,其具有一定的缓释能力.

目的 探讨漆黄素对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响.方法 将50 只雌性SD大鼠采取双侧卵巢切除法构建骨质疏松症模型,分为模型组、漆黄素10、20、40 mg/kg组及阳性对照组,每组 10 只.漆黄素组给予不同浓度漆黄素干预,阳性对照组给予雌二醇(E2)干预,连续8 周.另选10 只大鼠作为假手术组.检测各组大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、E2、Ⅰ型胶原羧基 C 端交联肽(CTX-Ⅰ)、骨 γ-羧基谷氨酸蛋白(BGP)以及骨密度(BMD),HE染色观察骨组织形态学,采用Micro-CT测定骨指标[骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁数目(Tb.N)],采用生物力学材料实验机检测骨生物力学参数(股骨颈加载力、胫骨轴强度、腰椎压缩力),Western-blot 检测 Runt 相关转录因子 2(Runx2)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5(Lrp-5)、β-联蛋白(β-catenin)和成骨细胞特异性转录因子Osterix(Osx)表达水平.结果 与假手术组比较,模型组ALP、OCN、Tb.Sp、CTX-Ⅰ显著升高,E2、BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BGP、股骨颈加载力、胫骨轴强度、腰椎压缩力、Runx2、Lrp-5、β-catenin、Osx水平显著降低(P＜0.05);HE染色显示股骨骨小梁排列疏松、网状结构破坏、小梁数减少且断裂点增多.与模型组比较,漆黄素40 mg/kg组及阳性对照组ALP、OCN、Tb.Sp、CTX-Ⅰ显著降低,E2、BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BGP、股骨颈加载力、胫骨轴强度、腰椎压缩力、Runx2、Lrp-5、β-catenin、Osx水平显著升高(P＜0.05);HE染色显示股骨骨小梁排列及网状结构明显恢复,有较高的骨连接.结论 漆黄素可提高去势骨质疏松大鼠骨应力,其作用机制可能与促进Wnt/β-catenin蛋白通路、降低大鼠体内高骨转换速率有关.

肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期表现.研究表明,黄酮类成分具有抗肺纤维化的作用,其中二氢杨梅素、桑色素、漆黄素等可通过抑制成纤维细胞分化,阿尔泰金莲花总黄酮、橘皮苷、蒙花苷等可通过发挥抗炎作用,黄芩总黄酮、黄芩苷、白杨素等可通过抑制上皮-间充质转化,荔枝核总黄酮、地奥司明、水飞蓟宾等可通过抑制氧化应激,槲皮素、黄芩苷、芹菜素等可通过调控自噬,镰形棘豆总黄酮、毛蕊异黄酮、二氢槲皮素等可通过调控细胞凋亡过程,柚皮素、黄芩苷、香草兰总黄酮等可通过抑制细胞焦亡等多种途径,发挥抗肺纤维化的作用.

肺纤维化是一种慢性、进行性、不可逆的间质性肺疾病,目前尚无治疗肺纤维化的特效药.许多中药单体表现出对肺纤维化具有潜在的治疗价值,其中以黄酮类化合物为主要代表.黄芪总黄酮、灯盏花乙素等可通过干预转化生长因子-β/果蝇MAD蛋白信号通路减轻炎症细胞浸润,减轻肺损伤和细胞外基质(ECM)沉积;镰形棘豆总黄酮、红景天苷可通过介导JAK/信号转导及转录激活因子信号通路抑制肺组织炎症反应,阻止上皮间质转化(EMT)进程;槲皮素、银杏叶提取物等可通过抑制核因子κB信号通路来减少巨噬细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用;漆黄素、原花青素可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路,促使肌成纤维细胞形态学恢复,减少ECM沉积;柚皮素、木犀草素可通过NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信号通路抑制巨噬细胞焦亡和炎症反应,改善肺功能及肺组织损伤;余甘子醇提物、毛蕊异黄酮可通过激活核转录因子红系2相关因子2/抗氧化响应元件信号通路,改善肺组织炎症损伤和纤维化;异甘草素则可通过抑制胞外信号调节激酶信号通路阻止上皮细胞表型转化,逆转EMT进展.后续学者可考虑开发适当的药物载体,提高其生物利用度,深入研究药物的作用靶点和途径,为黄酮类中药单体走向临床实践提供依据.

目的 探究漆黄素通过激活沉默信息调节因子 1(SIRT1)/核因子E2 相关因子 2(Nrf2)信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠铁死亡的影响.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组以及漆黄素 1、2、4 mg/kg组和漆黄素(4 mg/kg)+SIRT1 抑制剂(10 mg/kg EX-527)组,每组各 14 只.漆黄素、SIRT1 抑制剂于造模前 30 min ip给药,对照组、模型组ip给予等量生理盐水.除对照组外,其余各组大鼠均采用气管内滴注脂多糖法建立急性呼吸窘迫综合征模型.检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;测定肺组织湿/干质量比(W/D);HE染色观察肺组织病理改变;检测肺组织中铁死亡相关指标活性氧(ROS)、铁、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平;免疫印迹法检测肺组织中SIRT1/Nrf2 信号通路相关蛋白表达.结果 与模型组比较,漆黄素各剂量组BALF中IL-6、TNF-α水平降低,肺组织W/D比值降低,肺组织中ROS、铁、MDA水平降低,GSH水平升高,肺组织中SIRT1、核Nrf2 蛋白水平升高(P<0.05),且 4 mg/kg漆黄素干预的改善效果更显著;在 4 mg/kg漆黄素干预的基础上增加SIRT1 抑制剂后,漆黄素的改善作用被削弱.结论 漆黄素对脂多糖诱导的急性呼吸窘迫综合征有保护作用,能够改善铁死亡,可能是通过激活SIRT1/Nrf2 信号通路实现的.