目的:探讨长期节食状态下大鼠体内胆汁酸的变化及其机制。方法:20只健康雄性Wistar大鼠分为对照组和节食组，每组10只。对照组大鼠正常量饮食，节食组大鼠给予正常饮食量的50%饲养，12周后麻醉，采集各组大鼠血清、胆汁、肝脏和回肠组织样本，分离腹部脂肪称重，并计算腹部脂肪/体重比。计算胆汁流速。采用试剂盒和高效液相色谱串联质谱法测定各样本中总胆汁酸（TBA）及β-鼠胆酸（β-MCA）、牛磺β-鼠胆酸（Tβ-MCA）、胆酸（CA）、牛磺胆酸（TCA）、甘氨胆酸（GCA）、鹅去氧胆酸（CDCA）、甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）、去氧胆酸（DCA）、牛磺去氧胆酸（TDCA）、甘氨去氧胆酸（GDCA）、石胆酸（LCA）、甘氨石胆酸（GLCA）、牛磺猪去氧胆酸（THDCA）、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、甘氨熊去氧胆酸（GUDCA）的浓度，采用实时荧光定量聚合酶链反应测定肝脏和回肠组织法尼醇X受体（Fxr）“肠-肝轴”通路上胆汁酸相关核受体、代谢酶和转运体小异二聚体伴侣（ Shp） 、成纤维细胞生长因子15（ Fgf15） 、胆固醇7α-羟化酶（ Cyp7a1）、甾醇12α-羟化酶（ Cyp8b1） 、胆酸盐输出泵（ Bsep） 、多药耐药相关蛋白2（ Mrp2） 、Na +依赖性胆酸盐转运体（ Asbt）等的mRNA表达量。组间比较采用 t检验。 结果:与对照组相比，节食组大鼠体重与腹部脂肪/体重比均显著降低（ P<0.01）；血清TBA水平以及胆汁流速和胆汁酸经胆汁排泄量显著升高（ P<0.05）；肝组织中β-MCA、CA、GCA、CDCA、GCDCA、DCA、GDCA、LCA、GLCA、TUDCA和GUDCA的浓度显著升高（ P<0.05），而TCA、TDCA和THDCA的浓度显著降低（ P<0.05）；回肠组织中Tβ-MCA、TCA、DCA和TDCA浓度均显著降低（ P<0.05）；肝脏中次级胆汁酸和非结合型胆汁酸浓度明显增高（ P<0.05），回肠中结合型胆汁酸浓度显著降低（ P<0.05）。与对照组比较，节食组大鼠回肠和肝脏部位 Fgf15基因表达量均显著降低，回肠 Asbt基因表达量显著上调，肝脏中 Shp和 Cyp7a1的mRNA表达水平均显著上调，而 Cyp8b1的mRNA表达量显著降低（均 P<0.05）。 结论:节食大鼠饮食结构的改变促使体内胆汁酸呈现明显的特征性变化，究其机制可能与Fxr“肠-肝轴”的适应性调控有关。

目的 建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)法同时测定牛黄上清片中牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-羟基胆烷酸、甘氨猪去氧胆酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、牛磺鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸的含量.方法 分析采用 Thermo Fisher Scientfic Bremen HYPERSIL GOLD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9 μm);流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温 40℃;加热电喷雾离子源;负离子扫描;平行反应监测模式.再进行化学模式识别.结果 18 种胆汁酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率 96.73%～104.07%,RSD 2.10%～4.07%.不同厂家样品中各胆汁酸在种类和含量上存在一定差异.结论 该方法灵敏可靠,专属性好,可用于牛黄上清片的质量控制.

目的 建立同时测定八宝惊风散中人工牛黄有效成分(胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠)含量的方法,比较不同厂家样品中3个成分的含量差异.方法 采用超高效液相串联质谱法测定3个厂家9批八宝惊风散中胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠的含量,色谱柱为Phenomenex Luna? C18,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.5 mL/min,柱温为40℃,进样量为2 μL.质谱采用负离子单四极杆模式,胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠的m/z分别为407.2、392.2、514.2.以3个成分的含量为指标,对9批样品进行聚类分析和主成分分析.结果 胆酸、猪去氧胆酸和牛磺胆酸钠的线性范围分别为5.48～548.40、5.38～538.40、4.74～474.05 ng/mL(r≥0.9993);精密度、重复性、稳定性(24 h)的RSD均不高于3.7%(n=6),平均回收率分别为103.3%、103.3%、101.6%,RSD分别为3.3%、3.4%、4.2%(n=6).9批样品中胆酸、猪去氧胆酸、牛磺胆酸钠的含量分别为0.702～1.711、0.599～2.049、0.664～1.752 mg/g.A厂家样品中3个成分的平均含量较高,批间差异最小;C厂家样品中3个成分的平均含量最低,批间差异较大.聚类分析基本可以区分不同厂家的样品;以主成分综合得分为指标进行聚类分析,结果与含量聚类分析结果基本一致.结论 成功建立了同时测定八宝惊风散中人工牛黄3个胆汁酸类有效成分含量的方法.各厂家样品中3个成分的含量存在较大差异.

目的 精制清开灵(JZQKL)是干预缺血性中风的有效药物组合.本研究旨在阐述胆酸类成分与栀子苷在神经保护方面的药物相互作用效果及机制,以优化JZQKL配方,筛选最佳组合.方法 本文研究了栀子苷与胆酸类成分组合在OGD-Rep模型下的SH-SY5Y细胞的影响,通过CCK-8测定细胞活性.结果 低剂量0.5μg/mL HDCA与栀子苷合用后,基本未影响细胞活性,而5、50μg/mL与栀子苷合用后则表现细胞活性下降趋势;CA与HDCA的表现类似.而TUDCA 0.5、5μg/mL与栀子苷合用时细胞活力较高,Gen+TUDCA组合较单纯Gen略高,差异无统计学意义.当TUDCA剂量增大时,达到50μg/mL时,会减弱Gen对细胞的保护作用,增加对细胞的损伤.结论栀子苷与TUDCA合用能够发挥最佳的神经保护作用,栀子苷与TUDCA组合初步订为20:1.

目的:建立牛黄及代用品中胆汁酸类成分的指纹图谱,并对甘氨胆酸、牛磺胆酸、胆酸和去氧胆酸进行定量研究.方法:采用HPLC-ELSD联用技术,使用SymmetryshieldTM C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以乙腈为流动相A,以0.2％甲酸水溶液(含10 mmol· L-1醋酸铵)为流动相B,梯度洗脱(0～5 min,2％A→35％A;5～12 min,35％A→37％A;12～23 min,37％A;23～45 min,37％A→50％A),流速1.0 mL· min-1,ELSD漂移管温度102℃,氮气1.9 mL· min-1,进行指纹图谱分析和上述甘氨胆酸等4个成分的含量测定;采用电喷雾离子源进行正离子模式扫描,对牛黄指纹图谱中8个特征峰进行指认;并利用Chrompattern软件对测试所得到的色谱数据进行主成分分析,利用国家药典委员会相似度评价软件进行相似度评价.结果:建立了牛黄及代用品的HPLC-ELSD指纹图谱,并指认了甘氨胆酸、牛磺胆酸、胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆酸8个特征峰;牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄中胆汁酸类成分基本相同,但含量存在差异;指纹图谱经相似度和主成分分析,均可用于区分牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄.结论:本法可为牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄的质量控制提供有效的技术支持.

目的:研究新复方珍珠膏的质量控制方法.方法:新复方珍珠膏中猪胆粉的薄层色谱(TLC)以胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸为对照品,异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10∶5∶5∶3∶1)的上层溶液为展开剂进行鉴别.新复方珍珠膏中猪胆粉的牛磺猪去氧胆酸含量以高效液相色谱法(HPLC)进行测定:采用LC-20AT岛津高效液相色谱仪,SPD-20A检测器;色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6mm×250mm);流动相为乙腈-0.03 mol·L-1磷酸二氢钠(磷酸调pH=4.4),梯度洗脱,检测波长200 nm,体积流量1.0 mL·min-1,进样量10 μL,柱温25℃.结果:薄层色谱中猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆酸分离良好.牛磺猪去氧胆酸在0.095 2～1.904 0tg范围内线性关系艮好(r=0.999 9),方法回收率为99.45％,RSD=2.41％(n=6).结论:对新复方珍珠膏中猪胆粉的鉴别及含量测定方法简便合理,可用于新复方珍珠膏的质量控制.

目的 研究胆南星Arisaema cum bile的化学成分.方法 胆南星氯仿提取物采用硅胶、ODS、MCI进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到10个化合物,分别鉴定为胆固醇(1)、6-氧代-甘氨猪去氧胆酸甲酯(2)、鹅去氧胆酸甲酯(3)、猪去氧胆酸甲酯(4)、鹅去氧胆酸(5)、猪去氧胆酸(6)、甘氨猪去氧胆酸甲酯(7)、胆酸(8)、甘氨猪去氧胆酸、(9)牛磺鹅去氧胆酸(10).结论 所有化合物均为首次从胆南星中分离得到.

目的 建立复方珍珠膏中猪胆粉和冰片的质量控制方法.方法 HPLC:色谱柱为Acclaim 120 C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm) ;流动相为乙腈-0.03 mol·L-1磷酸二氢钠, 梯度洗脱;检测波长200 nm;体积流量1.0 mL·min-1;进样量10μL;柱温25℃.GC:FDI检测器;色谱柱为Agilent-DB-Wax GC (0.32 mm×30 m, 0.25μm) ;载气为高纯氮气, 流速1 mL·min-1;氢气流速40 mL·min-1;空气流速300 mL·min-1;尾吹流量300 mL·min-1;进样口温度180℃;柱温140℃, 保持时间20 min;检测器温度250℃;分流比50:1;进样量1μL.结果 HPLC中, 牛磺猪去氧胆酸在0.01～0.2 mg·mL-1内与峰面积线性关系良好 (r=0.9991), 方法的回收率在95％～105％, RSD <5％ (n=3) ;GC中, 龙脑在0.02～0.6 mg·mL-1内与峰面积线性关系良好 (r=0.9990), 方法的回收率在95％～105％, RSD<5％ (n=3) .结论 建立的方法简便合理, 可用于复方珍珠膏中猪胆粉和冰片的质量控制.

目的:建立HPLC法测定护肝片中(R,S)-告依春、绿原酸、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷a、五味子醇甲、柴胡皂苷d、牡荆素、牛磺猪去氧胆酸、五味子甲素、五味子乙素等10种成分的含量.方法:利用Agilent Zorbax SB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:含0.1％甲酸的乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(B),梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;测定波长:254 nm;进样量:10 μL.结果:在考察浓度范围内10种成分的线性关系良好(R2＞0.999);日内、日间精密度的RSD值均≤1.11％;制备后24 h内各成分色谱峰面积RSD＜ 1.52％;重复性试验结果显示,各成分含量RSD值均＜1.52％.加样回收率试验结果显示,各成分平均加样回收率为97.22％～ 99.28％,RSD均≤2.42％.所测成分中,五味子醇甲含量最高(0.690 mg/片)、牡荆素含量最低(0.012 mg/片),各成分在各批次护肝片中的含量差异较小.结论:该方法准确、可靠、可重复,可用于护肝片的质量控制及后续质量标准的再提高.

目的 探讨猪牙皂皂苷与化疗药物索拉非尼联用的抗肝癌作用以及可能的药理作用机制.方法 用不同浓度的猪牙皂皂苷分别处理体外培养的肝癌H22细胞,检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达水平,检测内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸处理后对内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达的影响;研究比较不同药物处理组的体外抗肝癌作用;检测不同药物处理组对肝癌细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表达的影响.结果 猪牙皂皂苷能够激活肝癌细胞的内质网应激;猪牙皂皂苷与索拉非尼联用在体外抗肝癌药理实验中具有协同增效作用,能够提高肝癌细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达水平;猪牙皂皂苷与索拉非尼联用的药效作用受牛磺熊去氧胆酸的影响.结论 猪牙皂皂苷可通过内质网应激途径协同增强索拉非尼的抗肝癌作用,提高肝癌细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达水平.