目的:建立H5N1假病毒的体内感染模型，并对抗体FHA3的体内中和活性进行鉴定。方法:依据A/Anhui/1/2005/H5N1毒株血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的序列信息，构建重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1，并与质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染293T细胞制备H5N1假病毒上清，电镜观察上清中假病毒颗粒形态。假病毒上清感染MDCK细胞后，测定病毒滴度；经腹腔注射入BALB/c小鼠体内，在感染后2、5、8、12 d进行生物发光成像，检测假病毒体内感染情况。利用建立的小鼠感染模型，评价抗体FHA3的体内功能活性。结果:重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1构建正确，与pNL4-3.Luc.R-E-质粒共转染293T细胞可制备出高滴度的假病毒上清，电镜下可见圆形的病毒颗粒。H5N1假病毒感染后，小鼠体内发出较强的荧光，而攻毒前给予抗体FHA3处理可减弱其荧光信号。结论:成功构建出H5N1假病毒体内感染模型，并证实抗体FHA3对假病毒的感染具有体内保护作用。

目的:探讨阻断阴茎血液回流对干细胞治疗大鼠阴茎勃起功能障碍（ED）的细胞滞留、勃起功能改善及组织病理变化的影响。方法:采用随机数法将30只雄性SD大鼠分为假手术组（6只）、ED模型组（6只）、治疗组A（9只，阻断阴茎根部血液回流）及治疗组B（9只，不阻断阴茎根部血液回流）。模型建立24 h后，治疗组A及治疗组B经海绵体注射总细胞数量为1×10 6的脂肪干细胞（ADSCs）。干细胞注射前，治疗组A暂时性阻断阴茎血液回流，并于注射后5 min放开。注射后，检测阴茎局部生物发光信号动态变化及肺内信号。注射28 d后，检测最大海绵体内压/平均动脉压（ICP max/MAP），评估阴茎勃起功能，并观察组织病理变化。 结果:治疗组A与治疗组B相比，各时间点（0、10、60 min）大鼠阴茎内生物发光信号强度（×10 6·p·s -1·sr·cm -2）差异均无统计学意义（8.76±1.17比8.16±1.12，6.45±1.47比6.72±0.69，3.77±0.30比3.36±1.06，均 P>0.05）。注射60 min后，治疗组A与治疗组B均能在肺脏观察到大量ADSCs聚集；不论是否阻断阴茎血液回流，ADSCs对阴茎勃起功能（ICP max/MAP为0.44±0.11比0.43±0.07）及组织病理变化（平滑肌/胶原比值为0.08±0.02比0.08±0.03）改善情况不显著，差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:暂时性阻断阴茎血液回流对提高干细胞在大鼠阴茎内滞留及改善ED治疗效果无明显优势。

目的:构建靶向肿瘤间质癌相关成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein，FAP)的第2代和第4代CAR-T细胞，并比较两者在体内外的性能差异。方法:ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子分泌情况；手工计数检测其增殖存活能力；Transwell迁移试验检测其趋化性能；流式细胞术检测其亚型分布；荧光素酶生物发光法检测其杀伤效率；小鼠肺癌转移模型评估其安全性和有效性。结果:第2代h4BBz CAR-T细胞的CAR表达率为(74.280±4.384)%，第4代h4BBz-7.19 CAR-T为(67.220±4.013)%；h4BBz-7.19 CAR-T细胞能够分泌IL-7和CCL19，使其在体外的增殖能力和趋化能力较h4BBz CAR-T细胞强，存活能力相当。在亚型分布中，两种CAR表达率在CD4 ＋ T细胞群和CD8 ＋ T细胞群中均无显著性差异，但h4BBz-7.19 CAR-T细胞中的Naive和T记忆干细胞(T memory stem cell, TSCM)亚群在CD4 ＋ T细胞群或CD8 ＋ T细胞群中所占比例均较h4BBz CAR-T细胞高。在杀伤试验中，h4BBz-7.19 CAR-T细胞在低效靶比时显示出较h4BBz CAR-T细胞更强的杀伤效率(效靶比为1∶1、2∶1、5∶1、10∶1、20∶1时的 P值分别为： P1∶1＝0.004、 P2∶1＝0.000 6、 P5∶1<0.000 1、 P10∶1＝0.022、 P20∶1＝0.116)，且其T细胞表面免疫抑制分子PD-1的表达水平较h4BBz CAR-T细胞低。在NOG小鼠肺癌转移模型中，h4BBz-7.19 CAR-T组小鼠的肿瘤生长较对照组缓慢，其生存时间更长( P＝0.003 8)，且对小鼠体重和脏器无影响。 结论:本研究构建的靶向FAP的第4代CAR-T细胞通过分泌IL-7和CCL19增强增殖存活、渗透趋化和特异性杀伤活性，并可在一定程度上通过改善肿瘤免疫抑制性微环境以延缓肿瘤生长、延长生存时间，从而为其在临床上的应用提供参考。

目的:分析在第二代嵌合抗原受体(CAR)的基础上设计的同时分泌白细胞介素7(IL7)和趋化因子19(CCL19)的第四代嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)，在多发性骨髓瘤微环境中增殖、趋化、清除肿瘤细胞和持久性等方面的能力。方法:通过2A自剪切肽技术构建第四代CAR载体质粒，采用第三代慢病毒包装系统制备高滴度慢病毒，通过流式细胞术检测慢病毒转导效率和CAR-T细胞亚型的变化；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CAR-T细胞中IL7和CCL19的分泌情况；手工计数法分析CAR-T细胞在培养过程中的增殖活性；Transwell迁移实验验证CAR-T细胞趋化能力；荧光素酶生物发光法检测CAR-T细胞特异性杀伤活性；小鼠异体移植模型验证CAR-T细胞体内抗骨髓瘤活性和安全性。结果:流式细胞术结果显示，抗CS1 CAR-T和抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞CAR的表达率分别为(91.50±0.29)%和(46.70±0.12)%，表明CAR-T细胞构建成功。亚型分析显示，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞中T记忆干细胞(TSCM)的比例为(67.58±0.59)%，高于抗CS1 CAR-T[(50.74±1.01)%， P＝0.000 1]，具有更强的免疫记忆功能，持久性更佳。抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞较对照组(MOCK-T)和抗CS1 CAR-T组能够持续分泌IL7和CCL19( P<0.000 1)。抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞在慢病毒转导后的第9天细胞数达到(22.77±0.79)×10 6个，高于抗CS1 CAR-T细胞[(9.40±0.79)×10 6个， P＝0.000 1]，具有更强的增殖能力。Transwell迁移实验中，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞对于反应T细胞的趋化细胞数为(109.00±4.04)个/视野，高于对照组和抗CS1 CAR-T组[分别为(9.33±1.20)个/视野和(7.33±0.88)个/视野，均 P<0.000 1]，具有更强的趋化能力。杀伤实验结果显示，与对照组细胞比较，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T和抗CS1 CAR-T均具有特异性的杀伤效能( P<0.000 1)。动物实验表明，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞降低了荷瘤小鼠的肿瘤负担( P<0.000 1)，并延长了总生存时间( P＝0.006 1)。 结论:第四代抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞在不影响体内外抗骨髓瘤活性的情况下，有着更强的增殖活性、趋化能力和持久性，为克服传统CAR-T细胞存活率低下、持久性差以及受肿瘤微环境抑制等缺陷提供了策略，为第四代CAR-T细胞的临床应用提供了前期实验依据。

目的:利用生物发光成像活体动态示踪人骨髓间充质干细胞（MSCs）小鼠体内移植后对损伤肝的趋向迁移及其治疗作用。方法:通过基因转染将CMV-Luciferase2-mKate2导入MSCs，96 h后运用流式细胞仪对表达远红外荧光蛋白mKate2的MCSs进行纯化筛选，得到基因转染的MSCs-R（MSCs-CMV-Luciferase2-mKate2）用于体外和活体生物发光成像。将小鼠（雄性BALB/c裸鼠）用随机数目表法分为4组，每组9只。（1）肝损伤实验组：以CCl 4腹腔注射建立肝损伤模型，24 h后进行脾脏MSCs-R移植；（2）对照实验组：腹腔注射同等体积磷酸缓冲液（PBS），24 h后进行脾脏MSCs-R移植；（3）肝损伤组：建立肝损伤模型，脾脏注射PBS；（4）空白组：腹腔注射PBS。移植后每天对小鼠进行生物发光成像，直至肝区光信号消失，在第14天对肝脏组织进行病理学研究。光信号强度与细胞数量的相关性采用线性回归分析，肝损伤实验组和对照实验组间光信号强度的比较采用独立样本 t检验。 结果:CMV-Luciferase2-mKate2慢病毒感染MSCs 96 h后，经过纯化筛选其蛋白mKate2表达率高于95%。体外实验显示MSCs-R细胞生物发光信号强度与细胞数量呈线性正相关（R 2=0.980）。MSCs-R脾内移植后第1天肝损伤实验组和对照实验组均可见干细胞迁移至肝脏，肝损伤实验组的肝区光信号强度明显高于对照实验组（ t=15.476， P<0.001）。对照实验组小鼠肝区生物发光信号持续5 d，肝损伤实验组光学信号持续11 d，其他2组无光学信号。组织病理学显示肝损伤实验组小鼠MSCs-R体内移植后肝损伤程度明显减轻。 结论:生物发光成像可动态示踪脾内移植的MSCs定向迁移并定居在受损肝脏内，肝损伤有助于MSCs定向迁移至损伤组织并发挥其修复肝损伤的作用。

目的:建立西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)假病毒的体内感染模型，并对抗体WNV-XH1进行体内中和活性评价。方法:利用前期建立的可包装WNV假病毒的稳定细胞株制备假病毒上清，将上清浓缩后感染BHK21细胞检测假病毒滴度。假病毒经腹腔注入C57BL/J小鼠体内后进行生物发光成像，观测小鼠体内假病毒感染情况。同时感染后取血，ELISA检测小鼠血清中NS1水平。利用建立的小鼠感染模型，评价抗体WNV-XH1的体内功能活性。结果:C57BL/J小鼠感染WNV假病毒后，体内可检测到荧光，且感染假病毒的小鼠与未感染的小鼠相比外周血血清中WNV非结构蛋白NS1水平明显升高(1.453±0.09vs0.305±0.018)。攻毒前静脉给予抗体WNV-XH1后，小鼠体内荧光信号减弱，血清中NS1水平下降(0.384±0.015)。结论:成功建立WNV假病毒体内感染模型，并证实抗体WNV-XH1在体内对WNV假病毒的感染具有保护作用。

目的:观察布鲁菌外膜蛋白（OMP）16脂化型（L16）和非脂化型（U16）对成骨细胞的毒力效应。方法:利用大肠埃希菌BL21（DE3）原核表达系统制备L16和U16重组蛋白，并使用镍柱纯化。采用成组设计，利用小鼠成骨细胞系（MC3T3细胞）分别与L16和U16重组蛋白共孵育（L16、U16刺激组），以布鲁菌脂多糖（LPS）刺激物为阳性对照（LPS对照组），未加任何刺激的细胞作为阴性对照，孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力；离心收集培养细胞上清，生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶（LDH）的释放率，评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用；进一步使用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率，以及通过免疫印迹法（WB）检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果:L16刺激组细胞活力[（56.16±1.63）%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[（97.02±1.44）%、（98.64±0.90）%， P均< 0.01]，LDH释放率[（84.64±0.96）%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[（34.82±3.41）%、（26.75±1.95）%， P均< 0.01]。Annexin Ⅴ-PE/7-AAD染色结果显示，L16刺激组细胞凋亡率为（46.45±2.19）%，而其余组均< 1%。WB结果显示，L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3，而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。 结论:L16能诱导成骨细胞的凋亡，使成骨细胞的增殖受到抑制，而U16的作用不明显，具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。

目的:探讨核转录因子红系2相关因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor 2, Nrf2）信号通路在硫化氢（hydrogen sulfide, H 2S）减轻新生鼠缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathy, HIE）中的作用。 方法:36只7日龄C57BL野生型（wild type, WT）小鼠和36只7日龄Nrf2基因敲除（knock out, KO）小鼠分别按随机数字表法分为野生型对照组（WT-Con组）、Nrf2基因敲除对照组（KO-Con组）、野生型模型组（WT-HI组）、Nrf2基因敲除模型组（KO-HI组）、野生型模型+NaHS组（WT-NaHS组）和Nrf2基因敲除模型+NaHS组（KO-NaHS组），每组12只。结扎一侧颈总动脉后缺氧环境中处理2 h复制小鼠HIE模型，腹腔注射3 mg/kg NaHS干预。缺氧缺血（hypoxic and ischemic, HI）后24 h，收集小鼠全脑组织，应用H-E染色检测神经元损伤情况，JC-1法检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential, MMP），酶标仪检测活性氧（reactive oxygen species, ROS）释放，Clark氧电极检测呼吸率（respiration3/respiration4, R3/R4），生物发光法检测ATP含量，Western blot检测B淋巴细胞瘤-2蛋白（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-Associated X, Bax）、血红素氧合酶（heme oxygen, HO）-1、硫氧还蛋白（thioredoxin, Trx）-1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）、Nrf2和组蛋白（Histone）3。分别在HI后4周和6周，应用Y迷宫检测小鼠学习记忆能力。结果:与WT-Con组比较：WT-HI组小鼠存活神经元明显减少（ P<0.05）；Bax、Nrf2、HO-1和Trx-1表达增加（ P<0.05），Bcl-2表达减少（ P<0.05）；MMP、线粒体呼吸率（R3/R4）和ATP水平降低（ P<0.05），ROS释放增加（ P<0.05）；交替次数百分比和新异臂停留时间减少（ P<0.05）。与WT-HI组比较：WT-NaHS组小鼠存活神经元增加（ P<0.05）；Bax表达减少（ P<0.05），Bcl-2、Nrf2、HO-1和Trx-1表达增加（ P<0.05）；MMP、线粒体呼吸率和ATP水平增加（ P<0.05），ROS释放减少（ P<0.05）；交替次数百分比和新异臂停留时间增加（ P<0.05）。与WT+NaHS组比较：KO+NaHS组存活神经元明显减少（ P<0.05）；Bax表达增加（ P<0.05），Bcl-2、Nrf2、HO-1和Trx-1表达减少（ P<0.05）；MMP、线粒体呼吸率和ATP水平降低（ P<0.05），ROS释放增加（ P<0.05）；交替次数百分比和新异臂停留时间减少（ P<0.05）。 结论:NaHS通过激活Nrf2信号通路发挥对HI导致的学习记忆和神经元存活的保护作用。

阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）病因复杂，目前仍在寻找有效的治疗方法。其独特的病理生理特征和神经调控机制，成为了基因治疗的基础。基因治疗以其微创、高效、精准、可控等优点，除了在传统的神经精神疾病中广为应用之外，目前在OSA相关领域中也取得了重要研究进展。为此，本文简要介绍了基因治疗应用于OSA的神经调控基础，汇总了化学遗传学、光遗传学、生物发光-光遗传学在OSA研究中所取得的具体进展，并对基因治疗应用于OSA的局限性进行了探讨，以期为后续OSA相关研究工作提供新的思路。

目的:应用小动物活体成像系统Spectrum-CT对3种不同方式建立的人肺肿瘤裸鼠原位移植瘤模型进行实时监测和生物学特性比较，为肺癌研究提供更有价值的实验动物模型。方法:构建稳定表达荧光素酶的人肺癌A549细胞株（A549-Luc），应用胸腔注射法、尾静脉注射法和气管灌流法将A549-Luc细胞分别接种于裸鼠（每组6只），建立人肺癌原位移植瘤模型。应用Spectrum-CT活体成像系统对3组模型鼠进行生物发光成像，监测肿瘤组织的生长情况和荧光信号强度，每周1次，连续监测4周，最后解剖裸鼠肺组织进行体外发光成像和病理学分析。结果:生物发光成像分析结果显示，3种模型鼠移植瘤组织均持续生长，建模第4周，胸腔注射组模型鼠的荧光信号强度值[（2.78±0.18）×10 6 P/s]强于气管灌流组[（1.45±0.20）×10 6 P/s]和尾静脉注射组[（1.35±0.14）×10 6 P/s]（F=62.53，P<0.01）；3D活体成像分析显示，3组模型鼠肺癌移植瘤组织呈不同的生长状态，胸腔注射法模型鼠呈右侧肺叶接种位点处单点肿瘤灶生长，气管灌流法模型鼠肿瘤灶呈左右两侧肺叶不确定多点生长模式，尾静脉注射法模型鼠肿瘤灶相对较为均匀地分布在左右两侧肺叶上。 结论:与气管灌流法和尾静脉注射法模型鼠比较，胸腔注射法原位肺肿瘤模型成瘤更快，在开展移植瘤主动定位研究方面存在优势；结合使用Spectrum-CT活体成像系统，在原位肺肿瘤模型建立的早期阶段就可以对移植瘤组织的生长情况进行实时定位和定量分析，可为肺癌发病机制和药学研究提供有价值的实验材料。