目的:探究过硫谷胱甘肽（glutathione persulfate，GSSH）是否可以改善雄性肥胖小鼠的低睾酮水平，并探讨其作用机制。方法:将45只小鼠平均分为3组，低脂饮食（low-fat diet，LFD）组：喂LFD 10周，随后45 d继续LFD同时每天腹腔注射生理盐水（normal saline，NS），记为LFD+NS组（ n=15）；高脂饮食（high-fat diet，HFD）组：喂HFD 10周，随后45 d继续HFD同时每天腹腔注射NS，记为HFD+NS组（ n=15）；HFD+GSSH组（ n=15）：HFD 10周，随后45 d HFD同时每天腹腔注射GSSH（200 mg/kg）。处理结束后所有小鼠眼眶取血，断颈处死小鼠并解剖取出睾丸，分别用ELISA、qPCR以及Western blotting的方法检测小鼠血清睾酮和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平、睾酮关键合成酶（StAR、3β-HSD、Cyp11a1、Cyp17a1）以及抗氧化蛋白（StAR、3β-HSD、NR5A1、EHD3）表达水平等。此外，用100 μmol/L的GSSH处理小鼠睾丸碎片后检测睾酮合成酶表达水平。最后用50 μmol/L和100 μmol/L的GSSH分别处理小鼠睾丸间质TM3细胞株24 h后，加入100 μmol/L的H 2O 2，继续培养TM3细胞24 h，然后收集细胞检测NR5A1、SOD与Nrf2蛋白表达水平。 结果:①给药结束后，LFD+NS组、HFD+NS组与HFD+GSSH组小鼠的体质量分别是（30.67±1.22）g、（40.43±1.56）g、（33.30±0.95）g；HFD+NS组体质量增加了24.53%，给药前后差异有统计学意义（ P=0.002），而LFD+NS组、HFD+GSSH组的体质量在给药前后差异均无统计学意义（均 P>0.05）。②HFD+NS组小鼠睾酮浓度为（12.9±1.7）μg/L，显著低于LFD+NS组［（18.3±1.2）μg/L］，差异有统计学意义（ P=0.020）；HFD+GSSH组小鼠睾酮浓度为（25.4±2.1）μg/L，显著高于HFD+NS组，差异有统计学意义（ P=0.030）。RT-PCR检测结果显示，与LFD+NS组小鼠相比，HFD+NS组小鼠睾丸所有被检测的睾酮合成关键基因（ StAR、3β- HSD、 Cyp11a1及 Cyp17a1）表达水平都显著下降（ P=0.003、 P=0.007、 P<0.001、 P<0.001）。这些基因的表达水平则在HFD+GSSH组小鼠睾丸中得到了恢复（ P=0.002、 P<0.001、 P<0.001、 P=0.006）。③与LFD+NS组小鼠［（9.00±1.59）nmol/mL］相比，HFD+NS组小鼠血清MDA水平［（10.61±1.73）nmol/mL］显著升高（ P=0.016）；与HFD+NS组小鼠相比，HFD+GSSH组小鼠血清MDA水平［（9.23±0.94）nmol/mL］下降，且具有统计学意义（ P=0.048）。④HFD+NS组的肥胖小鼠睾丸中NR5A1、EHD3、StAR与3β-HSD蛋白水平与LFD+NS组小鼠相比明显下调（ P=0.002、 P=0.012、 P=0.004、 P=0.043），HFD+GSSH组小鼠睾丸中NR5A1、EHD3、StAR与3β-HSD蛋白水平与HFD+NS组的肥胖小鼠相比则显著上升（ P<0.001、 P=0.017、 P=0.004、 P<0.001）。⑤TM3细胞在H 2O 2的存在下，NR5A1、Nrf2与SOD的表达水平皆发生显著下调（ P<0.001、 P=0.002、 P=0.004）。 结论:GSSH通过提高睾酮合成所需关键基因表达而改善HFD喂养的雄鼠睾酮水平。

目的:探讨连续重复给予含左炔诺孕酮（levonorgestrel，LNG）紧急避孕药（emergency contraception pills，ECPs）对雌性大鼠生育力及其F1代仔鼠健康的影响。方法:成年SPF级雌性大鼠于每个动情周期连续给予3次LNG-ECPs，分别给予3个（P-3）、6个（P-6）和12个（P-12）动情周期。雌性大鼠每个给药时程下，采用Excel产生随机数按体质量分层随机分为2组，分别为LNG-ECPs组和溶媒对照组，分别灌胃给予0.12 mg/kg LNG-ECPs和等体积溶媒。各组于末次给药后4 h分别取1/2动物（12~18只）进行解剖（6~9只）和交配（6~9只）；剩余1/2动物（12~18只）于停药恢复3个动情周期后再分别进行解剖（6~9只）和交配（6~9只），计算脏器系数。采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测雌性大鼠血清中卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（lutenizing hormone，LH）、雌激素、孕激素、睾酮、抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）以及游离甲状腺激素3（free thyroid hormone，fT3）的水平。雌性大鼠卵巢组织切片苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色后进行卵泡计数。记录LNG-ECPs给药结束和停药恢复期雌性大鼠妊娠率及窝仔数，测定F1代仔鼠生长指数以及主动和被动运动能力等指标。取P-12大鼠卵巢组织进行转录组学测序，建立LNG-ECPs致卵巢差异表达基因谱，分析LNG-ECPs致卵巢损伤的差异基因，并进行基因本体（gene ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。结果:①连续给予3个和6个动情周期后，LNG-ECPs组雌鼠的血清激素水平和生育力与溶媒对照组相比，差异均无统计学意义（均 P>0.05）；F1代仔鼠生长指数和行为学结果与溶媒对照组仔鼠相比差异均无统计学意义（均 P>0.05）。②连续给予12个动情周期后，与溶媒对照组相比，LNG-ECPs组大鼠血清中FSH［（0.21±0.17）U/L］、LH［（0.27±0.08）U/L］和孕激素［（0.68±0.23）μg/L］水平显著低于溶媒对照组［（1.00±0.82）U/L， P=0.043；（1.00±0.50）U/L， P=0.006；（1.00±0.20）μg/L， P=0.027］，雌二醇［（2.24±1.03）μg/L］和睾酮［（1.25±0.25）μg/L］水平明显高于溶媒对照组［（1.00±0.35）μg/L， P=0.019；（1.00±0.07）μg/L， P=0.044］；卵巢中原始卵泡数量（4.88±2.36）显著少于溶媒对照组（16.13±9.36， P=0.005），闭锁卵泡数量（24.38±5.01）显著高于溶媒对照组（19.13±2.30， P=0.018）；LNG-ECPs组中F1代仔鼠负重游泳时间［（157.13±32.29）s］明显低于溶媒对照组［（198.06±40.01）s， P=0.003］。停药恢复3个动情周期后，LNG-ECPs可造成大鼠血清中FSH［（2.48±1.18）U/L］、LH［（1.60±0.41）U/L］、睾酮［（1.37±0.23）μg/L］及FSH/LH值（1.61±0.41）显著高于溶媒对照组［（1.00±0.67）U/L， P=0.024；（1.00±0.27）U/L， P=0.014；（1.00±0.18）μg/L， P=0.011；1.00±0.49， P=0.042］，且雌激素水平［（0.49±0.15）μg/L］和AMH水平［（0.79±0.15）μg/L］显著低于溶媒对照组［（1.00±0.37）μg/L， P=0.011；（1.00±0.10）μg/L， P=0.016］，同时，大鼠卵巢中原始卵泡数量（6.25±5.06）仍显著少于溶媒对照组（12.00±5.56， P=0.048）；F1代仔鼠在旷场中的运动总距离［（89.85±36.98）m］以及负重游泳时长［（112.00±29.52）s］均显著低于溶媒对照组［（147.55±23.13）m， P<0.001；（137.69±25.85）s， P=0.014］。③转录组测序结果表明，与溶媒对照组相比，LNG-ECPs组雌性大鼠卵巢组织中存在 Cd5、 Cxcr1、 Lexm、 Fga、 Mybphl和 Gstm5等显著差异表达的基因，参与萜类骨架生物合成、卵巢类固醇生成和皮质醇的合成与分泌等类固醇激素合成相关过程，还涉及碳代谢、丁酸甲酯代谢和半胱氨酸等物质代谢过程，以及细胞因子-细胞因子受体相互作用、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用等免疫调节过程。 结论:在雌性大鼠中，短期重复（<12个周期）给予LNG-ECPs对雌鼠生育力及其F1代仔鼠生长发育和行为学未见明显影响；而长期重复（12个周期）给予LNG-ECPs会导致卵巢功能损伤，并会对F1代仔鼠的健康产生负面影响，停药恢复3个动情周期后仍未见明显改善。

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)分析苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠血清中内源性标志物的影响,并结合网络药理学研究其发挥药效的作用通路.方法 将40只大鼠随机分为正常组、模型组、达英-35组和苍附导痰组,每组10只.采用来曲唑法诱导多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,造模成功后,达英-35组给予达英-35灌胃,苍附导痰组给予苍附导痰汤灌胃,每天1次,连续28 d.ELISA法检测大鼠血清促卵泡生长激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)含量差异水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠卵巢组织病理形态学变化;采用UHPLC-QE-MS分析各组大鼠血清样品,基于主成分分析法(PCA)及正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)筛选出相关差异代谢物,并依据MetaboAnalyst数据库查询相关代谢通路.采用网络药理学探究苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的关键靶点,使用KEGG数据库富集分析作用通路,并借助MetScape插件构建"代谢物-反应-酶-基因"网络.结果 与正常组相比,模型组大鼠血清中FSH含量明显上升(P＜0.05),LH、T、E2含量显著上升(P＜0.01);与模型组相比,达英-35组大鼠血清中LH、T、E2含量显著降低(P＜0.01),苍附导痰组大鼠血清中T明显降低(P＜0.05),LH、E2含量显著降低(P＜0.01).与模型组比较,达英-35组和苍附导痰组大鼠卵巢组织形态明显改善;代谢组学筛选15个苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的差异代谢物,涉及类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等途径.网络药理学分析显示苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的核心靶点为AKT1、ESR1、EGFR等,KEGG富集显示涉及内分泌抵抗、类固醇合成、雌激素信号通路等;采用MetScape插件构建"代谢物-反应-酶-基因"网络,发现6个关键靶点CYP1B1、CYP19A1、AKR1C1、AKR1C3、HSD17B1、HSD17B2,以及涉及类固醇激素生物合成通路.结论 苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠显示出潜在的治疗作用,这可能与其对类固醇激素合成代谢路径的调节作用有关,治疗的内源性标志物包括17a-羟基孕烯醇酮、孕酮、皮质酮,这些指标有助于监测治疗效果.

该研究从滇重楼中克隆得到糖基转移酶基因PpUGT2,该基因ORF长度为1773 bp,编码蛋白质的氨基酸为590个.系统进化树分析显示,该糖基转移酶归为UGT80A亚家族,经国际糖基转移酶命名委员会命名为UGT80A49.构建原核表达载体pET28a-PpUGT2,通过诱导蛋白表达及蛋白提取,进行体外酶促实验,以UDP-葡萄糖为糖基供体,薯蓣皂素和偏诺皂素为底物,鉴定了其具有催化薯蓣皂素及偏诺皂素C-3 羟基β糖基化的功能,为进一步研究其催化特性,对其进行了底物宽泛性研究,以UDP-葡萄糖为糖基供体,共选取了包括甾体及三萜类化合物在内的15 个底物,发现其具有催化甾体类化合物睾酮C-17 羟基糖基化的功能.通过同源建模及分子对接,预测了PpUGT2与底物薯蓣皂素及偏诺皂素之间相互作用的关键识别位点.并且通过对配体与多肽的氨基酸扫描,模拟突变,根据复合物的结合亲和力变化,在以底物为中心的5 ?范围内,寻找到了最佳突变体,对突变体的设计具有参考意义.该研究为完整解析重楼皂苷生物合成途径以及甾体类糖基转移酶的结构研究奠定了基础.

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者及非PCOS不孕症患者卵泡液基因表达谱的差异,旨在阐明长链非编码(Lnc)RNA参与PCOS发病过程中的可能机制.方法 选取2017年1月1日至5月30日,6例不孕症患者在江苏省苏北人民医院接受辅助生殖技术治疗过程中所产生的卵泡液为研究对象.根据是否为PCOS患者,将其分为PCOS组(n=3)和非PCOS组(n=3).采用独立样本t检验,对受试者年龄、不孕年限、人体质量指数(BMI)、促黄体激素(bLH)、基础卵泡刺激素(bFSH)、雌二醇、睾酮、空腹血糖(FBG)、催乳素、抗苗勒管激素(AMH)水平等呈正态分布的计量资料进行组间比较.采用Mann-WhitneyU秩和检验,对LncRNA与信使RNA(mRNA)表达水平[百万外显子的碱基片段(FPKM)值]、LncRNA与mRNA的长度等非正态分布的计量资料进行分析.本研究遵循的程序符合江苏省苏北人民医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准.结果 ①本研究2组患者年龄、不孕年限、BMI、bLH、bFSH、雌二醇、睾酮、FBG、催乳素、AMH水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②2组患者LncRNA与mRNA的中位表达水平分别为0.455 FPKM(0.035～1.291 FPKM)和0.848 FPKM(0.315～1.735 FPKM),组间比较,差异有统计学意义(U=0.041,P=0.032 3).③LncRNA的中位长度为654 bp (499～1 069 bp),mRNA的中位长度为1 517 bp(709～2 818 bp),二者比较,差异无统计学意义(U=0.038,P=0.051 4).④与非PCOS患者比较,PCOS患者卵泡液LncRNA差异表达基因共计1 866个,其中表达水平上调的基因为1 253个,下调基因为613个.⑤基因本体(GO)富集分析中排序优先的功能有:腺嘌呤代谢过程、腺嘌呤生物合成过程、三磷酸胞苷生物合成过程等.⑥排序优先的京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路有:人类嗜T淋巴细胞病毒感染、嘌呤代谢、嘧啶代谢、趋化因子、氨基酸的生物合成、哮喘、RNA聚合酶、范可尼贫血等,主要涉及细胞生物合成、蛋白合成、细胞组分合成等生物学功能.结论 PCOS组及非PCOS组不孕症患者LncRNA和mRNA转录水平明显改变,提示PCOS患者卵泡液内多项生物学功能及信号通路的变化在其中发挥重要作用.

目的 观察苯并[a]芘-7,8-二醇-9,10-环氧化物(benzo[a]pyrene-r-7,t-8-dihydrodiol-t-9,10-epoxide(±),(anti),BPDE)对睾丸间质细胞睾酮生成的影响,并围绕线粒体损伤探讨其作用机制.方法 使用不同浓度BPDE对小鼠睾丸间质细胞株TM3进行染毒,48 h后采用台盼蓝染色法检测TM3细胞的细胞活率.采用不引起细胞明显死亡的剂量进行后续实验.分别使用0(对照组)、25、50、100 nmol/L的BPDE处理细胞,48 h后使用睾酮ELISA试剂盒检测培养基中睾酮浓度,透射电镜观察细胞线粒体超微结构,JC-1探针检测细胞线粒体膜电位,ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平,荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝数,Western blot检测PGC-1α、COXⅣ、StAR和TSPO的表达.采用线粒体保护剂ZLN005对细胞进行预处理,检测100nmol/L BPDE染毒对上述指标的影响.结果 与对照组比较,25、50、100 nmol/L BPDE不造成TM3细胞活率的明显改变;50和100 nmol/L BPDE处理可分别导致细胞睾酮水平降低21.15％和34.96％ (P ＜0.01),并造成线粒体结构功能的改变,包括线粒体超微结构的改变,线粒体膜电位、细胞ATP水平和线粒体DNA拷贝数降低(P＜0.05).同时线粒体生物合成相关蛋白PGC-1α、线粒体功能相关蛋白COXⅣ、睾酮合成关键蛋白StAR和TSPO的表达均出现剂量依赖性降低.与100nmol/L BPDE单独染毒组比较,线粒体保护剂ZLN005预处理组细胞睾酮水平明显升高(P＜0.05),同时线粒体相关指标,包括线粒体膜电位、细胞ATP水平、线粒体DNA拷贝数、线粒体生物生成和睾酮合成关键蛋白的表达均显著上升(P＜0.05).结论 BPDE可造成TM3细胞线粒体损伤及睾酮合成水平降低,增加线粒体生物合成和保护线粒体功能可缓解BPDE所致的睾酮水平降低.

目的 探讨尼古丁抑制小鼠睾丸间质细胞株(TM3)睾酮生成中对线粒体的损伤作用.方法 尼古丁染毒处理TM3细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA检测培养液睾酮水平,NAO探针染色检测线粒体质量,荧光酶标仪检测ATP水平,QPCR方法检测线粒体DNA拷贝数,western blot分析线粒体相关蛋白及睾酮合成关键酶蛋白的表达.结果 TM3细胞活性随尼古丁染毒剂量增加而降低;与对照组细胞相比,尼古丁在1～10μM剂量范围内对细胞凋亡率无明显影响,但诱导细胞睾酮水平显著降低(P=0.022,P=0.009和P=0.007);同时细胞线粒体质量(P=0.038,P=0.008和P=0.007)、线粒体DNA拷贝数(P=0.045,P=0.032和P=0.008)以及细胞ATP水平(P=0.037,P=0.007和P=0.005)也随尼古丁染毒浓度的增加而呈降低趋势.线粒体生物合成相关蛋白PGC1-α(P=0.007、P=0.003和P=0.002)、SIRT1(P=0.043,P=0.009和P=0.004)、COX I(P=0.036和P=0.008)以及线粒体睾酮合成酶蛋白StAR(P=0.009,P=0.007和P=0.005)和CYP11A1(P=0.007和P=0.006和P=0.001)的表达均随染毒剂量的升高而降低.结论 尼古丁可抑制睾丸间质细胞TM3的睾酮生成,其机制可能与诱导细胞线粒体损伤及线粒体睾酮合成酶的表达降低有关.

锌对精子的发育成熟非常关键,而介导锌转运的锌转运体主要来自于锌转运蛋白(Zinc transporter,ZnT)和锌铁调控转运蛋白(Zrt-,Irt-like protein,ZIP)两大家族.在睾丸中,不同的锌转运体依次表达于生精细胞质膜上,参与精子发生和精子形成过程;此外,血睾屏障的维持以及睾酮的生物合成亦需要相应的锌转运体参与.附睾上皮组织高表达ZnT,附睾内精子表面有ZIP1、ZIP5、ZIP6和ZIP8,其有助于精子对锌的吸收且参与精子成熟过程.前列腺腺上皮细胞通过ZIP1吸收血液中的锌,以维持前列腺组织高锌水平;另一方面,该上皮也可通过ZIP2、ZIP3及ZIP4重吸收前列腺液中的锌,确保精浆中重要的抗氧化剂柠檬酸盐的正常分泌.综述锌及其转运体在男性(雄性)生殖中的作用对于了解其生殖过程的发生及男性不育的病理机制均有十分重要的意义.

酮康唑通过细胞色素P450依赖17,20-裂解酶的抑制作用而可逆性地阻断由17α-羟孕酮生物合成睾丸和肾上腺的雄激素.大剂量酮康唑有效地治疗前列腺播散性癌时,血浆雄激素水平下降,特别是睾酮.尽管大剂量酮康唑治疗时皮质醇水平正常,但证实对ACTH刺激肾上腺糖皮质类固醇反应减少.

芳香化酶可使雄烯二酮转化为雌酮、睾酮转化为雌二醇,是体内雌激素生物合成的限速酶.芳香化酶抑制剂本用于治疗雌激素依赖的乳腺癌患者,但因其独特的药理作用——可通过抑制雌激素合成而延缓骨龄,因此可应用于各类原因所致的身材矮小的儿童.现对其促生长作用的有效性及安全性有关研究进行综述,以2008年以后发表的文献为主.